P53在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的檢測價值

P53在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的檢測價值

田曉蕾鐘穎

(深圳市西麗人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東深圳518000)

摘要〔〕目的探討基因表達(dá)產(chǎn)物P53蛋白在正常宮頸上皮、各級宮頸CIN組織中的表達(dá)水平與CIN病理學(xué)及分級的關(guān)系。方法采用S-P免疫組化法對45例經(jīng)病理診斷為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變患者進(jìn)行檢查，檢測各級宮頸組織中P53表達(dá)水平，以正常宮頸上皮15例作為對照。結(jié)果P53蛋白陽性表達(dá)率在正常宮頸鱗狀上皮、上皮內(nèi)瘤樣病變分別為0.00%、40.00%，兩兩比較差異顯著(P<0.01)；在各分級中，P53 蛋白陽性表達(dá)率分別為30.00%，38.89%，47.06%。結(jié)論說明P53參與了宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的發(fā)生，在各組宮頸上皮組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕P53；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；免疫組織化學(xué)

中圖分類號〔〕R73〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

基金項目：深圳市南山區(qū)科技計劃項目(2013047)

通訊作者：鐘穎(1973-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)研究。

第一作者：田曉蕾(1982-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科學(xué)的研究。

宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變是一種宮頸癌前病變，它的外表可以是正常的，但細(xì)胞學(xué)或組織學(xué)檢查有了異常增殖的改變〔1〕。在與宮頸癌有關(guān)的眾多基因中，P53蛋白所發(fā)揮的生物學(xué)作用也日益受到人們重視〔2〕。大部分突變發(fā)生在第5～8外顯子區(qū)域內(nèi)。p53基因發(fā)生突變的腫瘤細(xì)胞存在于外周血中。采用靈敏的分子檢測方法可特異性地血液樣本中檢測到微量的p53基因突變〔3〕。在結(jié)直腸癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和頭頸部癌患者的血液DNA中都已檢測到了p53基因突變〔4〕。相關(guān)研究表明宮頸上皮內(nèi)瘤變中P53表達(dá)增加，共同導(dǎo)致細(xì)胞凋亡減少，可能是宮頸上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制之一〔5〕。本實(shí)驗通過檢測P53在宮頸宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的表達(dá)情況，探討宮頸癌早期診斷依據(jù)及基因治療方案。

1材料與方法

1.1對象納入宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織標(biāo)本45例設(shè)為實(shí)驗組，年齡40～62歲，均經(jīng)病理證實(shí)的活檢或手術(shù)切除得到證實(shí)，其中CINⅠ級10例，CINⅡ級18例，CINⅢ級17例。另外選取正常宮頸組織標(biāo)本15例作為對照組，以上診斷均經(jīng)病理證實(shí)。兩組患者基線資料具有可比性，并對實(shí)驗知情同意。診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)其非典型增生的程度，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變分為CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ三個不同的級別。CINⅠ級：相當(dāng)于極輕度和輕度不典型增生；CINⅡ級：相當(dāng)于中度不典型增生；CINⅢ級：相當(dāng)于重度不典型增生和子宮頸原位癌。

1.2主要試劑鼠抗人P53單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒均購于(上海)化學(xué)試劑有限公司。

1.3實(shí)驗方法免疫組化檢測：標(biāo)本用中性甲醛固定，石蠟切片脫蠟至水，5%～10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉，室溫孵育10min。滴加一抗工作液，37℃ 孵育1～2h或4℃ 過夜，連續(xù)切片5份，厚3μm，1張常規(guī)蘇木精-伊紅染色，確定病理診斷及分組。用已有陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)〔6〕：以細(xì)胞質(zhì)和(或)核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞數(shù)≤5%者0分，6%～25%者1分，26%～50%者2分，≥50%者3分。細(xì)胞染色黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。采用半定量積分法判定結(jié)果：染色強(qiáng)度評分與陽性細(xì)胞評分相加：≤1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性()，≥6分為強(qiáng)陽性()。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1P53表達(dá)在組織細(xì)胞中分布P53蛋白陽性表達(dá)于細(xì)胞核，以細(xì)胞核出現(xiàn)黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，從正常宮頸-宮頸癌P53表達(dá)逐漸增加，顏色逐漸加重。見圖1。

2.2P53蛋白在正常宮頸上皮、各級CIN中的表達(dá)P53在正常宮頸上皮(0%)、各級CIN陽性表達(dá)率〔CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級陽性率分別為3例(30.0%)、7例(38.89%)、8例(47.06%)〕隨病變程度的加重依次升高，與對照組比較差異顯著(χ2=13.25，P<0.01)，但P53陽性表達(dá)率在各級CIN中兩兩比較無顯著性差異(P>0.05)。

2.3P53在正常宮頸組織、CIN中的表達(dá)情況對照組P53 0例陽性，觀察組-9例，+7例，2例，27例。在對照組和實(shí)驗組間差異顯著(P<0.05)。

圖1　P53表達(dá)在組織細(xì)胞中的陽性分布(S-P,×400)

3討論

p53基因可參與細(xì)胞周期的調(diào)控，在維持細(xì)胞增長、抑制腫瘤增殖過程中起重要作用，是重要的細(xì)胞生長負(fù)調(diào)節(jié)因子，參與細(xì)胞周期調(diào)控，當(dāng)細(xì)胞DNA損害時，P53蛋白激活P21基因表達(dá)，并與細(xì)胞周期蛋白結(jié)合形成復(fù)合體，抑制依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶活性，阻止CDKs對Rb蛋白的磷酸化，使細(xì)胞修復(fù)損傷、恢復(fù)正常，常被稱為“基因衛(wèi)士”〔7〕。

相關(guān)研究顯示，P53的表達(dá)強(qiáng)度與宮頸慢性炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗狀細(xì)胞癌有關(guān)，兩者在組織中表達(dá)的陽性單位對于區(qū)分宮頸炎性病變和上皮內(nèi)瘤變，區(qū)分低級別和高級別上皮內(nèi)瘤變，包括CINI和CINⅡ的區(qū)分，以及對于治療方案的擬定均具有重要價值〔8〕。本實(shí)驗結(jié)果提示，P53蛋白陽性表達(dá)與癌組織學(xué)類型、浸潤深度、分化程度有關(guān)。

p53基因可分為野生型和突變型，前者為抑癌基因，后者為致癌基因，p53陽性率一般會隨著臨床期別增高和細(xì)胞分化程度變低而增高。Paquette等〔9〕研究發(fā)現(xiàn)P53基因功能的失活在宮頸癌發(fā)生中的作用異常顯著，并認(rèn)為宮頸癌約97%存在人乳頭瘤病毒(HPV)感染。馮麗莉等〔10〕認(rèn)為P53的過表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，其可作為宮頸癌早期診斷的有效指標(biāo)；本實(shí)驗結(jié)果與上述文獻(xiàn)結(jié)果一致。

p53屬于抑癌基因，正常情況下，p53基因外顯子的核酸序列十分穩(wěn)定，一旦發(fā)生改變即屬于異常情況。其在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展中的相關(guān)性研究已有文獻(xiàn)報道，因此對p53基因的檢測有利于癌癥的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。

4參考文獻(xiàn)

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9PaquetteRL，LeeYY，WilczynskiSP，et al.Mutationsofp53andhumanpapillomavirusinfectionincervicalcarcinoma〔J〕.Cancer，1993;72(4)：1272-80.

10馮麗莉，楊毓琴.p53蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)〔J〕.中國婦幼健康研究，2006;17(4)：260-2.

〔2015-03-21修回〕

(編輯袁左鳴)