云南山地仿野生撫育姜黃后姜黃素的含量變化研究

張婭+李艷萍+夏海梅

摘要：目的筆者對(duì)姜黃仿野生撫育后其姜黃素含量變化及其仿野生撫育后其藥材品質(zhì)進(jìn)行了相關(guān)的追蹤研究，研究結(jié)果將為今后仿野生種植藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)和品質(zhì)保證提供依據(jù)。方法用HPLC，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為430nm，分別測(cè)定姜黃種苗、仿野生撫育一年后子代、二年后子代中姜黃素的含量，并進(jìn)行對(duì)比分析。且對(duì)含量較高的姜黃子代藥材進(jìn)行了檢查、鑒別、浸出物等檢測(cè)。結(jié)果經(jīng)過(guò)含量測(cè)定及對(duì)比分析可知，姜黃素含量：兩年后子代>姜黃種苗>一年后子代。

關(guān)鍵詞：姜黃；姜黃素；仿野生撫育；含量變化

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號(hào)：1007-2349（2016）09-0081-03

姜黃有多種有效化學(xué)成分，在腫瘤、慢性肝病、糖尿病、腎病、皮膚病等疾病的治療上體現(xiàn)出了優(yōu)勢(shì)[1]。姜黃為姜科植物姜黃的干燥根莖，主要產(chǎn)于四川、福建等地，一般為野生，現(xiàn)多為栽培，生用[2]。其性味辛、苦、溫，歸脾、肝經(jīng)，有破血行氣、通經(jīng)止痛之功效，被廣泛應(yīng)用于胸脅刺痛、閉經(jīng)、風(fēng)濕肩臂疼痛、跌打腫痛等病癥[3]。姜黃的生物活性成分包括姜黃酮、姜烯、水芹烯、莪術(shù)酮、姜黃素、胭脂樹橙、微量元素等。其中姜黃素作為其所含的主要成分，有著多種藥理作用和重要的經(jīng)濟(jì)前景，近年來(lái)被廣泛關(guān)注[4]。近年來(lái)研究表明，姜黃素具有抗腫瘤、護(hù)肝、調(diào)節(jié)免疫功能、抗炎和降血脂等多重藥理作用[5]。

目前我國(guó)仍有80%左右的中藥材來(lái)自野生，保證野生中藥資源的可持續(xù)利用，保證野生藥材采集與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的協(xié)調(diào)，實(shí)現(xiàn)人與自然的和諧共處，是中醫(yī)藥可持續(xù)發(fā)展必須解決的關(guān)鍵問(wèn)題之一[6]。另一方面，如何提高栽培藥材質(zhì)量，使其與野生藥材相近，保證生產(chǎn)藥材的天然性，也倍受人們關(guān)注。藥用植物野生撫育具有重要的意義與優(yōu)勢(shì)，有效解決了如下矛盾：藥材采集與資源更新的矛盾；野生藥材供應(yīng)短缺與需求不斷增加的矛盾；藥材生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的矛盾；當(dāng)前利益與長(zhǎng)遠(yuǎn)利益的矛盾。具有如下優(yōu)勢(shì)：①提供高品質(zhì)的野生藥材，野生撫育藥用植物在原生環(huán)境中生長(zhǎng)，人為干預(yù)少，不易發(fā)生病蟲害，遠(yuǎn)離污染源，產(chǎn)品為近乎天然的野生藥材[7]。②能較好保護(hù)珍稀瀕危藥用植物，促進(jìn)中藥資源可持續(xù)利用。野生撫育是藥用植物資源遷地保護(hù)、就地保護(hù)及栽培三者的有機(jī)結(jié)合。通過(guò)合適的藥材采挖方法，種群自然繁殖或及時(shí)補(bǔ)種，實(shí)現(xiàn)了撫育藥用植物種群的可持續(xù)更新，較好地保護(hù)了珍稀瀕危藥用植物及其生物多樣性[8]。③有效保護(hù)中藥資源生長(zhǎng)的生態(tài)環(huán)境，野生撫育模式下藥材采挖和生產(chǎn)是在生物群落動(dòng)態(tài)平衡的基礎(chǔ)上進(jìn)行，野生撫育基地藥用植物所有權(quán)專有化克服了野生藥材濫采濫挖對(duì)生態(tài)環(huán)境的嚴(yán)重破壞，實(shí)現(xiàn)了藥材生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的協(xié)調(diào)發(fā)展。④有效節(jié)約耕地，以低投入獲高回報(bào)，野生撫育不占用耕地，只在補(bǔ)種和藥用植物生長(zhǎng)過(guò)程中實(shí)施最低限度的人為干預(yù)，充分利用了藥用植物的自然生長(zhǎng)特性，大幅降低了人工管理費(fèi)用。

野生姜黃多分布在落葉混交林及常綠林內(nèi)。伴生植物有楓香、馬桑、山胡椒、石楠、薔薇和懸鉤子等，伴生植物也是姜黃生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中必不可缺的部分。土壤主要以山地棕壤紅黃壤為主，年平均溫度為16-18℃。姜黃從發(fā)芽到種子成熟一般一年即可完成。其分為：萌芽期、莖葉生長(zhǎng)期、花果期以及根狀莖生長(zhǎng)期等。姜黃被選定為云南省中醫(yī)藥治療艾滋病試點(diǎn)項(xiàng)目用藥復(fù)方制劑組成中一味重要的中藥材，為了保證中醫(yī)藥治療艾滋病用藥的有效性和安全性，也為了仿野生撫育技術(shù)今后能得到大力推廣，筆者對(duì)野生姜黃的種苗進(jìn)行了云南山地引種后使其在自然環(huán)境下仿野生撫育，對(duì)其不同子代中其主要有效成分姜黃素含量變化進(jìn)行相關(guān)研究，其研究結(jié)果將為今后仿野生種植藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)和品質(zhì)保證提供依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料、儀器

11實(shí)驗(yàn)材料姜黃種苗、姜黃一年后子代、姜黃兩年后子代：采自云南省西疇縣把獨(dú)村仿野生中藥材種植基地。

12實(shí)驗(yàn)儀器戴安UltiMate3000高效液相色譜儀（美國(guó)戴安公司）；Gemini5uC1811oA46×250 mm色譜柱（美國(guó)phenomenex公司）；PhernomexC18保護(hù)柱（美國(guó)phenomenex公司）；BSA124S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；ZF-I型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；CQ250超聲清洗儀（上海超聲波儀器廠）電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；202-1A（PCD-3000serials）烘箱（上海喬躍電子有限公司）

2實(shí)驗(yàn)方法

21水分檢查

211姜黃（種苗）水分測(cè)定取姜黃供試品26452 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶（286237 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量（309815 g），再在105℃下干燥1h，冷卻，稱重（309796 g），至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減失重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。

212姜黃（一年后子代）水分測(cè)定取姜黃供試品26525 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶（283550 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量（307576 g），再在105℃下干燥1 h，冷卻，稱重（307541 g），至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。

213姜黃（兩年后子代）水分測(cè)定取姜黃供試品24456 g，放入干燥至恒重的扁形稱瓶（282587 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷卻30 min，精密稱定重量（305190 g），再在105℃下干燥1 h，冷卻，稱重（305167 g），至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減失重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。

22灰分檢查取干燥至恒重（629666 g）坩堝，稱取姜黃兩年生子代藥材40247 g，放到電爐上加熱至無(wú)煙，轉(zhuǎn)移至電爐500℃下加熱5 h，移至干燥器，干燥30 min，稱重。

23酸不溶性灰分的檢查向上述裝有灰分的坩堝中加入10 mL稀鹽酸（95%-105%），水浴加熱10 min，加熱期間用5mL熱水沖洗蓋子，洗液并入坩堝中，10 min后用無(wú)灰濾紙過(guò)濾，水洗濾紙上的殘?jiān)敛伙@氯化物反應(yīng)為止（用AgNO3試液測(cè)試不產(chǎn)生Agcl沉淀為止）。濾渣同濾紙移至坩堝，坩堝移至電爐干燥至恒重。

24浸出物檢查取干燥至恒重（839315 g）平底燒瓶，加20318 g姜黃兩年生子代藥材，加50%稀乙醇50 mL，塞緊稱重（1656 g），靜置1 h，加熱回流，微沸1h，放冷，取下燒瓶，稱重（減失量用50%稀乙醇補(bǔ)足），過(guò)濾，取濾液25 mL至干燥恒重的蒸發(fā)（757330 g），蒸干，放入干燥器30 min，稱重為759917 g。

25薄層鑒別取兩年生子代姜黃粉末（過(guò)一號(hào)篩）02 g，加無(wú)水乙醇20 mL振搖，放置30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取姜黃素對(duì)照品，同法配置，作為對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣：吸取上述溶液各4 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上。展開(kāi)劑：以三氯甲烷-甲醇-甲酸（96：4：07）為展開(kāi)劑。檢視條件：分別置于日光下及紫外燈（365 nm）下檢視。

26含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為430 mn。理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

對(duì)照品溶液的制備 取姜黃素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含10 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取不同姜黃細(xì)粉約02 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱定重量，超聲處理20 min，搖勻，離心，精密量取上清液1 mL，置10 mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度線，搖勻，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注人液相色譜儀，測(cè)定，即得。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

34小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)仿野生姜黃種苗、一年后子代、兩年后子代進(jìn)行相關(guān)研究（主要包括水分、灰分、水溶性浸出物、薄層鑒別、含量測(cè)定）。并采用HPLC法對(duì)姜黃野生種苗及其仿野生種植后不同子代藥材中有效成分姜黃素進(jìn)行含量比對(duì)分析。比對(duì)結(jié)果可見(jiàn)，姜黃素含量：兩年后子代>姜黃種苗>一年后子代。

研究目的在于通過(guò)對(duì)引種后仿野生種植的不同年限的子代藥材進(jìn)行采挖，并對(duì)其進(jìn)行有效成分的含量比對(duì)，以期得到含量最接近野生藥材的第二代藥材。該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)從中藥資源學(xué)的角度考慮，為仿野生種植藥材的有效性及可推廣性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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