• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    諾麗自然發(fā)酵汁中醋酸菌的分離鑒定及發(fā)酵特性

    2019-07-05 02:13:08梁叢穎劉四新李從發(fā)
    食品科學(xué) 2019年12期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)酸量生長(zhǎng)量醋酸

    梁叢穎,周 偏,張 琳,蔡 坤,劉四新,2,李從發(fā),*

    (1.海南大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,海南 海口 570228;2.海南大學(xué)理學(xué)院,海南 海口 570228)

    諾麗(Morinda citrifolia Linn.),又稱海巴戟天,系茜草科巴戟天屬植物,原產(chǎn)于太平洋島嶼、澳大利亞、東南亞以及我國(guó)的海南島、西沙群島等地[1]。早在2 000多年前,波利尼西亞土著居民就將諾麗作為民間藥物用于治療各種疾病,認(rèn)為其對(duì)糖尿病、高血壓、心臟病以及關(guān)節(jié)炎等疾病都有較好的預(yù)防和治療作用[2-4]。研究表明,諾麗果中不僅含有多糖、維生素、有機(jī)酸、多種氨基酸、生物堿等[5-6]營(yíng)養(yǎng)和功效成分,還含有豐富的礦物質(zhì),其含量占干物質(zhì)10%~12%,主要包括鎂、硫、鈣和磷等[7]。近年來(lái),隨著人們生活水平的提高,諾麗的保健功能及藥用價(jià)值逐漸得到人們的認(rèn)可,受到研究者的青睞。諾麗發(fā)酵汁(諾麗酵素)作為市場(chǎng)上主要的產(chǎn)品形式,是一類新興的功能性微生物發(fā)酵產(chǎn)品,其加工工藝主要是以傳統(tǒng)自然發(fā)酵為主[8]。在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中,微生物(酵母菌、乳酸菌和醋酸菌等)通過(guò)吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維持生命和增殖,并降解基質(zhì),使其發(fā)生一系列復(fù)雜的生物化學(xué)變化,導(dǎo)致發(fā)酵液成分發(fā)生改變,在一定程度上促進(jìn)了風(fēng)味和功能性化合物的合成[9]。

    醋酸菌是一類重要的工業(yè)微生物,通常存在于自然發(fā)酵食品及飲料中,如傳統(tǒng)發(fā)酵食品食醋、果醋、紅茶菌、蘭比可啤酒、開(kāi)菲爾和可可豆等[10-14],同時(shí)醋酸菌在VC制造工業(yè)中也發(fā)揮著重要作用。近幾年針對(duì)諾麗發(fā)酵汁的研究大多集中在其生物活性分析及活性物質(zhì)解析方面[15-16],對(duì)于諾麗自然發(fā)酵過(guò)程中發(fā)酵汁中微生物群落的分析及優(yōu)勢(shì)微生物的分離鑒定相對(duì)滯后。Wall等[17]對(duì)夏威夷諾麗自然發(fā)酵過(guò)程中微生物變化研究發(fā)現(xiàn),自然發(fā)酵至42 d時(shí)細(xì)菌數(shù)量達(dá)到峰值,且從發(fā)酵汁中分離出弗拉托葡糖桿菌(Gluconobacter frateurii)。施瑋筑[18]對(duì)諾麗自然發(fā)酵過(guò)程中菌群結(jié)構(gòu)及變化情況分析發(fā)現(xiàn),醋酸菌為諾麗自然發(fā)酵過(guò)程中的優(yōu)勢(shì)菌(僅就細(xì)菌而言),對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品的質(zhì)地、口感、風(fēng)味和顏色都有重要的影響。因此清楚醋酸菌的種類及發(fā)酵特性有助于合理控制發(fā)酵進(jìn)程,更可以有效提高諾麗發(fā)酵汁的風(fēng)味品質(zhì)。16S rRNA在原核生物中廣泛存在,功能穩(wěn)定,其所攜帶的遺傳信息可以有效的反應(yīng)生物界的進(jìn)化關(guān)系,同時(shí)操作簡(jiǎn)便,適用于各級(jí)分類單元,在系統(tǒng)分類學(xué)以及進(jìn)化研究中有著重要的應(yīng)用意義[19]。

    本研究針對(duì)諾麗自然發(fā)酵汁中的醋酸菌進(jìn)行篩選、分離純化,并利用生理生化實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步鑒定,16S rRNA同源序列分析,對(duì)比所獲得的醋酸菌與工業(yè)菌株AS1.41的發(fā)酵特性,為醋酸菌的篩選提供較好的參考,以期得到性能優(yōu)良的醋酸菌菌株,在豐富優(yōu)質(zhì)醋酸菌庫(kù)的同時(shí),為諾麗發(fā)酵汁品質(zhì)的提高以及諾麗新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)等提供支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 原料與試劑

    諾麗果于2016年11月采摘自海南省萬(wàn)寧市;醋酸菌AS1.41(惡臭醋酸桿菌)來(lái)自廣東微生物菌種保藏中心。

    十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、Tris-HCl、乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA) 上海生物工程科技服務(wù)有限公司;苯酚、氯仿、異戊醇、瓊脂糖 北京索萊寶科技有限公司;6×DNA loading buffer(含二甲苯菁和溴酚藍(lán)雙染料)、2×Es Taq Master Mix、D2000 DNA ladder、蛋白酶K北京康為世紀(jì)生物科技有限公司;Goldview DNA染料美國(guó)Amerco公司;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基:1.0%葡萄糖,1.0%酵母膏,pH值自然,121 ℃滅菌20 min,使用前加入3.0%(體積分?jǐn)?shù),下同)無(wú)水乙醇。

    產(chǎn)酸定性培養(yǎng)基:同基礎(chǔ)培養(yǎng)基,121 ℃滅菌20 min,冷卻后加入5.0%乙醇。

    分離和斜面保藏培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入2.0%瓊脂,滅菌后加2.0%無(wú)菌CaCO3和3.0%乙醇,制成平板,即為分離培養(yǎng)基;基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入2.0%瓊脂,分裝于試管,滅菌后加入3.0%乙醇,擺成斜面,即為斜面保藏培養(yǎng)基。

    發(fā)酵培養(yǎng)基:2%葡萄糖,1.0%酵母膏,0.5%蛋白胨,自然pH值,121 ℃滅菌20 min,使用前加入3.0%乙醇。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SW-CJ凈化工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司;T6新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司;DYY-8C型電泳儀 北京市六一儀器廠;Biofuge primo R高速冷凍離心機(jī) 賽默飛世爾科技有限公司;A300聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)儀杭州郎基科學(xué)儀器有限公司;FA-1604電子天平 上海良平儀器儀表有限公司;LRH-250A生化培養(yǎng)箱 韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械有限公司;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋常州國(guó)華電器有限公司;ZHWY-211B恒溫培養(yǎng)振蕩器上海智城分析儀器制造有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 諾麗自然發(fā)酵

    選取新鮮成熟、無(wú)腐爛變質(zhì)、無(wú)病蟲(chóng)害的諾麗果,清洗其表面,經(jīng)無(wú)菌水洗滌并瀝干后置于無(wú)菌容器內(nèi)。置于陰暗處,室溫(22~28 ℃)自然發(fā)酵2 個(gè)月。每隔6 d在無(wú)菌環(huán)境中取樣備用。

    1.3.2 菌株的富集培養(yǎng)

    取諾麗自然發(fā)酵汁5 mL,裝入含有100 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基的三角瓶中,30 ℃、160 r/min培養(yǎng)2~3 d,即可得到初篩菌株富集培養(yǎng)液。

    1.3.3 菌株的分離純化

    選取合適稀釋度的富集培養(yǎng)液涂布于分離培養(yǎng)基平板上,于30 ℃條件下恒溫培養(yǎng)2~3 d后觀察,每個(gè)梯度3個(gè)重復(fù)。根據(jù)菌落形態(tài)特征及碳酸鈣溶菌圈的大小挑取長(zhǎng)勢(shì)良好的單菌落。采用劃線法進(jìn)行分離純化,通過(guò)革蘭氏染色鏡檢初步確認(rèn)是否為疑似醋酸菌菌株,接種于斜面保藏培養(yǎng)基,30 ℃培養(yǎng)2 d后于4 ℃的冰箱中保藏。

    1.3.4 醋酸菌的定性實(shí)驗(yàn)

    取培養(yǎng)2 d的醋酸產(chǎn)生菌及參照菌AS1.41進(jìn)行生理生化實(shí)驗(yàn),具體鑒定方法和依據(jù)參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[20]。

    1.3.5 醋酸菌的16S rRNA鑒定

    醋酸菌基因組DNA的提取按照參考CTAB法[21-23]。

    PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳后,置于紫外燈下觀察,若出現(xiàn)清晰的條帶,并且無(wú)明顯非特異性擴(kuò)增,即判斷PCR成功。由上海英濰捷基有限公司完成測(cè)序工作。利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù),進(jìn)行BLAST同源性對(duì)比分析,選擇與目的基因序列同源性最高的序列,選取不同的模式菌株,采用MEGA7.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

    1.3.6 醋酸菌發(fā)酵性能的測(cè)定

    1.3.6.1 菌株生長(zhǎng)曲線測(cè)定

    將菌株挑取1 環(huán)接種于50 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,30 ℃、160 r/min的搖床中培養(yǎng),每隔6 h測(cè)定菌株的生長(zhǎng)量。

    1.3.6.2 菌株耐受性的測(cè)定

    耐高溫性能測(cè)定:將篩選鑒定出的所有醋酸菌活化后接入發(fā)酵培養(yǎng)基中,分別在28、31、34、37、40 ℃的條件下?lián)u床培養(yǎng)72 h,轉(zhuǎn)速160 r/min,每隔12 h測(cè)量菌株的生長(zhǎng)量及產(chǎn)酸量,每株醋酸菌3 個(gè)重復(fù)。

    耐乙醇性能測(cè)定:將篩選鑒定出的所有醋酸菌活化后接入發(fā)酵培養(yǎng)基中(乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為1%、3%、5%、7%、9%),在30 ℃、160 r/min的條件下?lián)u床培養(yǎng)72 h,每隔12 h測(cè)定生長(zhǎng)量和產(chǎn)酸量,每株醋酸菌3 個(gè)重復(fù)。

    1.3.7 菌株生物量及產(chǎn)酸量的測(cè)定

    生物量測(cè)定以O(shè)D600nm值表示;產(chǎn)酸量測(cè)定參照GB/T 12456—2008《食品中總酸的測(cè)定》[24],以乙酸計(jì)算總酸量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 醋酸菌的分離純化

    以諾麗自然發(fā)酵汁為樣本,按照1.3.1、1.3.2節(jié)方法進(jìn)行菌株富集培養(yǎng)和分離純化,共得到67 株供試菌株。通過(guò)革蘭氏染色鏡檢結(jié)果排除21 株革蘭氏陽(yáng)性菌株,見(jiàn)圖1。從剩下的46 株菌種中挑選24 株進(jìn)行生理生化試驗(yàn),結(jié)果表明該24 株菌種均為過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性,且醋酸菌定性實(shí)驗(yàn)均有紅褐色沉淀,為醋酸菌疑似菌株。

    圖1 菌株革蘭氏染色鏡檢圖Fig. 1 Microscopic pictures of Gram-stained bacterial strains

    2.2 16S rRNA的鑒定

    2.2.1 菌株DNA的提取及PCR擴(kuò)增結(jié)果

    將初步篩選出的醋酸菌進(jìn)行DNA提取及PCR擴(kuò)增,其擴(kuò)增后的部分電泳結(jié)果如圖2所示。

    圖2 菌株16S rRNA PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖Fig. 2 Agarose gel electrophoresis of 16S rRNA PCR amplification products from suspicious strains of acetic acid bacteria

    由圖2可知,所有醋酸菌疑似菌株16S rRNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的片段大小均在1 500 bp左右,且擴(kuò)增條帶非常清晰明亮可見(jiàn),無(wú)明顯非特異性擴(kuò)增,故該P(yáng)CR產(chǎn)物可滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。

    2.2.2 16S rRNA 序列同源分析鑒定利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù),將篩選和鑒定的菌株的16S rDNA序列進(jìn)行BLAST分析,選擇準(zhǔn)確率在98%及以上的分析結(jié)果作為鑒定結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)鑒定菌株的16S rRNA基因序列同源分析,成功鑒定出24 株醋酸菌,分別編號(hào)為N1~N24,如表1所示。從諾麗發(fā)酵汁中共鑒定出醋酸桿菌屬(Acetobacter)和葡糖桿菌屬(Gluconobacter)兩大類,包括可可豆醋酸桿菌A. fabarum(9 株)、蒲桃醋酸桿菌A. syzygii(7 株)、巴氏醋酸桿菌A. pasteurianus(2 株)、熱帶醋酸桿菌A. tropicalis(1 株)、蘭比可醋酸桿菌A. lambici(1 株)、日本葡糖桿菌G. japonicus(4 株)6 個(gè)種,可見(jiàn)諾麗發(fā)酵汁中醋酸菌的豐富多樣性。其中A. lambici及A. tropicalis主要存在于發(fā)酵初始階段,A. pasteurianus則在發(fā)酵2 周之后才出現(xiàn),主要存在于發(fā)酵中期,而A. fabarum、A. syzygii、G. japonicus在整個(gè)自然發(fā)酵過(guò)程中均有發(fā)現(xiàn),且A. fabarum和A. syzygii分別占菌株總數(shù)的37.5%和29.2%,表明A. syzygii和A. fabarum為諾麗自然發(fā)酵過(guò)程中的主要優(yōu)勢(shì)醋酸菌。

    表1 16S rRNA序列同源分析鑒定Table 1 Identification of isolates based on 16S rRNA sequencing

    曹艷花等[25]從諾麗原漿中分離得到A. fabarum CICC10883,發(fā)現(xiàn)其能利用葡萄糖和D-木糖發(fā)酵產(chǎn)酸。張欣等[26]從諾麗發(fā)酵果原漿中首次分離到1 株?yáng)|方醋酸桿菌(A. orientalis)CICC10881。施瑋筑[18]從諾麗自然發(fā)酵汁中得到13 個(gè)醋酸菌分離物,但未進(jìn)行明確的種屬鑒定。因此,本研究篩選出的A. fabarum、A. lambici均為首次在諾麗自然發(fā)酵汁中分離獲得。

    2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建

    選取代表菌株及其相似菌種,采用MEGA7.0軟件進(jìn)行序列分析,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),顯示各菌株的分類學(xué)地位和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,結(jié)果如圖3所示。

    圖3 醋酸菌的16S rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig. 3 Phylogenetic tree of acetobacter acid bacteria based on their 16S rDNA sequences

    由圖3可知,代表菌株在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中基本分為6 個(gè)分支:N21與A. tropicalis A77和A. tropicalis Y-1BM處于同一分支;N11與G. japonicus NBRC3271和G. japonicus HD1025為一個(gè)分支;N4與A. pasteurianus NBRC3248處于同一分支;N17與A. fabarum G2-5為一個(gè)分支;N10與A. lambici LMG27439為一個(gè)分支;N5與A. syzygii NBRC16604和A. syzygii 9H-2為一個(gè)分支。上述結(jié)果已用Bootstrap檢驗(yàn)1 000 次隨機(jī)重復(fù)驗(yàn)證支持該分支。綜合代表菌株生理生化實(shí)驗(yàn)和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析結(jié)果,可確定其代表菌株中,N21為A. tropicalis,N11為G. japonicus,N4為A. pasteurianus,N17為A. fabarum,N10為A. lambici,N5為A. syzygii,與16S rRNA序列比對(duì)分析結(jié)果一致。

    2.3 醋酸菌的發(fā)酵特性

    2.3.1 菌株的生長(zhǎng)曲線

    圖4 醋酸菌生長(zhǎng)曲線Fig. 4 Growth curves of acetic acid bacteria

    由圖4可知,7 株醋酸菌的生長(zhǎng)曲線相似,N4、N10和N11對(duì)數(shù)期為6~48 h,其他菌株的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期均在6~66 h。其中,N10生長(zhǎng)速率最快,在12 h時(shí)OD600nm值達(dá)到0.810,N21和參照菌株AS1.41生長(zhǎng)速率次之且生長(zhǎng)量最高,其次是N5、N17、N11和N4,說(shuō)明菌株N10和N21相比于其他菌株更加適應(yīng)該條件。處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種活力最強(qiáng),對(duì)外界環(huán)境因素較為敏感,代謝活躍,繁殖能力強(qiáng),此階段接種可使菌體活性達(dá)到最高[27],因此選取各菌株種子液培養(yǎng)時(shí)間為48 h。

    2.3.2 菌株的耐高溫性能

    不同種屬的醋酸菌具有不同的最適溫度。在一定的溫度范圍內(nèi),溫度的上升有利于醋酸菌的生長(zhǎng)及產(chǎn)酸代謝,但溫度過(guò)高會(huì)加快菌體老化,降低產(chǎn)酸速率,導(dǎo)致菌體內(nèi)酶結(jié)構(gòu)的破壞和酶活性的喪失,甚至直接死亡[28]。由圖5可知,7 株醋酸菌在28~40 ℃的溫度范圍內(nèi)均能生長(zhǎng),且生長(zhǎng)量和產(chǎn)酸量隨著溫度的上升呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)。N11、N17分別在28、31 ℃時(shí)生長(zhǎng)量和產(chǎn)酸量最高,而N4、N5和AS1.41的最適生長(zhǎng)溫度為34 ℃。當(dāng)培養(yǎng)溫度在28~34 ℃范圍時(shí),N4、N5、N10、N17、N21和AS1.41的生長(zhǎng)量和產(chǎn)酸量變化較小,而菌株N11相對(duì)敏感。溫度為31 ℃時(shí),菌株N21的產(chǎn)酸量在各菌株中最高,達(dá)到28.92 g/L;當(dāng)溫度升至40 ℃時(shí),7 個(gè)菌株均能維持一定程度的生長(zhǎng),但只有N21和參照菌株AS1.41依然保持較好的產(chǎn)酸性能,產(chǎn)酸量分別為14.85 g/L和16.21 g/L。表明在高溫條件下N21依然具有較高的乙醇利用率。

    圖5 溫度對(duì)7 株菌OD600 nm(A)和產(chǎn)酸量(B)的影響Fig. 5 Effect of temperature on OD600 nm (A) and acetic acid production (B) of seven strains

    Soemphol等[29]對(duì)從泰國(guó)水果中分離出的A. tropicalis SKU1100研究發(fā)現(xiàn),SKU1100具有高耐熱性,在40 ℃以上的高溫條件下仍可以較好生長(zhǎng)。此外,將熱帶醋酸桿菌應(yīng)用于羅非魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中,可以促進(jìn)羅非魚(yú)生長(zhǎng),提高羅非魚(yú)的消化酶和血清非特異性免疫活性,并對(duì)凈化水體水質(zhì)方面有積極作用[30]。因此推斷,將實(shí)驗(yàn)篩選出的A. tropicalis應(yīng)用于諾麗及其他食品發(fā)酵中,可能會(huì)對(duì)其助消化、提高免疫力等功能特性有積極影響,為開(kāi)發(fā)特定保健功能的新產(chǎn)品提供新的思路。

    2.3.3 菌株的耐乙醇性能

    醋酸菌主要依靠氧化乙醇形成醋酸,但高體積分?jǐn)?shù)乙醇會(huì)抑制醋酸菌生長(zhǎng),使得乙醇轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)酸速率下降,從而影響醋酸產(chǎn)量[31]。由圖6可知,隨著初始乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,各菌株生長(zhǎng)量基本呈下降趨勢(shì),產(chǎn)酸量均呈先增加后減小趨勢(shì);各醋酸菌基本上在乙醇體積分?jǐn)?shù)為1%時(shí)生長(zhǎng)量最大,乙醇體積分?jǐn)?shù)為3%產(chǎn)酸量最高,表明低體積分?jǐn)?shù)乙醇會(huì)限制醋酸菌的產(chǎn)酸量。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)增加到7%時(shí),菌株N4和N5基本停止生長(zhǎng),N11、N17、N21和AS1.41的生長(zhǎng)有所抑制,但OD600nm值均能達(dá)到0.650以上,且只有N21和參照菌株AS1.41能維持較高的產(chǎn)酸效率,產(chǎn)酸量達(dá)到23.60 g/L,略高于參照菌株AS1.41(22.77 g/L)。

    圖6 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)7 株菌OD600 nm(A)和產(chǎn)酸量(B)的影響Fig. 6 Effect of ethanol concentration on OD600 nm (A) and acid production (B) of seven strains

    對(duì)比國(guó)內(nèi)外其他研究,李大為等[32]從自然發(fā)酵蘋果醋中篩選鑒定出耐受性較高的A. tropicalis B104,產(chǎn)酸量達(dá)33.2 g/L,耐乙醇體積分?jǐn)?shù)為7%,與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相一致。張志燕等[33]對(duì)鎮(zhèn)江香醋醋醅中的優(yōu)勢(shì)醋酸菌進(jìn)行了篩選和分離鑒定,得到8 株醋酸菌,其中醋酸菌D-3-4可耐受體積分?jǐn)?shù)9%乙醇以及42 ℃高溫,且產(chǎn)酸量達(dá)到60 g/L,為優(yōu)勢(shì)高產(chǎn)酸菌株。盧夢(mèng)瑤等[34]從多種水果酵素中分離出1 株較高產(chǎn)醋酸菌株芝庇儂醋酸桿菌(A. cibinongensis)LMY-1,在乙醇體積分?jǐn)?shù)4%時(shí)其產(chǎn)酸最高達(dá)到22.72 g/L,本研究篩選出的菌種N21(A.tropicalis)其產(chǎn)酸量高于LMY-1。

    3 結(jié) 論

    本研究采用傳統(tǒng)分離培養(yǎng)方法從諾麗自然發(fā)酵汁中分離鑒定出67 株菌。綜合傳統(tǒng)形態(tài)培養(yǎng)特征、生理生化實(shí)驗(yàn)和16S rRNA基因序列分析同源性分析,最終鑒定出24 株醋酸菌,分別為A. fabarum(9 株)、A. syzygii(7 株)、A. pasteurianus(2 株)、A. tropicalis(1 株)、A. lambici(1 株)和G. japonicus(4 株),可見(jiàn)諾麗發(fā)酵汁中醋酸菌的豐富多樣性,A. fabarum和A. syzygii分別占菌株總數(shù)的37.5%和29.2%,為諾麗發(fā)酵汁中的主要優(yōu)勢(shì)醋酸菌種。在菌株發(fā)酵特性對(duì)比研究中,不同醋酸菌株對(duì)溫度和乙醇的耐受性差異顯著,A. tropicalis N21在乙醇體積分?jǐn)?shù)為3%時(shí)產(chǎn)酸量最高,達(dá)到28.92 g/L,在40 ℃高溫中仍能良好生長(zhǎng)且產(chǎn)酸量為14.85 g/L,在體積分?jǐn)?shù)為7%時(shí),產(chǎn)酸量依然達(dá)到23.60 g/L,具有良好的生長(zhǎng)特性和發(fā)酵產(chǎn)酸能力,且耐溫及耐乙醇特性優(yōu)于其他5 株醋酸菌,可考慮作為優(yōu)勢(shì)醋酸菌株,用于諾麗純種發(fā)酵。

    本實(shí)驗(yàn)全面研究了諾麗自然發(fā)酵過(guò)程中醋酸菌的多樣性及分布,不僅豐富了諾麗中醋酸菌種屬信息,同時(shí)為諾麗發(fā)酵汁傳統(tǒng)工藝的改善及諾麗發(fā)酵產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)利用提供一定理論基礎(chǔ)。但由于在諾麗發(fā)酵汁中關(guān)于醋酸菌的研究尚少,其在諾麗發(fā)酵過(guò)程中的作用和功能以及在諾麗發(fā)酵汁中的功效性成分的產(chǎn)生方面是否發(fā)揮一定的作用,還有待于進(jìn)一步研究。

    猜你喜歡
    產(chǎn)酸量生長(zhǎng)量醋酸
    十二碳二元酸菌種發(fā)酵工藝優(yōu)化
    醋酸鈣含量測(cè)定方法的對(duì)比與優(yōu)化
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:20
    日本落葉松人工林生長(zhǎng)規(guī)律分析
    綠色科技(2021年21期)2021-11-26 09:12:06
    北大河林業(yè)局森林生長(zhǎng)量、枯損量調(diào)查與分析
    圖說(shuō)醋酸
    廣州化工(2020年8期)2020-05-19 06:23:56
    宜春區(qū)域南方紅豆杉生境及其生長(zhǎng)量分析
    產(chǎn)D-乳酸的德氏乳桿菌保加利亞亞種發(fā)酵工藝研究
    熱帶醋酸桿菌B104發(fā)酵條件的優(yōu)化研究
    醋酸甲酯與合成氣一步合成醋酸乙烯
    華山松中幼林撫育和未撫育對(duì)生長(zhǎng)量的影響
    河南科技(2014年24期)2014-02-27 14:19:48
    真人做人爱边吃奶动态| 久久香蕉激情| 黄片小视频在线播放| 老司机在亚洲福利影院| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲精品色激情综合| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 91麻豆av在线| 国产日本99.免费观看| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品1区2区在线观看.| 在线播放国产精品三级| 国产欧美日韩一区二区精品| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 色综合站精品国产| 大型黄色视频在线免费观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产久久久一区二区三区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲专区国产一区二区| 精品高清国产在线一区| 91麻豆av在线| 1024手机看黄色片| 国产成年人精品一区二区| 亚洲精品在线美女| 久久精品成人免费网站| 天堂√8在线中文| 97碰自拍视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 一级毛片高清免费大全| 亚洲国产中文字幕在线视频| 又大又爽又粗| 淫秽高清视频在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 午夜福利一区二区在线看| 老司机靠b影院| 不卡av一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 桃色一区二区三区在线观看| a级毛片在线看网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产在线观看jvid| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 中文字幕av电影在线播放| 国产激情久久老熟女| 国产真实乱freesex| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲av成人av| 国产一区在线观看成人免费| 妹子高潮喷水视频| 精品高清国产在线一区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久9热在线精品视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产又色又爽无遮挡免费看| 在线观看免费视频日本深夜| 国产亚洲精品av在线| 欧美大码av| 欧美黑人巨大hd| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一进一出好大好爽视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 成在线人永久免费视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 99国产极品粉嫩在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 好男人在线观看高清免费视频 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 大香蕉久久成人网| 久久精品影院6| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 看片在线看免费视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线观看66精品国产| 怎么达到女性高潮| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩三级视频一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲一区中文字幕在线| 精品久久久久久成人av| 99久久国产精品久久久| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日韩欧美免费精品| 免费高清在线观看日韩| 国产又爽黄色视频| 黄色 视频免费看| 日本熟妇午夜| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日本三级黄在线观看| 大香蕉久久成人网| 久久亚洲真实| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久精品国产清高在天天线| 午夜福利18| 韩国精品一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲最大成人中文| 免费在线观看日本一区| 国产成人av激情在线播放| 精品久久久久久久久久久久久 | 国产精品,欧美在线| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品国产高清国产av| 99国产精品99久久久久| 久久伊人香网站| 少妇的丰满在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 丝袜人妻中文字幕| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 免费在线观看完整版高清| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 操出白浆在线播放| 国产精品二区激情视频| 中文字幕久久专区| 午夜福利视频1000在线观看| 在线观看一区二区三区| 欧美大码av| 精品久久久久久久末码| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲欧美激情综合另类| 国产精华一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 91成人精品电影| 亚洲全国av大片| 国产精品免费视频内射| 欧美激情久久久久久爽电影| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 在线av久久热| 国产日本99.免费观看| 亚洲第一电影网av| 久久 成人 亚洲| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品综合久久久久久久免费| 色哟哟哟哟哟哟| 国产激情欧美一区二区| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品亚洲美女久久久| 999精品在线视频| 国产黄a三级三级三级人| 欧美激情久久久久久爽电影| av电影中文网址| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 一本精品99久久精品77| 制服人妻中文乱码| 国产成人av激情在线播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99久久国产精品久久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 淫秽高清视频在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 18禁观看日本| 18禁观看日本| 午夜福利在线在线| 日本五十路高清| 最好的美女福利视频网| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲精品在线观看二区| 身体一侧抽搐| 欧美又色又爽又黄视频| 97碰自拍视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 男人舔奶头视频| 97碰自拍视频| 女性被躁到高潮视频| 亚洲一区中文字幕在线| 精品第一国产精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产激情欧美一区二区| 成人欧美大片| 色播在线永久视频| 热re99久久国产66热| 91老司机精品| 国产成人av激情在线播放| 久久伊人香网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 在线播放国产精品三级| 久久久久国产一级毛片高清牌| 99热6这里只有精品| 久久九九热精品免费| 成人午夜高清在线视频 | 免费看十八禁软件| 99在线人妻在线中文字幕| 大型黄色视频在线免费观看| 身体一侧抽搐| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 免费一级毛片在线播放高清视频| 91九色精品人成在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 日本熟妇午夜| 欧美日韩精品网址| 成人特级黄色片久久久久久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产单亲对白刺激| 后天国语完整版免费观看| cao死你这个sao货| a在线观看视频网站| 久久久久久国产a免费观看| 欧美黑人精品巨大| 欧美在线黄色| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品影院久久| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 久久久国产欧美日韩av| 久久久国产欧美日韩av| 丁香欧美五月| 日韩欧美三级三区| 久久精品影院6| 变态另类丝袜制服| 久久久精品欧美日韩精品| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美色视频一区免费| 亚洲精品国产一区二区精华液| 级片在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲色图av天堂| 日本黄色视频三级网站网址| 久热爱精品视频在线9| 日本成人三级电影网站| 黑人操中国人逼视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲五月色婷婷综合| 少妇粗大呻吟视频| 丁香欧美五月| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲国产精品999在线| 久久久国产欧美日韩av| 一区福利在线观看| 欧美黑人精品巨大| 免费高清视频大片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美日韩黄片免| 波多野结衣高清无吗| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 一本一本综合久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 十八禁网站免费在线| 无遮挡黄片免费观看| 免费观看人在逋| 在线看三级毛片| 亚洲专区字幕在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 亚洲av熟女| www国产在线视频色| 又黄又粗又硬又大视频| 无遮挡黄片免费观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| www国产在线视频色| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 夜夜爽天天搞| 人妻久久中文字幕网| 又黄又爽又免费观看的视频| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 午夜久久久久精精品| 欧美三级亚洲精品| 黄色女人牲交| 亚洲国产欧美一区二区综合| 黄色丝袜av网址大全| 久热爱精品视频在线9| 宅男免费午夜| 最近最新免费中文字幕在线| 成人亚洲精品av一区二区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 午夜影院日韩av| 黄频高清免费视频| 成人国语在线视频| 国产免费男女视频| www.自偷自拍.com| 啦啦啦 在线观看视频| 国产成人av教育| av电影中文网址| 91成人精品电影| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美黄色淫秽网站| 久久久久久久久中文| 午夜福利18| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲免费av在线视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美zozozo另类| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 成人三级黄色视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 性欧美人与动物交配| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 美女免费视频网站| 欧美日韩乱码在线| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品亚洲美女久久久| 国产又爽黄色视频| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲avbb在线观看| 午夜激情av网站| avwww免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 正在播放国产对白刺激| 熟女电影av网| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久9热在线精品视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美黄色片欧美黄色片| 一本一本综合久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲精品美女久久av网站| tocl精华| 窝窝影院91人妻| 日本五十路高清| 国产精品精品国产色婷婷| 在线看三级毛片| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品,欧美在线| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产色视频综合| 人人澡人人妻人| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产黄色小视频在线观看| 久久久国产成人精品二区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产一区二区三区视频了| av在线天堂中文字幕| 最近在线观看免费完整版| 精品高清国产在线一区| 欧美又色又爽又黄视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| or卡值多少钱| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久精品影院6| e午夜精品久久久久久久| 婷婷亚洲欧美| 久久久久久久久久黄片| 国产区一区二久久| 亚洲色图av天堂| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 中出人妻视频一区二区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 丰满的人妻完整版| 精品无人区乱码1区二区| 手机成人av网站| 成人免费观看视频高清| 校园春色视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产一区二区激情短视频| 特大巨黑吊av在线直播 | 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲免费av在线视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产精品二区激情视频| 国产日本99.免费观看| 黄色成人免费大全| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人啪精品午夜网站| 精品电影一区二区在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品久久久久久,| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美大码av| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利在线观看吧| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲国产精品999在线| 桃红色精品国产亚洲av| 黑人操中国人逼视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 在线观看免费午夜福利视频| 免费无遮挡裸体视频| av有码第一页| svipshipincom国产片| 18禁观看日本| 十八禁人妻一区二区| 色综合婷婷激情| 宅男免费午夜| 热99re8久久精品国产| 国产精品一区二区精品视频观看| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产一区二区三区视频了| 国产伦人伦偷精品视频| 怎么达到女性高潮| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品第一国产精品| 波多野结衣av一区二区av| tocl精华| 白带黄色成豆腐渣| 欧美性猛交黑人性爽| 国产av一区在线观看免费| 精品电影一区二区在线| 精品久久久久久久末码| 久久久久免费精品人妻一区二区 | a在线观看视频网站| 亚洲av片天天在线观看| 在线免费观看的www视频| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲性夜色夜夜综合| 两个人看的免费小视频| 91成人精品电影| 真人一进一出gif抽搐免费| 成人永久免费在线观看视频| 18禁国产床啪视频网站| 很黄的视频免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美在线一区亚洲| 最新美女视频免费是黄的| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 狠狠狠狠99中文字幕| 看黄色毛片网站| 变态另类丝袜制服| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜免费成人在线视频| 久久香蕉激情| 午夜两性在线视频| 满18在线观看网站| 99国产精品99久久久久| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 不卡一级毛片| 免费搜索国产男女视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 啦啦啦 在线观看视频| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久av美女十八| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产亚洲精品av在线| 日韩精品青青久久久久久| 午夜精品在线福利| 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品av久久久久免费| 黄色a级毛片大全视频| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 99re在线观看精品视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 嫁个100分男人电影在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产午夜福利久久久久久| 在线观看午夜福利视频| 老司机在亚洲福利影院| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品,欧美在线| 久久草成人影院| 最好的美女福利视频网| 亚洲成人久久爱视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| www.www免费av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 韩国av一区二区三区四区| 午夜福利免费观看在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 两个人免费观看高清视频| 少妇的丰满在线观看| 国产精品影院久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 日本a在线网址| 国产免费男女视频| 久久久精品欧美日韩精品| 久久久久久久久中文| 成人免费观看视频高清| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品色激情综合| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 波多野结衣av一区二区av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产成人欧美| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 欧美国产精品va在线观看不卡| 制服丝袜大香蕉在线| 香蕉久久夜色| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 黄片播放在线免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久伊人香网站| 欧美午夜高清在线| 精品久久久久久久久久久久久 | www.www免费av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品98久久久久久宅男小说| av超薄肉色丝袜交足视频| 欧美日韩精品网址| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 身体一侧抽搐| 麻豆av在线久日| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 色老头精品视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品久久视频播放| 亚洲熟女毛片儿| 给我免费播放毛片高清在线观看| 午夜两性在线视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 在线观看免费视频日本深夜| 一本一本综合久久| 999久久久国产精品视频| 午夜免费激情av| 亚洲精品国产区一区二| 99在线视频只有这里精品首页| 999久久久国产精品视频| aaaaa片日本免费| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品久久电影中文字幕| 黄色女人牲交| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久香蕉国产精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美日韩乱码在线| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲五月婷婷丁香| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 午夜a级毛片| 色尼玛亚洲综合影院| 男女床上黄色一级片免费看| 国产1区2区3区精品| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美日韩精品网址| 久久午夜亚洲精品久久| 好男人电影高清在线观看| 久久久国产成人精品二区| 国产av一区二区精品久久| 91在线观看av| 香蕉国产在线看| 午夜a级毛片| 91在线观看av| 一本一本综合久久| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 久久精品影院6| netflix在线观看网站| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美成人午夜精品| 身体一侧抽搐| 成人手机av| 亚洲成人久久性| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| a在线观看视频网站| 亚洲全国av大片| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品国产乱子伦一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 在线观看午夜福利视频| 午夜视频精品福利| 制服诱惑二区| 黄色毛片三级朝国网站| 国产亚洲精品久久久久5区| 日本熟妇午夜| 桃红色精品国产亚洲av| 村上凉子中文字幕在线| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩欧美免费精品| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 精品国内亚洲2022精品成人|