巴西橡膠樹(shù)ADF6基因的克隆與表達(dá)分析

鄧治 金志強(qiáng) 劉輝 楊洪 代龍軍 李德軍

摘 要 肌動(dòng)蛋白解聚因子（Actin Depolymerizing Factor，ADF）是一種重要的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。ADF通過(guò)參與調(diào)控肌動(dòng)蛋白的裝配和解聚在多種生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)RT-PCR技術(shù)從橡膠樹(shù)膠乳中獲得HbADF6基因的cDNA和基因組序列，序列分析顯示HbADF6基因的開(kāi)放閱讀框?yàn)?41 bp，共編碼146個(gè)氨基酸，基因組序列由2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子組成。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明，HbADF6基因在所有檢測(cè)組織中均表達(dá)，其中樹(shù)皮中表達(dá)量最高，葉片中表達(dá)量最低。HbADF6基因的表達(dá)受乙烯利（ET）和碘化鉀（KI）調(diào)控，并與排膠時(shí)間和死皮有關(guān)。此結(jié)果表明HbADF6基因可能在橡膠樹(shù)乙烯響應(yīng)、死皮和排膠過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

關(guān)鍵詞 肌動(dòng)蛋白解聚因子；巴西橡膠樹(shù)；排膠；表達(dá)分析

中圖分類號(hào) S794.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Abstract Actin depolymerizing factor （ADF） is an important class of actin binding proteins. ADF is involved in regulating actin assembly and disassembly and plays an important role in several physiology process. In this study， the cDNA and genomic sequence of HbADF6 were isolated from H. brasiliensis by RT-PCR. Sequence analysis showed that the open reading frame sequence of HbADF6 was 441 bp in length， which encoding 149 amino acids. The genomic sequence contained two introns and three exons. Quantitative real-time PCR results showed that HbADF6 expressed in all test tissues， with the highest expression in barks and lowest expression in leaves. HbADF6 expression was regulated by ethylene （ET） and potassium iodide （KI）. In addition， HbADF6 expression associated with latex flow time and tapping panel dryness （TPD）. The results suggest that HbADF6 may play important roles in ethylene resposnse， TPD and latex flow in Hevea brasiliensis.

Key words actin depolymerizing factor； Hevea brasiliensis； latex flow； expression analysis

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.05.011

作為細(xì)胞骨架中微絲的主要組成成分，肌動(dòng)蛋白廣泛存在于所有真核細(xì)胞中。它參與很多重要的細(xì)胞過(guò)程，如囊泡運(yùn)輸、細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)和重排、胞質(zhì)運(yùn)動(dòng)和頂端生長(zhǎng)等[1]。大量的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白直接調(diào)控肌動(dòng)蛋白動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)，使其呈高度有序的狀態(tài)。肌動(dòng)蛋白解聚因子（Actin Depolymerizing Factor，ADF）是真核生物中重要的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，由多基因家族成員組成，蛋白分子量在13～19 ku之間[2]。典型的ADF家族成員能結(jié)合球形肌動(dòng)蛋白（G-肌動(dòng)蛋白）和纖絲型肌動(dòng)蛋白（F-肌動(dòng)蛋白），切割F-肌動(dòng)蛋白為小片段，從而提供新的肌動(dòng)蛋白絲起始位點(diǎn)，增加肌動(dòng)蛋白單體在肌動(dòng)蛋白絲末端的解離速度，為F-肌動(dòng)蛋白正端聚合提供更多單體，從而提高肌動(dòng)蛋白聚合及解聚的動(dòng)態(tài)變化[3]。1993年Kim等[4]從百合中分離到植物ADF基因，隨后在苔蘚、水稻、擬南芥、小麥、巴西橡膠樹(shù)等植物中都鑒定到ADF基因。ADF基因在植物生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。擬南芥中過(guò)表達(dá)GhADF7基因引起花粉粒存活率下降，減慢花粉管的生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)基因植株部分雄性不育[5]。GhADF1基因下調(diào)表達(dá)改變細(xì)胞壁的形態(tài)和延長(zhǎng)纖維細(xì)胞的長(zhǎng)度[6]。黑暗條件下擬南芥adf4突變體幼苗胚軸和根均長(zhǎng)于野生型[7]。此外，ADF基因還與脅迫響應(yīng)有關(guān)。小麥TaADF4基因通過(guò)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架正調(diào)控小麥植物免疫反應(yīng)[8]。異源過(guò)表達(dá)OsADF3基因能提高擬南芥對(duì)甘露醇和干旱脅迫的抗性[9]。adf4突變后顯著提高擬南芥對(duì)白粉病的抗性，敲減第I亞類的ADFs（ADF1-4Ri）后該抗性得到進(jìn)一步增強(qiáng)[10]。

巴西橡膠樹(shù)（簡(jiǎn)稱橡膠樹(shù)）是一種重要的熱帶經(jīng)濟(jì)林木。割膠產(chǎn)生的膠乳作為橡膠樹(shù)的次生代謝產(chǎn)物，是天然橡膠最主要的來(lái)源。橡膠樹(shù)排膠時(shí)間是影響膠乳產(chǎn)量的關(guān)鍵因素之一，乳管傷口堵塞物的形成決定著排膠時(shí)間。已有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著排膠的進(jìn)程，橡膠樹(shù)乳管傷口末端逐漸形成“蛋白質(zhì)網(wǎng)”結(jié)構(gòu)[11-12]。膠乳中肌動(dòng)蛋白含量逐漸減少，乳管傷口末端“蛋白質(zhì)網(wǎng)”的形成與肌動(dòng)蛋白聚集同時(shí)發(fā)生[13-14]。推測(cè)肌動(dòng)蛋白微絲骨架在“蛋白質(zhì)網(wǎng)”的形成過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用，從而影響橡膠樹(shù)乳管傷口堵塞物的形成[15]。根據(jù)上述結(jié)果筆者推測(cè)橡膠樹(shù)ADF可能通過(guò)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白動(dòng)態(tài)變化在乳管堵塞過(guò)程中發(fā)揮作用。此前，本項(xiàng)目組克隆了橡膠樹(shù)膠乳ADF家族基因中的1個(gè)成員HbADF[16]，研究發(fā)現(xiàn)HbADF表達(dá)與橡膠樹(shù)排膠和死皮相關(guān)[17]。本研究克隆橡膠樹(shù)膠乳中另一個(gè)ADF家族成員HbADF6基因的cDNA和基因組序列，對(duì)其表達(dá)模式和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行分析。為進(jìn)一步研究HbADF6基因的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究所用橡膠樹(shù)（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）均種植于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)。選取10 a割齡的橡膠樹(shù)品系PR107為實(shí)驗(yàn)樹(shù)，采集不同死皮（Tapping Panel Dryness， TPD）等級(jí)橡膠樹(shù)膠乳樣品。采集開(kāi)割橡膠樹(shù)品系熱研7-33-97的膠乳、葉片、樹(shù)皮、雌花和雄花作為組織樣品。選取未開(kāi)割的橡膠樹(shù)品系熱研7-33-97幼樹(shù)，分別用1%乙烯利（ET）和3%碘化鉀（KI）對(duì)割面上下2 cm進(jìn)行處理，KI處理后用黑色塑料布對(duì)處理部位進(jìn)行包裹使其避光。分別于ET處理后0、4、8、24、48、72 h采集膠乳，KI處理后0、6、24、48 h采集膠乳。選取3 a割齡的橡膠樹(shù)品系熱研7-33-97為材料，進(jìn)行1% ET處理，采集割膠后5 min以內(nèi)、5 min后至35 min、35 min后至停止排膠3個(gè)時(shí)間段的膠乳，分別記為T1、T2和T3，采集相應(yīng)時(shí)間段不作處理的橡膠樹(shù)膠乳作為對(duì)照。

通用植物總RNA提取試劑盒購(gòu)自北京百泰克生物技術(shù)有限公司，PrimeScriptTM RT reagent kit with gDNA eraser、PyrobestTM DNA聚合酶、T4 DNA連接酶、pMD18-T載體和DNA Markers等購(gòu)自大連寶生物公司，SMARTTM RACE cDNA amplification kit購(gòu)自Clontech公司，2×Es Taq MasterMix聚合酶購(gòu)自北京康為世紀(jì)公司。大腸桿菌DH5α為本室保存。引物合成和測(cè)序由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成。

1.2 方法

1.2.1 橡膠樹(shù)RNA和DNA的提取 按照RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟提取橡膠樹(shù)各組織和各處理RNA。根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟去除基因組DNA后進(jìn)行cDNA第1鏈的合成。橡膠樹(shù)葉片基因組DNA提取參照安澤偉等[18]的方法進(jìn)行。

1.2.2 巴西橡膠樹(shù)HbADF6基因序列克隆與分析 根據(jù)橡膠樹(shù)樹(shù)皮轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得的序列Unigene22074（GenBank登錄號(hào)：JR366254）設(shè)計(jì)特異引物HbADF6F： 5'-TGAAGCTGCTTCTCTTCATTC-3'和HbADF6R： 5'-GGATTTGTCTCCCCTGAGG-3'，以橡膠樹(shù)熱研7-33-97膠乳cDNA為模板擴(kuò)增ORF序列。根據(jù)Unigene22074序列設(shè)計(jì)3'RACE引物HbADF6-3R-GSP：5'-CAACATCTCGAATCCGAGCCA-3'和HbADF6-3R-NSP：5'-CTCTACAGAGATGGATCTTGAAG-3'，以熱研7-33-97膠乳RNA為模板，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)擴(kuò)增3'非翻譯區(qū)。用Unigene22074序列在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行blastn比對(duì)，結(jié)果比對(duì)到橡膠樹(shù)熱研7-33-97基因組序列scaffold0706（GenBank登錄號(hào)：LVXX01000706），利用引物HbADF6F與HbADF6R搭配，以橡膠樹(shù)熱研7-33-97基因組DNA為模板進(jìn)行基因組序列擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物回收純化后與pMD18-T載體進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，鑒定為陽(yáng)性的克隆送公司測(cè)序。

1.2.3 HbADF6基因序列生物信息學(xué)分析 利用NCBI的ORF finder查找HbADF6基因的開(kāi)放閱讀框；利用在線軟件ProtParam （http：//web.expasy.org/protparam/）對(duì)HbADF6基因編碼蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測(cè)；利用ScanProsite工具（http：//prosite.expasy.org/scanprosite/）分析HbADF6基因編碼蛋白序列保守結(jié)構(gòu)域；利用SignalP 4.1 Server （http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）和TMHMM Server V. 2.0 （http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）對(duì)HbADF6基因編碼蛋白序列進(jìn)行信號(hào)肽和跨膜域預(yù)測(cè)；通過(guò)在線工具PSORT （http：//psort.hgc.jp/form.html）預(yù)測(cè)HbADF6基因編碼蛋白的亞細(xì)胞定位；在NCBI網(wǎng)站選用blastx比對(duì)同源序列，采用ClustalX 2.1進(jìn)行多序列比對(duì)，采用MEGA5鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；利用NCBI中Splign在線工具對(duì)HbADF6基因的OFR序列和基因組序列進(jìn)行比對(duì)，確定HbADF6基因內(nèi)含子和外顯子的位置。

1.2.4 HbADF6基因表達(dá)分析 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)HbADF6基因表達(dá)模式進(jìn)行分析。根據(jù)HbADF6基因的cDNA序列設(shè)計(jì)特異引物HbADF6-qF： 5'-GACAGGTTCAGAAGGGAGCT-3'，并與HbADF6R引物搭配，以各處理和各組織cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。選用橡膠樹(shù)18S rRNA基因（GenBank登錄號(hào)：AB268099）為內(nèi)參，設(shè)計(jì)特異引物Hb18S-qF：5'-GCTCGAAGACGATCAGATACC-3'和Hb18S-qR：5'-TTCAGCCTTGCGACCATAC-3'對(duì)相應(yīng)模板進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃ 變性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸s，共40個(gè)循環(huán)。相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt法計(jì)算。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 HbADF6基因的cDNA序列獲得及分析

通過(guò)分析橡膠樹(shù)的樹(shù)皮轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Unigene22074序列比對(duì)到植物ADF基因。為驗(yàn)證膠乳中該基因序列的正確性，通過(guò)RT-PCR和RACE技術(shù)獲得橡膠樹(shù)膠乳中該基因的cDNA序列。序列分析顯示該cDNA長(zhǎng)999 bp，含有一個(gè)441 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼146個(gè)氨基酸，5'端非翻譯區(qū)為177 bp，3'端非翻譯區(qū)為381 bp，含有典型的真核生物加尾信號(hào)AATAAA和poly （A）尾，3'非翻譯區(qū)與Unigene22074序列有4 bp差異。blastx比對(duì)結(jié)果顯示，該基因翻譯的氨基酸序列與木薯、麻風(fēng)樹(shù)、蓖麻、可可和木豆等植物ADF蛋白具有較高同源性（圖1）。與毛果楊和擬南芥ADF6的一致性分別為92%和84%，因此將該基因命名為HbADF6。預(yù)測(cè)HbADF6基因編碼蛋白分子量為16.88 ku，理論等電點(diǎn)為7.75。序列分析結(jié)果表明，HbADF6基因編碼蛋白不具有信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域，主要定位于細(xì)胞核，其中14～146位氨基酸序列為ADF-H結(jié)構(gòu)域。

蛋白序列GenBank登錄號(hào)分別為：木薯（OAY32632）、麻風(fēng)樹(shù)（NP_001294893）、蓖麻（XP_002524620）、擬南芥（NP_565719）、毛果楊（XP_002300779）、葡萄（XP_002285175）、可可（XP_007050307）、亞洲棉（XP_017623211）、木豆（XP_020212020）、小豆（XP_017442970）、桃（XP_007201857）、梅花（XP_008235687）。2.2 HbADF6基因組序列的獲得及分析

以DNA為模板擴(kuò)增得到1 680 bp的HbADF6基因組序列，與HbADF6 ORF比對(duì)后發(fā)現(xiàn)該序列包含3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。3個(gè)外顯子大小分別為24、266、151 bp，依次位于DNA序列（以起始密碼子ATG為第1位）的1～24、588～853、1530～1 680位。2個(gè)內(nèi)含子大小分別為563、676 bp（圖2）。內(nèi)/外顯子剪接位點(diǎn)均符合GT/AG模式。

2.3 HbADF6蛋白系統(tǒng)進(jìn)化分析

選取與HbADF6蛋白同源的15個(gè)ADF蛋白進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果表明，單子葉植物水稻（Q7XSN9）和谷子（KQK98402）的ADF蛋白聚為一組，雙子葉植物橡膠樹(shù)、木薯、毛果楊、擬南芥和葡萄等的ADF蛋白聚為一組（圖3）。HbADF6蛋白屬于雙子葉植物亞類，與同屬大戟科的木薯、蓖麻和麻風(fēng)樹(shù)親緣關(guān)系最近。

2.4 HbADF6基因表達(dá)模式分析

實(shí)時(shí)熒光定量分析結(jié)果表明，HbADF6基因在所有檢測(cè)組織中均表達(dá)，表達(dá)豐度由高到低分別為樹(shù)皮、雌花、雄花、膠乳和葉片（圖4-A）。與健康樹(shù)相比，死皮橡膠樹(shù)膠乳中HbADF6基因下調(diào)表達(dá)，其中5級(jí)死皮樹(shù)膠乳中HbADF6基因的表達(dá)量最低（圖4-B）。KI處理后膠乳中HbADF6基因的表達(dá)量逐漸升高，24 h達(dá)到最高，約為0 h表達(dá)量的4.64倍，隨后降低（圖4-C）。ET處理后膠乳中HbADF6基因表達(dá)模式與KI處理類似，同樣為先升高后降低趨勢(shì)。最高表達(dá)量出現(xiàn)在處理后48 h，約為0 h表達(dá)量的4.96倍（圖4-D）。隨著排膠時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照膠乳中HbADF6基因的表達(dá)量逐漸下調(diào)，T3時(shí)段采集的膠乳中HbADF6基因的表達(dá)量最低。在整個(gè)排膠進(jìn)程中，ET處理后的膠乳中HbADF6基因的表達(dá)量均高于對(duì)照，其中T2時(shí)段收集的膠乳中HbADF6基因的表達(dá)量最高，隨后下調(diào)（圖4-E）。

3 討論

植物ADF基因的內(nèi)含子數(shù)量和位置相對(duì)保守。擬南芥中的11個(gè)ADF基因均含有2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子。Nan等[19]將之分為4個(gè)亞類，其中第I和II亞類中的8個(gè)擬南芥ADF基因的第1個(gè)內(nèi)含子緊鄰ATG，第III和IV亞類的AtADF5、AtADF6和AtADF9基因的第1個(gè)外顯子更長(zhǎng)。值得注意的是，擬南芥第1個(gè)內(nèi)含子含有假定的增強(qiáng)子基序，能影響基因轉(zhuǎn)錄表

達(dá)[20-21]。本研究獲得的HbADF6與AtADF6基因序列一致性高達(dá)84%，同樣具有2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子，兩者的第1個(gè)外顯子均為24 bp。根據(jù)ADF第1內(nèi)含子的保守功能，推測(cè)HbADF6基因的第1內(nèi)含子可能影響基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。與之前本項(xiàng)目組獲得的HbADF基因序列[16]進(jìn)行比較分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HbADF6與HbADF基因的ORF序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列一致性分別為64.17%和65.07%。HbADF基因也具有2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子，但第1個(gè)內(nèi)含子位置與第I和II亞類中擬南芥ADF的第1個(gè)內(nèi)含子位置一樣緊鄰ATG[17]。說(shuō)明HbADF6與HbADF基因可能分屬橡膠樹(shù)ADF基因家族的不同亞類。Nan等[19]研究發(fā)現(xiàn)ADF可分為D-型活性（解聚F-肌動(dòng)蛋白）和B-型活性（結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白），擬南芥AtADF6屬于D-型活性。根據(jù)ADF功能的保守性，推測(cè)橡膠樹(shù)HbADF6可能也屬于D-型活性ADF，在橡膠樹(shù)中主要執(zhí)行解聚F-肌動(dòng)蛋白功能。

死皮樹(shù)割面乳管部分或全部堵塞，排膠量下降或完全停止排膠。實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果顯示，與健康樹(shù)相比，死皮樹(shù)膠乳中HbADF6基因下調(diào)，其中5級(jí)死皮樹(shù)中表達(dá)量最低。死皮樹(shù)中HbADF6基因下調(diào)可能引起F-肌動(dòng)蛋白解聚減少，促進(jìn)“蛋白質(zhì)網(wǎng)”形成，加快乳管堵塞，縮短排膠時(shí)間，防止膠乳過(guò)度流失。肌動(dòng)蛋白微絲解聚劑KI調(diào)控膠乳中HbADF6基因表達(dá)，說(shuō)明HbADF6基因可能參與KI解聚微絲的過(guò)程。5% KI引起橡膠樹(shù)死皮[13]，進(jìn)一步說(shuō)明HbADF6基因可能通過(guò)參與微絲解聚在橡膠樹(shù)死皮過(guò)程中發(fā)揮作用。值得注意的是，膠乳中HbADF6與HbADF基因在不同死皮等級(jí)和KI處理?xiàng)l件下表達(dá)模式類似，說(shuō)明HbADF6與HbADF基因可能通過(guò)解聚微絲在橡膠樹(shù)死皮中發(fā)揮冗余功能。但HbADF6基因在2級(jí)死皮樹(shù)膠乳中的表達(dá)量高于4級(jí)死皮樹(shù)，而HbADF基因在2級(jí)死皮樹(shù)膠乳中的表達(dá)量低于4級(jí)死皮樹(shù)[17]。

ET作為生產(chǎn)中常用的增產(chǎn)刺激劑，能明顯延長(zhǎng)排膠時(shí)間[22]。ET處理后膠乳中HbADF6基因逐漸上調(diào)，直至處理72 h開(kāi)始下調(diào)。這可能是ET誘導(dǎo)HbADF6基因上調(diào)表達(dá)，導(dǎo)致F-肌動(dòng)蛋白解聚增加，延緩乳管傷口末端“蛋白質(zhì)網(wǎng)”形成，從而延長(zhǎng)排膠時(shí)間。鄧順楠[14]研究發(fā)現(xiàn)未處理對(duì)照和ET處理的橡膠樹(shù)膠乳中肌動(dòng)蛋白含量隨著排膠進(jìn)程均呈逐漸減少的趨勢(shì)，但ET處理的橡膠樹(shù)膠乳中肌動(dòng)蛋白排出總量高于對(duì)照，整個(gè)排膠進(jìn)程中ET處理的橡膠樹(shù)乳管傷口處蛋白質(zhì)聚集量明顯低于對(duì)照。高政權(quán)等[13]通過(guò)羅丹明-鬼筆環(huán)肽染色法、鄧順楠[14]通過(guò)肌動(dòng)蛋白免疫熒光定位法均發(fā)現(xiàn)割膠后肌動(dòng)蛋白在乳管傷口末端逐漸聚集，推測(cè)膠乳中肌動(dòng)蛋白可能在排膠過(guò)程中被逐漸截留在乳管傷口處。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在整個(gè)排膠進(jìn)程中，ET處理的橡膠樹(shù)膠乳中HbADF6基因表達(dá)量均高于對(duì)照，說(shuō)明在排膠過(guò)程中ET可能通過(guò)誘導(dǎo)HbADF6基因來(lái)增加膠乳中F-肌動(dòng)蛋白解聚活性，從而推遲“蛋白質(zhì)網(wǎng)”形成，使得ET處理橡膠膠樹(shù)排膠時(shí)間延長(zhǎng)，導(dǎo)致膠乳中肌動(dòng)蛋白排出量高于對(duì)照。值得注意的是，雖然ET處理誘導(dǎo)T2時(shí)段收集的膠乳中HbADF6基因上調(diào)表達(dá)，但T3時(shí)段HbADF6基因表達(dá)量下調(diào)。說(shuō)明在整個(gè)排膠進(jìn)程中ET并未一直誘導(dǎo)HbADF6基因上調(diào)表達(dá)，這可能是橡膠樹(shù)為阻止乳管細(xì)胞成分過(guò)度流失和保障正常的膠乳再生能力，通過(guò)降低F-肌動(dòng)蛋白解聚活性，促進(jìn)“蛋白質(zhì)網(wǎng)”形成以封閉乳管傷口，從而保護(hù)自身正常生長(zhǎng)。

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