影響稽留流產(chǎn)胚胎染色體核型的相關(guān)因素分析

李艷秋 韓立薇 韋成厚 張碧云 舒小妹 李玉華

[摘要] 目的 分析影響稽留流產(chǎn)胚胎染色體核型的相關(guān)因素。方法 回顧性分析2017年1月—2018年6月因稽留流產(chǎn)行清宮術(shù)的152例患者的臨床資料，根據(jù)胚胎染色體核型分成核型異常組（觀察組）和核型正常組（對(duì)照組），評(píng)估兩組間患者年齡、受孕方式、體質(zhì)指數(shù)、停經(jīng)時(shí)間、懷孕次數(shù)、流產(chǎn)次數(shù)等指標(biāo)的差異，分析各指標(biāo)與染色體核型之間關(guān)系。結(jié)果152例患者中胚胎染色體核型異常組83例，核型正常組69例，兩組在年齡、停經(jīng)時(shí)間方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；核型異常組的體質(zhì)指數(shù)（22.73±2.48）顯著低于核型正常組體質(zhì)指數(shù)（22.92±2.26），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而輔助受孕率59.04%（49/83）、多次妊娠率27.71% （23/83）、多次流產(chǎn)率16.87%（14/83）顯著高于核型正常組[輔助受孕率39.13%（27/69）、多妊娠率10.14%（7/69）、多次流產(chǎn)率5.80%（4/69）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Pearson相關(guān)分析表明：年齡、體質(zhì)指數(shù)、受孕方式與胚胎染色體核型無(wú)關(guān)（r1=0.017，P1=0.837；r2=0.040，P2=0.622；r3=-0.055，P3=0.499）；懷孕次數(shù)和流產(chǎn)次數(shù)與胚胎染色體核型密切相關(guān)（r4=-0.425，P4=0.000；r5=-0.368，P5=0.000）。結(jié)論 孕婦懷孕次數(shù)和流產(chǎn)次數(shù)會(huì)影響胚胎染色體核型，避免不必要的意外妊娠，避免反復(fù)流產(chǎn)將有利于預(yù)防稽留流產(chǎn)的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞] 稽留流產(chǎn)；染色體核型；胚胎絨毛

[中圖分類號(hào)] R714.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）03（c）-0174-03

[Abstract] Objective To analyze the factors related to the chromosome karyotype of missed abortion embryos. Methods The clinical data of 152 cases of uterine curettage due to missed abortion from January 2017 to June 2018 were retrospectively analyzed. According to the karyotype of embryos， the patients were divided into two groups： abnormal karyotype group （observation group） and normal karyotype group （control group）. The age， mode of conception， body mass index， menopause time， number of pregnancies and the number of pregnancies between the two groups were The relationship between the indexes and chromosome karyotypes was analyzed. Results Among 152 patients， 83 were in abnormal karyotype group and 69 were in normal karyotype group. There were no differences in age and menopause time between the two groups （P>0.05）， but there were significant differences in body mass index， mode of pregnancy， number of pregnancies and number of abortions （P<0.05）. Pearson correlation analysis showed that age， body mass index and mode of conception were not related to embryo chromosome karyotype （r1=0.017， P1=0.837； R2=0.040， P2=0.622； R3=0.055， P3=0.499）； the number of pregnancies and abortions were closely related to embryo chromosome karyotype （r4=0.425， P4=0.000； R5=0.368， P5=0.000）. Conclusion The number of pregnancies and abortions of pregnant women can affect the chromosome karyotype of embryos， avoid unnecessary accidental pregnancy， and avoid repeated abortion， which will be conducive to the prevention of missed abortion.

[Key words] Missed abortion； Chromosome karyotype； Embryo villus

稽留流產(chǎn)又稱為過期流產(chǎn)，是早期妊娠的常見并發(fā)癥，發(fā)生率可高達(dá)15%左右，其病因復(fù)雜多樣[1]。目前大量研究表明，胚胎染色體核型異常是造成稽留流產(chǎn)的一個(gè)重要因素，約有50%的稽留流產(chǎn)由胚胎染色體異常所造成[2]?；仡櫺苑治?017年1月—2018年6月間152例稽留流產(chǎn)患者的資料發(fā)現(xiàn)孕婦懷孕次數(shù)和流產(chǎn)次數(shù)會(huì)影響胚胎染色體核型，避免不必要的意外妊娠，避免反復(fù)流產(chǎn)將有利于預(yù)防稽留流產(chǎn)的發(fā)生。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取的152例患者均因稽留流產(chǎn)在該院門診及住院行清宮術(shù)治療，年齡23～42歲，平均（31.32±4.09）歲；停經(jīng)時(shí)間40～62 d，平均（50.74±4.38）d。所有患者均簽署知情同意書，并獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后將所得胚胎組織送廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司行絨毛膜染色體檢查。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 組織細(xì)胞培養(yǎng)[3] 在無(wú)菌條件下利用生理鹽水清洗所收集的胚胎組織，分離并獲得絨毛組織10～15 mg置于離心管中，加入由0.25%胰蛋白酶、0.02%dNasel、0.1%膠原酶所組成的混合消化液，在37℃水浴箱環(huán)境下將絨毛組織充分消化。將消化后的混合液于室溫下2 000 rpm離心10 min去除上清，收集絨毛細(xì)胞均勻接種于培養(yǎng)瓶，加入Cytogenplus培養(yǎng)液，于37℃下5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d。5 d后利用倒置顯微鏡關(guān)系細(xì)胞貼壁情況，當(dāng)細(xì)胞形成小克隆后即可收獲細(xì)胞進(jìn)行G顯帶制片后觀察染色體。

1.2.2 染色體核型分析[3] 采用Leica GSL120全自動(dòng)核型掃描儀觀察片下分裂相，計(jì)數(shù)20個(gè)分裂相，選擇5個(gè)分散良好的分裂相進(jìn)行進(jìn)行核型分析。核型診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2016年人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體系標(biāo)準(zhǔn)（ISCN2016 ）[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

所得數(shù)據(jù)均錄入Excel2010數(shù)據(jù)表，應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析法進(jìn)行分析， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胚胎染色體核型結(jié)果

152例患者中胚胎染色體核型異常83例，主要包括非整倍體、三倍體、嵌合體、四倍體和染色體結(jié)構(gòu)異常；核型正常69例，其中包括多態(tài)性2例，各種染色體核型比例見表1。

2.2 核型異常組與核型正常組各指標(biāo)比較

兩組在年齡、停經(jīng)時(shí)間方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在體質(zhì)指數(shù)、受孕方式、懷孕次數(shù)、流產(chǎn)次數(shù)等方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2、3。

2.3 影響胚胎染色體核型的相關(guān)因素分析

Pearson相關(guān)分析表明：年齡、體質(zhì)指數(shù)、受孕方式與胚胎染色體核型無(wú)關(guān)（r1=0.017，P1=0.837；r2=0.040，P2=0.622；r3=-0.055，P3=0.499）；懷孕次數(shù)和流產(chǎn)次數(shù)與胚胎染色體核型密切相關(guān)（r4=-0.425，P4=0.000；r5=-0.368，Pe=0.000）。

3 討論

稽留流產(chǎn)又稱為過期流產(chǎn)或者死胎不下，是自然流產(chǎn)中的一類特殊情況，它指在妊娠早期胚胎或胎兒死亡后未能及時(shí)自然排出而滯留于宮腔內(nèi)，表現(xiàn)為先兆流產(chǎn)的臨床癥狀，或者毫無(wú)征兆而因定期的B超檢查發(fā)現(xiàn)，一般發(fā)生于妊娠14周之前。目前稽留流產(chǎn)的病因尚不明確，大量的研究表明，稽留流產(chǎn)是一個(gè)多因素影響的綜合征反應(yīng)，其病因涉及精神壓力、不良習(xí)慣、環(huán)境污染、內(nèi)分泌失調(diào)、免疫功能異常、母體感染、遺傳基因缺陷等方面[5]。該對(duì)152例稽留流產(chǎn)的患者研究也發(fā)現(xiàn)，她們年齡相對(duì)較大，大多數(shù)都超過了30歲，平均年齡（31.32±4.09）歲，而平均停經(jīng)時(shí)間則在（50.74±4.38）d，基本沒有超過妊娠3個(gè)月的孕期。因此，對(duì)于高齡孕婦，密切監(jiān)測(cè)妊娠早期的胎兒發(fā)育狀況有著重要意義。

越來越多的研究表明[6]：在引起稽留流產(chǎn)的眾多因素中，遺傳基因缺陷因素中胚胎染色體核型的異常是導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生的重要因素。甚至有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，胎兒染色體因素導(dǎo)致的稽留流產(chǎn)可高達(dá)60%[7]。也有學(xué)者認(rèn)為，不論是何種原因引起稽留流產(chǎn)，最終都會(huì)以啟動(dòng)分子生物機(jī)制導(dǎo)致胚胎死亡[8]。因此，直接決定胚胎質(zhì)量的胚胎染色體核型與稽留流產(chǎn)有著密切的關(guān)系。黃和明等[9]發(fā)現(xiàn)，胚胎染色體異常，尤其是染色體數(shù)目的異常是導(dǎo)致孕婦稽留流產(chǎn)的最主要原因。張建林等[10]對(duì)226例早期流產(chǎn)的胚胎組織研究發(fā)現(xiàn)，胚胎染色體數(shù)目異常占異常核型的80.85%，是引起早期自然流產(chǎn)的主要原因之一。楊鍇等[11]通過大樣本研究發(fā)現(xiàn)，在1 389例稽留流產(chǎn)的胚胎組織中，染色體核型異常高達(dá)698例（54%），其中三體型就有427例（31%）。我們?cè)谘芯恐幸舶l(fā)現(xiàn)，在152例稽留流產(chǎn)患者中，胚胎染色體核型異常就有89例，比例高達(dá)58.55%，其中三倍體62例，占異常核型的69.66%。這種由于胚胎形成時(shí)或者是早期受精卵卵裂期同源染色體的不分離而造成的染色體增多，以致三倍體或者非整倍體核型的發(fā)生，是引起胎兒發(fā)育不良，導(dǎo)致稽留流產(chǎn)的重要因素。

Jones等[12]發(fā)現(xiàn)人類卵子的非整倍體發(fā)生比例平均可達(dá)20%，Vialard等[13]發(fā)現(xiàn)引起卵子非整倍體發(fā)生的機(jī)制可能跟卵子老化有關(guān)，而Battaglia等[14]深入研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂時(shí)候紡錘體的異常就可能提示著卵子老化或者是非整倍體發(fā)生的可能性。當(dāng)卵母細(xì)胞在減數(shù)分裂階段受到外界因素、毒性物質(zhì)等綜合因素的干擾就會(huì)引起同源染色體的黏附和凝聚，從而導(dǎo)致了受精卵染色體數(shù)目的異常。我們對(duì)胚胎染色體核型異常與核型正常組的患者進(jìn)行對(duì)比研究也發(fā)現(xiàn)，在稽留流產(chǎn)患者中，胚胎染色體核型正常組與異常組在年齡、停經(jīng)時(shí)間方面無(wú)差異，而在體質(zhì)指數(shù)、受孕方式、懷孕次數(shù)、流產(chǎn)次數(shù)等方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。通過Pearson相關(guān)分析表明：年齡、體質(zhì)指數(shù)、受孕方式與胚胎染色體核型無(wú)關(guān)（r1=0.017，P1=0.837；r2=0.040，P2=0.622；r3=-0.055，P3=0.499）；懷孕次數(shù)和流產(chǎn)次數(shù)與胚胎染色體核型密切相關(guān)（r4=-0.425，P4=0.000；r5=-0.368，P5=0.000）。因此，建議育齡期婦女避免不必要的意外妊娠，避免反復(fù)流產(chǎn)將有利于預(yù)防稽留流產(chǎn)的發(fā)生。

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（收稿日期：2018-12-20）