HPLC法測定玉葡萄根中兒茶素的含量

逯珍花甘肅省天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，甘肅 天水 741020

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HPLC法測定玉葡萄根中兒茶素的含量

逯珍花
甘肅省天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，甘肅 天水 741020

目的：建立高效液相色譜法定量測定玉葡萄根中兒茶素。方法：玉葡萄根甲醇提取液，采用Agilent ZORBAX Extend-C18柱(4.6mm×250mm，5μm),流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(10:90)；體積流量：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm。結(jié)果：兒茶素在 0.1998～1.9980μg(r=0.9997)范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.32%，RSD為0.83%。結(jié)論：本方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可以較好的測定兒茶素。

高效液相色譜法；玉葡萄根；兒茶素

中藥材“玉葡萄根”為葡萄科蛇葡萄屬多年生攀援藤本植物三裂蛇葡萄Ampelopsisdelavayana(Franch.) Planch.的根，別名肥豬藤、鳥血藤、三裂蛇葡萄、萬初牛、赤木通、野葡萄根、金剛散、綠葡萄、玉葡萄、耳墜果、野葡萄、五爪金等。其味澀、微苦，溫，歸肝、腎、膀胱、大腸經(jīng)。臨床用于跌打損傷、骨折、燒傷、燙傷、腸炎腹瀉、尿澀尿痛、小便淅瀝[1]，在骨折方面效果很好，能顯著減輕患者的炎癥和疼痛，并對骨折的愈合有促進(jìn)作用[2]。玉葡萄根廣范分布于云南省各地[3]，近年來，對于該屬的藥用植物研究較多。在化學(xué)成分研究方面，其化合物類型有黃酮類、低聚茋類、酚酸類、甾醇類、萜類、揮發(fā)油等，主要為黃酮類、低聚茋類化合物、酚酸類化合物[4-5]。但對于玉葡萄根的化學(xué)成分和含量測定研究很少。根據(jù)筆者對玉葡萄根化學(xué)成分的研究結(jié)果，擬以從中分離得到的含量較高的兒茶素作為對照品，建立高效液相色譜含量測定方法，作為玉葡萄根質(zhì)量控制的含量檢測指標(biāo)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-2010AHT高效液相色譜儀(四元泵、脫氣單元、UV檢測器、柱箱/帶制冷、自動進(jìn)樣器、系統(tǒng)控制器、CLASS-VP， 日本島津)；色譜柱：Agilent ZORBAX Extend-C18柱(4.6mm×250 mm,5μm),AUW1200型分析天平(日本島津)。

1.2 試藥 兒茶素(批號：110877-201102，中國藥品生物制品檢定所 )。乙腈為色譜純，水為超純水(自制)，其他試劑均為分析純。

玉葡萄根(批號：20110602，新平縣大開門 ；批號：20110605，石屏縣龍朋鎮(zhèn)；批號：20110620，楚雄州祿豐縣；批號：20110621，大理市巍山巍寶山；批號：20110625，昆明市廠口鄉(xiāng)；批號：20110810，麗江市永勝縣；批號：20110825，彌渡縣密祉鄉(xiāng)； 批號：20110910，大理市巍山大倉； 批號：20110915，祿勸撒營盤鄉(xiāng)；批號：20110928，尋甸縣狗街)粉末(過50目篩)，十批藥材均為自采。分別經(jīng)楊樹德教授、趙仁主任藥師、譚文紅副主任藥師鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物三裂蛇葡萄Ampelopsisdelavayana(Franch.) Planch.的根(玉葡萄根)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX Extend-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)(10∶90)，等度洗脫；體積流量：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm；進(jìn)樣量：5μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定兒茶素對照品0.02498g，加入甲醇使溶解，定容至25mL容量瓶中。制成含兒茶素0.1998mg/mL的溶液，作為對照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末(過50目篩)2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，吸取上清液，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試品溶液。

在“2.1”項色譜條件下，分別精密吸取“2.2”項下對照品溶液和“2.3”項下供試品溶液各5μL，注入HPLC色譜儀進(jìn)行測定。結(jié)果，兒茶素與相鄰組分基線完全分離，峰形良好，保留時間為8.1min，見圖1、圖2。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2”項下對照品溶液1、2、4、6、8、10μL，按“2.1”項色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積積分值，以兒茶素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析，計算出回歸方程及檢測范圍。結(jié)果，兒茶素的回歸方程為Y=778958X+39755，r=0.9997。表明兒茶素在0.1998～1.9980μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取“2.2”項下對照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次測定，結(jié)果，兒茶素的RSD=0.56%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批次藥材(批號：20110910)6份，按“2.3”項下方法平行制備供試品溶液進(jìn)行測定。結(jié)果，兒茶素的RSD=2.74 %，說明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密稱取藥材(批號：20110910)2.0g，按2.3項下方法制備供試品溶液。對放置不同時間(0、2、4、8、12h)的供試品溶液分別進(jìn)行測定。結(jié)果，兒茶素的RSD=0.55%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗 取已知含量的同一批藥材(批號：20110910)6份，每份約1g，精密稱定，分別精密加入相同量的兒茶素對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，并測定其含有量，結(jié)果見表1。由表可知，該方法加樣回收率良好。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品測定 按“2.3”項下方法，對十批樣品進(jìn)行兒茶素測定，結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地玉葡萄根兒茶素含量測定結(jié)果

3 討論

10批不同產(chǎn)地玉葡萄根中兒茶素含量的測定，平均為0.34%。從樣品采集時間分析，集中在6～9月，不會對兒茶素含量產(chǎn)生明顯影響。從樣品來源地理分布分析，玉葡萄根藥材中的兒茶素含量，依次升高，順序為：大理市巍山巍寶山、楚雄州祿豐縣、石屏縣龍朋鎮(zhèn)、麗江市永勝縣、新平縣大開門和尋甸縣狗街、大理市巍山大倉、彌渡縣密祉鄉(xiāng)、昆明市廠口鄉(xiāng)和祿勸撒營盤鄉(xiāng)。大理市巍山巍寶山產(chǎn)含量最低，昆明市廠口鄉(xiāng)和祿勸撒營盤鄉(xiāng)產(chǎn)玉葡萄根中含量較高。從上述分析結(jié)果得出初步結(jié)論，不同產(chǎn)地對玉葡萄根藥材和飲片中兒茶素含量的影響較大。以測定所得中值，平均為0.30%，按70%計算，將玉葡萄根藥材和飲片含量限度暫定為：本品按干燥品計算，含兒茶素(C15H14O6)不得少于0.21%。本試驗采用HPLC法測定玉葡萄根中兒茶素的含量，為今后更深入的研究玉葡萄根提供參考。

[1]云南省食品藥品監(jiān)督管理局. 云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第二冊 彝族藥)[S].昆明：云南科技出版社,2005: 45-46.

[2]劉曉波,劉曉正,晏彩芬,等.玉葡萄根耐缺氧作用的研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志, 2007, 28 (11): 39-40.

[3]陳燕,梁敬鈺. 蛇葡萄屬藥用植物的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2009, 21 (3):5-7.

[4]He GX，Pei G，Zhou TD，et al,Determination of total flavonoids and dihydromyricetin in Ampelopsis grossedentala (Hand-Mazz) W. T. Wang[J]. China journal of Chinese materia medica,2000, 25 (7): 423-425.

[5]Du Q,Chen P， Jerz G,et al.Preparative separation of flavonoid glycosides in leaves extract of Ampelopsis grossedentata using high-speed counter-current chromatography[J]. J Chromatogr A,2004, 40 (1):147-149.

Determination Catechin of Root ofAmpelopsisDelavayanaby HPLC

LU Zhenhua

Tianshui Combine Traditional Chinese and Western Medicine Hospital,Tianshui 741020,China

Objective To establish a method for determining catechin of root ofAmpelopsisdelavayanaby HPLC.Methods Theanalysis of A.delavayanamethanolic extract was carried out on Agilent ZORBAX Extend-C18 column(4.6mm×250mm,5μm)with acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous (10:90)as mobile phase,flow rate wsa 1.0mL/min,column temperature was maintained at 30℃,and detection wavelength was set at 280 nm.Results catechin was 0.1998～1.9980μg(r=0.9997),respectively,The average recoveries were 99.32%(RSD0.83%).Conclusion The method is simple,accurate and candeterminecatechin.

HPLC;Root ofAmpelopsisDelavayana;Catechin

逯珍花(1976-)，女，碩士，主管中藥師，研究方向為醫(yī)院制劑的研發(fā)及注冊申報。E-mail:463760252@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)07-0026-03

2017-01-23 編輯：程鵬飛)