仙耆口服液對小鼠緩解體力疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究

劉素娟，郭換，陳鴻平，陳林 ，劉友平

仙耆口服液由枸杞子、淫羊藿、黃芪、沙棘4味中藥組成，所選組分原料，全部收載于《中華人民共和國藥典》，其中沙棘、枸杞為藥食兩用之品，另外淫羊藿、黃芪為：“可用于保健食品的物品”。以上原料作為藥物，未見經(jīng)口服引起不良反應(yīng)的臨床報(bào)道，更無在《中國藥典》用量內(nèi)引起中毒的記載。本品配方具有扶助正氣，補(bǔ)腎益精，延年益壽、增強(qiáng)抗邪能力。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，全球65歲以上的人口已超過6億，在我國則超過1.2億，并正以每年3.2%的速度上升，人口老齡化問題日趨嚴(yán)重。另據(jù)報(bào)道，我國約有15%的人是健康的，15%的人非健康，70%的人呈亞健康狀態(tài)。按照中醫(yī)理論，在亞健康人群中，以正氣不足，腎精虧虛，而出現(xiàn)早衰和易感外邪者，最為多見。也就是為患有體弱早衰和免疫功能低下之人為主。因而，緩解體力疲勞和增強(qiáng)免疫對于所有成年人來講，具有普遍意義，尤其是對處于亞健康狀態(tài)的人群更有意義。因此本研究依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）對仙耆口服液緩解體力疲勞作用進(jìn)行研究，以期為研制相關(guān)產(chǎn)品提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級健康KM小鼠，雌雄，18～22 g，購自成都成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號：SCXK(川)2015-030。

1.2 藥物與試劑

仙耆口服液由本實(shí)驗(yàn)提供、西洋參口服液（福建省幸福生物科技有限公司）。尿素氮試劑盒（BUN）（生產(chǎn)批號：20170627）；肝糖原試劑盒（生產(chǎn)批號：20170711）；超氧化物歧化酶SOD (生產(chǎn)批號：20170802)、丙二醛（MDA）（生產(chǎn)批號：20170712）測定試劑盒、BCA法蛋白定量試劑盒（生產(chǎn)批號：20170113），均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器

游泳箱（50cm×50cm×40cm）、高速冷凍離心機(jī)（Thermo Scientific，ST16R）、酶標(biāo)儀（美國Thermo公司， Varioska），電子分析天平BP211D（德國Sartorius股份有限公司）、鉛皮、手術(shù)器械等。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥方法

將小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為對照組、陽性組和低、中、高劑量組。據(jù)人體口服推薦量，設(shè)口服液低、中、高劑量分別為40 mL﹒kg-1、75 mL﹒kg-1、150 mL﹒kg-1（分別相當(dāng)于人體推薦量的5、10、20倍），根據(jù)0.2 mL/10 g體積采給予小鼠不同劑量的受試物，空白對照組給予等量蒸餾水。每天給藥1次，連續(xù)30 d。

2.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

小鼠60只，雌雄各半，最后一次給藥后稱重，計(jì)算小鼠給藥前后的體重增長率。末次給予受試藥30 min后，將尾部負(fù)荷5%體重鉛皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30 cm，水溫25℃，記錄小鼠游泳開始至死亡的時(shí)間，即小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

2.3 SOD、MDA 和肝糖原測定

小鼠60只，雌雄各半，末次給藥 30 min 后，眼球取血，分離血清，檢測血清 SOD、MDA，處死小鼠后迅速取出肝臟，制備肝組織勻漿，按試劑盒說明書測定肝臟SOD、MDA，及肝糖原。

2.4 血清尿素氮測定

小鼠60只，雄，根據(jù)體重隨機(jī)分為 5 組。末次給藥 30 min 后，在水深不少于 30 cm，水溫( 25 ± 1.0 ) ℃ 水中游泳 90 min。運(yùn)動(dòng)后安靜 60 min，摘眼球取血，置冰箱4℃約3 h，血凝固后2000r/min離心15 min，分離血清，按試劑盒說明書操作，測定血清尿素氮含量。

3 結(jié)果及分析

3.1 對小鼠體重及臟器指數(shù)的影響

如表1所示，受試物對小鼠體重增長沒有明顯影響。低劑量組、高劑量組對小鼠脾臟指數(shù)有顯著影響，對胸腺指數(shù)影響不顯著。

表1 受試物對小鼠體重及臟器指數(shù)的影響（ ±s，n=10）

表1 受試物對小鼠體重及臟器指數(shù)的影響（ ±s，n=10）

注：和空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（mL﹒kg-1） 體重增長率 脾臟指數(shù) 胸腺指數(shù)空白組 - 29.9711.69 42.4213.13 16.068.67陽性組 75 26.882.45 38.982.09 16.575.77低劑量組 40 27.0511.28 32.178.1515.616.05中劑量組 75 27.466.75 32.585.56 16.811.98高劑量組 150 27.967.20 32.915.3117.756.26

3.2 對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

如表2所示，受試物各劑量組及陽性組明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，與空白對照組比較，低劑量組和陽性組具有明顯差異。

表2 受試物對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（±s，n=10）

表2 受試物對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（±s，n=10）

注：和空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（mL﹒kg-1） 游泳時(shí)間（min）空白組 - 4.330.92陽性組 75 7.651.88低劑量組 40 6.02029*中劑量組 75 5.901.72高劑量組 150 5.350.26*

3.3 對小鼠SOD、MDA及肝糖原含量的影響

如表3所示，受試物中劑量、高劑量組及陽性組可明顯升高肝糖原含量，與空白組比較差異有顯著性（P＜0.05），而低劑量組對小鼠肝糖原含量無明顯影響。對SOD含量比較發(fā)現(xiàn)，陽性組及給藥組均能顯著升高小鼠SOD含量，與空白組相比，中劑量組、陽性組具有極顯著差異（P＜0.01），低劑量組、高劑量組具有顯著差異（P＜0.05）。給藥組及陽性組均能降低小鼠MDA含量，與空白組比較，陽性組具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組可顯著降低MDA含量（P＜0.05）。

表3 受試物對小鼠SOD、MDA及肝糖原含量的影響(±s,n=10)

表3 受試物對小鼠SOD、MDA及肝糖原含量的影響(±s,n=10)

注：和空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（mL﹒kg-1） 糖原含量 SOD含量 MDA含量空白組 - 5.880.11 205.9010.49 65.5410.46陽性組 75 6.080.19 270.21±27.59** 35.777.65**低劑量組 40 6.010.23 244.46±40.05* 54.2513.91中劑量組 75 6.030.14 242.77±23.38** 61.5912.28高劑量組 150 6.090.06 233.28±27.34* 52.935.94*

3.4 對小鼠血清尿素氮含量的影響

如表4所示，與空白組比較，各劑量組及陽性組西洋參口服液均能顯著降低小鼠血清尿素氮含量（P＜0.05），且呈劑量依賴性。

表4 受試物對小鼠血清尿素氮含量的影響（±s，n=10）

表4 受試物對小鼠血清尿素氮含量的影響（±s，n=10）

注：和空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量（mL﹒kg-1） 血尿素氮含量空白組 - 10.141.09陽性組 75 8.030.56低劑量組 40 7.621.11中劑量組 75 6.910.84高劑量組 150 5.150.45

4 討論

負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)可以反映在自身耗氧量增加的情況下，機(jī)體的抗疲勞的能力，常被用于研究藥物的抗疲勞作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，仙耆口服液能明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，說明該口服液具有增強(qiáng)小鼠緩解體力疲勞的作用。疲勞是機(jī)體受到緊張性刺激后產(chǎn)生的一種應(yīng)激性反應(yīng)。機(jī)體缺氧可影響機(jī)體的各種新陳代謝，引起一系列的功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，特別是影響機(jī)體的氧化功能。機(jī)體內(nèi)一系列氧自由基代謝會(huì)發(fā)生改變，表現(xiàn)為抗氧化能力下降和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)。嚴(yán)重缺氧后會(huì)導(dǎo)致心腦等重要器官的損傷，引起死亡[1]。

機(jī)體疲勞時(shí)，主要表現(xiàn)為：氧自由基增多，SOD 是機(jī)體清除氧自由基的重要酶，可以直接反映機(jī)體抗氧化水平。MDA 是自由基引起的脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，MDA 含量可以間接反映機(jī)體抗氧化能力及清除氧化產(chǎn)物的能力[2]；糖原儲(chǔ)備量降低。機(jī)體劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，肌糖原耗竭增加，為維持血糖水平，肝糖原儲(chǔ)備量也減少。體內(nèi)的糖原是運(yùn)動(dòng)能量的來源，糖原的含量能說明疲勞發(fā)生的快慢或程度，糖原儲(chǔ)備充足，供應(yīng)的能量就多，抗疲勞能力就強(qiáng)；血液中尿素氮水平升高。機(jī)體劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，蛋白質(zhì)及氨基酸的分解代謝增強(qiáng)，氨基酸會(huì)代謝轉(zhuǎn)化生成尿素進(jìn)入血液，血尿素氮含量增加，血尿素氮也是疲勞時(shí)肌肉酸痛的主要原因。因此，血尿素氮水平的高低是判斷機(jī)體疲勞程度的重要指標(biāo)[3]，運(yùn)動(dòng)后血尿素氮清除越快，則疲勞消除得越快，抗疲勞的效果亦越明顯。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，仙耆口服液對小鼠體重的增長及胸腺指數(shù)無明顯影響；能夠增強(qiáng)小鼠血清和肝臟SOD 活性，降低 MDA 含量，增強(qiáng)了清除機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生自由基的能力；顯著提高肝糖原儲(chǔ)備量; 降低小鼠游泳后血尿素氮水平。

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）[4]對緩解體力疲勞功能結(jié)果判定，說明仙耆口服液具有緩解體力疲勞功能的作用。該保健食品抗疲勞的作用機(jī)制可能與以下兩點(diǎn)有關(guān): 明顯提高體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)酶活力，增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化防護(hù)能力，清除體內(nèi)氧自由基，防止細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，有效預(yù)防細(xì)胞自由基損傷; 提高機(jī)體糖原儲(chǔ)備，增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力及降低運(yùn)動(dòng)時(shí)血清尿素氮的堆積，加快消除疲勞。

[1]Yamaura S, Fukao M, Ishida K, et al.Effect of chronic hypoxic hypoxia on oxidation and glucuronidation of carvedilol in rats[J].European Journal of Drug Metabolism &Pharmacokinetics, 2014, 39(1):53.

[2]Chi A, Li H, Kang C, et al.Anti-fatigue activity of a novel polysaccharide conjugates from Ziyang green tea.[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2015,80:566.

[3]黃誠胤, 潘建華, 李慧.表沒食子兒茶素沒食子酸酯對小鼠運(yùn)動(dòng)疲勞的拮抗作用[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2015,31(1):85.

[4]衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[S].北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:87.