冠心益壽丸（濃縮丸）的提取工藝研究

陳銘勇 顧偉 車京梅 李順清 李雪瓊

摘要：目的確定冠心益壽丸（濃縮丸）的最佳提取工藝。方法采用正交試驗法，參照《中華人民共和國藥典》2015 年版一部的相關(guān)規(guī)定，采用薄層色譜法對醇提物中丹參、白芍的有效成分及水提物中當歸、山楂的有效成分鑒別，優(yōu)選冠心益壽丸醇提及水提工藝。結(jié)果在綜合考慮醇提中丹參和白芍主要有效成分含量的情況下選取加60%乙醇水8倍量在80℃條件下提取1 h作為醇提的最優(yōu)工藝條件；選取加水8倍量，每次提取1 h，共提取2次作為水提的最優(yōu)工藝條件。

關(guān)鍵詞：冠心益壽丸；提取工藝；薄層色譜法

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2016）10-0075-03

近年來，冠心病已位于致死疾病之首，因而受到全球醫(yī)學界的密切關(guān)注。冠心病術(shù)后冠脈再狹窄（RS）率高，可達20%～30%，因此，冠心病術(shù)后再狹窄防治成為冠心病治療的難點和熱點[1]。中醫(yī)學認為冠脈介入術(shù)后再狹窄屬中醫(yī)“胸痹”、“心痛”、“真心痛”的范疇，由心脈痹阻引起，為血瘀證，介入術(shù)只是解決局部病變，其機械損傷致新的瘀血形成[2]，患者的體質(zhì)與病機沒有改變，尚需整體調(diào)治。

冠心益壽丸源自本院名老中醫(yī)來春茂的經(jīng)驗方，臨床應用20余年，以益氣化瘀為主，臨床對治療冠脈介入術(shù)后再狹窄具有顯著療效。對冠心病的治療具有獨特療效。前期研究表明冠心益壽丸能明顯改善或消除冠心病人的臨床癥狀，顯著減少心絞痛的發(fā)作次數(shù)及縮短心絞痛的持續(xù)時間并使患者心電圖ST-T得到顯著改善，長期服用能明顯降低總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）值[3]。由于傳統(tǒng)湯劑存在著服用及攜帶不方便等多種不足，將湯劑改成體積小、攜帶方便，不添加任何防腐劑并能保持中藥天然特色的濃縮丸將更加便于臨床應用，方便患者服用，提高患者依從性。本文依據(jù)濃縮丸的劑型特點和質(zhì)量要求，對冠心益壽丸的藥材提取工藝進行了研究，通過薄層色譜法對當歸、山楂、丹參、白芍的檢測確定了最佳提取工藝。

1儀器與試藥

1.1實驗設(shè)備水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，DZKW-3-4），電子分析天平（上海佑科儀器儀表有限公司，F(xiàn)A2001B）。

1.2藥材與試劑阿魏酸對照品（批號：110773），熊果酸對照品（批號：110742），丹參酮ⅡA對照品（批號：110766），芍藥苷對照品（批號：110736），當歸對照藥材（批號：120927）（供薄層色譜鑒定用，均購自云南省藥品檢驗所）。本實驗所用試劑均為分析純，藥材均購自云南泰華豐功中藥飲片公司，符合中國藥典2015年版相關(guān)規(guī)定。

2方法與結(jié)果

綜合考慮處方中各藥的有效成分及極性，為保證處方藥效不變，且最大限度地確保有效成分的提取，本研究在保留了原水提工藝的基礎(chǔ)上成分提取前移，將方中黃芪、丹參、白芍按方中比例先進行醇提，再將藥渣與方中其他藥材按比例合并進行水提。

2.1醇提因素水平選擇本實驗在預實驗考察的基礎(chǔ)上，采用正交試驗優(yōu)化醇提工藝，選取醇濃度（A），提取時間（B），提取溫度（C）作為考察因素，各因素取3個水平，以L9（34）正交試驗表安排實驗，篩選最佳醇提工藝條件，因素水平見表1。

2.1.2丹參的TLC鑒別取丹參酮ⅡA對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液作為對照品溶液10號。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版）試驗，分別吸取對照品溶液及供試品溶液各5 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6：4：8：1：4）為展開劑，展開，展至約4 cm，取出，晾干，再以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4：1）為展開劑，展開，展至約8 cm，取出，晾干，分別在日光及紫外光燈（365 nm）下檢視（日光下檢視見圖1，紫外光燈下檢視見圖2）。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。

2.1.3白芍的TLC鑒別取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液作為對照品溶液10號。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版）試驗，分別吸取對照品溶液及供試品溶液各10 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰（見圖3）。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。

2.2醇提工藝選擇結(jié)果根據(jù)圖1可以看出，在日光下檢視時1～3號樣品斑點顯示最為清晰，其余樣品無明顯差別；根據(jù)圖2可以看到，6、7號樣品斑點最為明顯；根據(jù)圖3可以看到5～7號樣品斑點顯示最為清晰。在綜合考慮醇提中丹參和白芍主要有效成分含量的情況下選取7號實驗條件（A1B3C3），即60%乙醇在80℃條件下提取1 h作為醇提的最優(yōu)工藝條件。

2.3水提因素水平選擇本實驗在預實驗考察的基礎(chǔ)上，采用正交試驗優(yōu)化水提工藝，選取加水量（A），提取時間（B），提取次數(shù)（C）作為考察因素，各因素取3個水平，以L9（34）正交試驗表安排實驗，篩選最佳水提工藝條件，因素水平見表2.

提取次數(shù)/次1611281.52310232.3.1提取樣品的制備稱取處方量七味藥材9份，合并醇提后的三味藥材共220 g。按表2實驗條件設(shè)計9組水提實驗A1B1C1，A2B3C1，A3B2C1，A1B2C2，A2B1C2，A3B3C2，A1B3C3，A2B2C3，A3B1C3，并編號1～9。將1～9號提取液濃縮至約50 mL后分2次加入40 mL乙酸乙酯萃取，取上層液，合并2次萃取液加入20 mL水再次萃取，取上層液。將萃取液水浴蒸干，殘渣以1 mL甲醇溶解作為供試品溶液1～9號。

2.3.2當歸的TLC鑒別

2.3.2.1阿魏酸對照品鑒別當歸取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg阿魏酸的溶液作為對照品溶液10號。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版）試驗，分別吸取對照品溶液及供試品溶液各10 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視（見圖4）。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.3.2.2當歸對照藥材鑒別當歸取當歸對照藥材0.5 g，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液10號。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版）試驗，分別吸取對照品溶液及供試品溶液各10 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視（見圖5）。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.3.3山楂的TLC鑒別取熊果酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液10號。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版）試驗，分別吸取對照品溶液及供試品溶液各4 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20：4：0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在80℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點（見圖6）；置紫外光燈（365 nm）下檢視，顯相同的橙黃色熒光斑點（見圖7）。

2.4水提工藝選擇結(jié)果根據(jù)圖4可以看出，用阿魏酸檢測當歸時5，6，7，9號樣品斑點顯示最清晰；根據(jù)圖5可以看出，用當歸對照藥材檢測當歸時5，7，9號樣品斑點顯示最清晰；根據(jù)圖6和圖7可以看出，在5、7、8、9號實驗條件下斑點最為明顯。在綜合考慮時間和經(jīng)濟成本的情況下，我們選取最為節(jié)省時間和水量的5號實驗條件（A2B1C2），即加8倍水量，每次提取1小時，共提取2次作為水提的最優(yōu)工藝條件。

3討論

冠心益壽丸從前在本院應用時采用全粉入藥制成大蜜丸，現(xiàn)已越來越不符合中藥現(xiàn)代化的發(fā)展要求，其體積大，有效成分含量低，影響人體吸收等缺點顯而易見。而且在制備過程中極易染菌，影響產(chǎn)品質(zhì)量。本研究將冠心益壽丸制成每克含原生藥材2 g的濃縮丸將克服大蜜丸不易服用，難以儲存的缺點，更加便于臨床使用。由于方中既有醇溶性成份又有水溶性成份，根據(jù)處方中各藥的有效成分及其極性，設(shè)計相應的提取方法，最大程度地確保有效成分提取率成為冠心益壽丸研制中的關(guān)鍵性問題。本研究通過正交試驗，采用薄層色譜法建立了丹參，白芍，當歸的鑒別方法，確定冠心益壽丸的最佳提取工藝參數(shù)，做到工藝科學，合理，確保各藥味主要有效成分的富集，為冠心益壽丸（濃縮丸）的成型工藝及質(zhì)量標準研究打下了堅實的基礎(chǔ)。不足之處在于設(shè)計工藝中僅有TLC進行定性鑒別，沒有采用HPLC（高效液相色譜法）對有效成分進行定量，在后期實驗中會考慮加入HPLC，使本實驗數(shù)據(jù)更加合理完善。

參考文獻：

[1]王昀，顏乾麟，沈雅靜.論冠脈介入術(shù)后再狹窄的中醫(yī)藥防治思路[J].中醫(yī)雜志，2007，48（6）：552-554.

[2]賈海忠.冠狀動脈成形術(shù)后再狹窄的辨識及對策[J].中醫(yī)雜志，2001，42（8）：494～496.

[3]曹東，來圣吉，來圣麗，等.冠心益壽丸治療冠心病318例療效總結(jié)[J].云南中醫(yī)中藥雜志，1995，16（6）：32-33.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2015年版（一部）.北京：化學工業(yè)出版社，2010；37，76，105，133.