薄層色譜法檢測阿奇霉素及其有關物質

張麗娜

[摘 要]比較了多種阿奇霉素的薄層色譜條件，確定了分離效果較好的展開系統(tǒng)和靈敏度較高的顯色劑。設計了系統(tǒng)適用性實驗方法和三個濃度的對照品，從而確定了較理想的阿奇霉素及有關物質薄層色譜檢測法。市售硅膠預制版，展開劑為乙酸乙酯一正乙烷一二乙胺，顯色劑為苯酚3g，硫酸5m1、無水乙醇95 m1混勻，均勻噴至板上后80 C加熱數(shù)分鐘。該法靈敏度高、分離效果好，特別是系統(tǒng)適用性實驗和多濃度點對照液的設計，彌補了薄層色譜法測定阿奇霉素及其有關物質時結果的準確性易受薄層色譜條件影響、且量化功能較差的弱點，具有一定的特色。

[關鍵詞]阿奇霉素；薄層色譜法；降解物質；溶劑系統(tǒng)；顯色劑

中圖分類號：R443 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）10-0339-01

阿奇霉素在當前我國臨床醫(yī)學中得到較為廣泛的應用，屬于新一代的大環(huán)內酯類抗生素，在廣譜抗菌方面具有重要作用。國際上對阿奇霉素及其有關物質的測定主要有TLC法和HPLC法。在我國對阿奇霉素及其有關物質進行測定時，應當結合我國的實際情況進行系統(tǒng)化分析，就我國當前檢測儀器和試劑的純度條件進行分析，我們主要采用薄層色譜法對阿奇霉素及其有關物質進行檢測，選取分離效果較好的展開系統(tǒng)以及靈敏度較高的顯色劑，對阿奇霉素及其有關物質的檢測結果進行可靠地保證。

1 檢測材料的選取

阿奇霉素標準品，批號：960202，北京藥品檢驗所標定，效價為975u/mg，有關物質低于1. 5%；紅霉素標準品，批號： 3079312，中國藥品生物制品檢定所，效價為888u/mg；阿奇霉素原料及膠囊，北京太洋藥業(yè)公司提供。

苯酚、磷鉑酸、無水乙醇、硫酸、乙酸乙酯、正乙烷、二乙胺、三乙胺、三氯甲烷、甲醇、苯、冰乙酸均為市售分析純。

硅膠G預制板，市售，青島海洋化工廠和北京科聚友醫(yī)藥生物工程研究所生產。

2 檢測方法與檢測結果分析

2.1 對五種TLC展開劑進行對比分析

稱取阿奇霉素標準品、紅霉素標準品適量，并選取經過標準高溫條件下進行加熱的阿奇霉素樣品適量，三種樣品分別加入污水乙醇進行溶解，并加入標準溶液進行稀釋，確保稀釋后的溶液每1毫升中大約含有30毫克的溶液，在此基礎上取適量阿奇霉素和紅霉素標準品溶液進行混合。那么通過觀察分析可知，當前共有四種溶液，我們分別對這四種溶液進行選取，滴于同一規(guī)格的硅膠預制板上，通過五種TLC展開劑進行展開并進行晾干，在此基礎上噴以相同的顯色劑進行顯色，斑點形狀及斑點個數(shù)見表1.

通過苯-三氯甲烷-三乙胺（4：5：1）展開劑進行展開時，能夠將阿奇霉素與紅霉素進行合理的分離，但拖尾現(xiàn)象較為明顯，在一定程度上影響了加熱破壞后樣品的雜質檢出，導致雜質檢出的實際效果缺乏準確性。通過乙酸乙酯-正乙烷-二乙胺（5：5：1）展開劑對溶液進行展開時，可以看出阿奇霉素和紅霉素得到了有效的分離，無明顯拖尾現(xiàn)象，具有良好的雜質檢出效果。通過三氯甲烷-笨-甲醇-濃氨（10：30：10：0.5）進行展開，可以觀察到阿奇霉素和紅霉素勉強得到分離，盡管不存在拖尾現(xiàn)象，但是雜質檢出的效果并不理想，僅能夠檢測出阿奇霉素、紅霉素以及三個其他雜質斑點。使用笨-三氯甲烷-三乙胺（5：4：1）展開劑能夠使阿奇霉素和紅霉素得到有效的分析，拖尾現(xiàn)象相對比較嚴重，并且在很大程度上影響了雜質的檢出效果，無法可靠地檢測出其他雜質斑點。使用甲醇-冰乙酸-水（8：2：1）進行展開時，阿奇霉素和紅霉素勉強得到分離，但加熱破壞后樣品雜質不能夠得到有效的檢出。從整體情況來看，乙酸乙酯-正乙烷-二乙胺（5：5：1）展開劑的實際應用占優(yōu)勢，具有良好的檢測效果。

2.2 三種顯色劑的對比分析

將上述阿奇霉素標準品溶液適量用無水乙醇稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，分別吸取適量點于同一硅膠G薄層板上（同時點3塊板），用上述B展開劑展開，取出晾十后分別噴以A，B，C 3種顯色劑顯色，由表2可看出，顯色劑B在檢測靈敏度、斑點與背景顏色反差力一面均較A，C顯色劑優(yōu)越。綜上所述，硅膠G為固定相，乙酸乙酯一正乙烷一二乙胺（5：5：1）為展開劑，顯色劑為苯酚3g、硫酸5m1、無水乙醇95m1混勻，噴勻后在80度加熱數(shù)分鐘，此薄層色譜系統(tǒng)可作為阿奇霉素及其有關物質較理想的檢測方法。

2.3 阿奇霉素及其有關物質的檢查

取本品適量，精密稱定，用無水乙醇溶解并制成每1ml中含30mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取該溶液2.0ml，并取紅霉素標準品30mg，置同一100m1容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（1）；另精密量取供試品溶液1. 0和0. 5m1，分別置100m1量瓶中，加同溶稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（C2）和（C3）。按薄層色譜法實驗，吸取上述4種溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一正乙烷一二乙胺（5：5：1）為展開劑，展開后，晾干，噴以顯色液（取苯酚3g、硫酸5m1、無水乙醇95m1混勻），置80 C加熱數(shù)分鐘，至班點顯現(xiàn)。對照溶液（1）中阿奇霉素與紅霉素斑點應分離完全；供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液的主斑點比較，最大雜質斑點的顏色不得深于對照溶液（1）的主斑點（2%）；雜質總量不得超過3%。

2.4 供試品溶液的穩(wěn)定性考察

取上述阿奇霉素標準品溶液于配制2，4，24h后分別點樣，結果供試品溶液在4h內可基本穩(wěn)定，在24h后阿奇霉素有大部分變?yōu)榧t霉素。

3 討論

3.1TLC法測定阿奇霉素及其有關物質的實際分離效果若存在一定差異性，那么會對測定的精準程度產生一定影響，這就需要通過系統(tǒng)適用性試驗來對系統(tǒng)的有效性進行準確的檢測，從而明確阿奇霉素及其有關物質實際含量。通過測定試驗可知，紅霉素是阿奇霉素的主要降解物質，易于得到，且斑點物質與阿奇霉素相鄰，因而選取紅霉素作為薄層色譜的適用性實驗的標準物質，對于保證色譜系統(tǒng)有效性方面具有重要意義。

3.2TCL法在實際應用過程中對阿奇霉素及其有關物質進行測定時，也不免存在一些弱點，尤其是在遇到多個雜質斑點出現(xiàn)時，對于斑點雜質總量的加和上存在一定難度。這就要求在進行阿奇霉素及其有關物質進行測定時，可以通過多種濃度對照液的科學化配制，通過合理的比較估算，一定程度上保證分析結果的準確性和可靠性。

3.3薄層色譜法在對阿奇霉素及其有關物質進行測定的過程中，采用來自兩個生產廠家的硅膠預制板進行測定實驗，實驗效果呈現(xiàn)一致性。

3.4通過相關實驗研究可知，薄層色譜法檢測阿奇霉素及其有關物質的具體實驗方式在阿奇霉素片以及膠囊的測定試驗中也同樣適用，也適用于羅紅霉素、克拉霉素及有關物質的檢測。

3.5在薄層色譜法測定實驗中，為有效的保證測定的準確性，應當充分衡量降解物質的可能性影響因素，保證在兩個小時內將供試品溶液使用完畢。

參考文獻

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