腎細胞癌患者臨床病理特征與核糖體S6激酶4表達的相關性

腎細胞癌患者臨床病理特征與核糖體S6激酶4表達的相關性

孫玉朝王忠臣

(內蒙古林業(yè)總醫(yī)院，內蒙古牙克石022150)

摘要〔〕目的探討腎細胞癌患者核糖體S6激酶4(RSK4)的表達及其與腎細胞癌臨床病理特征的相關性。方法應用免疫組化方法對50例腎細胞癌組織中RSK4的表達進行檢測，并通過對患者隨訪，探討其與腎細胞癌臨床病理學參數及患者預后之間的關系。結果腎細胞癌患者中RSK4陽性表達27例，且RSK4陽性表達與Fuhrman分級、TNM分期、集合系統(tǒng)受累、淋巴結轉移、病理類型等因素呈正相關；單因素分析顯示RSK4(P=0.001)、Fuhrman分級(P=0.001)、TNM分期(P=0.001)、集合系統(tǒng)是否受累(P=0.001)、淋巴結是否轉移與患者生存期長短有關；患者性別(P=0.428)、年齡(P=0.060)、腫瘤直徑(P=0.621)、病理類型(P=0.335)與生存率無關；Cox回歸模型顯示，僅RSK4、Fuhrman分級、病理TNM分期、集合系統(tǒng)受累、淋巴結轉移與腫瘤生存期相關。結論RSK4可以成為腎細胞癌的潛在的獨立預后因子之一。

關鍵詞〔〕腎細胞癌；核糖體S6激酶4；免疫組織化學

中圖分類號〔〕R737〔

第一作者：孫玉朝(1964-)，男，副教授，主任醫(yī)師，主要從事腎內科疾病研究。

腎細胞癌臨床表現(xiàn)多變,容易誤診，治療仍以根治性手術為主，放、化療無效，免疫治療效果也不明確，迫切需要發(fā)現(xiàn)特異、敏感的早期診斷、鑒別診斷和預后評估的因子以及新的、有效的治療方法〔1〕。核糖體S6激酶(RSK)屬于蘇氨酸/絲氨酸激酶家族,是Raf-MEK-ERK級聯(lián)信號通路下游重要的一級效應分子,通過磷酸化大量的細胞內蛋白來調節(jié)細胞分裂、存活和分化等,迄今已發(fā)現(xiàn)此家族有4個成員RSK1、RSK2、RSK3和RSK4,在人體各種細胞及組織中的分布和作用不同,它們的異常表達可能會產生不同的病理改變〔2〕。關于RSK4蛋白的表達水平與腎細胞癌的臨床病理特征及預后的研究尚未見報道。本文探討RSK4與腎細胞癌發(fā)生發(fā)展的關系及可能機制。

1資料與方法

1.1一般資料選擇我院2002年10月至2010年1月收治入院的行腎細胞癌根治術的患者50例，術后均經病理證實為腎細胞癌。所有患者術前均行相關影像檢查，術后病理資料完整，均未接受化療、放療、腎動脈栓塞術及其他藥物治療，男32例，女18例，年齡34～76〔平均(56.29±3.9)〕歲，病理組織學分型：透明細胞癌(ccRCC)7例，嫌色細胞癌(CRCC)6例，乳頭狀細胞癌(PRCC)34例，混合細胞癌3例。參照2009年TNM分期標準，pT1期9例，pT2期7例，pT3期13例，pT4期21例；Fuhrman分級Ⅰ、Ⅱ級21例，Ⅲ級12例、Ⅳ級17例；術后8例出現(xiàn)轉移，轉移部位為肺2例、肝臟1例、淋巴結轉移5例。

1.2檢測方法兔抗人RSK4單克隆抗體、二步法免疫組化檢測試劑盒、HRP-DAB底物顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司。選取腎細胞癌組織的石蠟切片，運用免疫組化(二步法)方法進行染色。一抗?jié)舛葹?∶100，具體操作均按說明書進行，以DAB顯色，蘇木素復染，PBS置換一抗作空白對照，用已知陽性標本作陽性對照。

1.3結果判定參照文獻〔1〕的方法，陽性染色結果判定如下：要求細胞結構清晰，陽性細胞定位好，以同一顯微鏡倍數(×40)觀察全片，選擇5個高倍(×400)視野，合并計算所分析的5個不同視野著色細胞百分率及胞膜、胞質的著色程度。根據染色程度及染色細胞百分率進行分析評定：基本不著色為0分，著色淡為1分，著色較深為2分；著色細胞占計數細胞百分率：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分，以每張切片染色程度和染色細胞百分率得分相乘的積為最后得分。得0～1分者為陰性(-)，得2分者為弱陽性(+)，得3～4分者為中等陽性()，6分者判為強陽性()。

1.4統(tǒng)計學方法應用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗及Fisher確切概率法分析。Cox回歸模型分析相關性，生存分析采用Kapalan-Meier法。

2結果

2.1臨床病理特征分析見表1。50例患者中RSK4陽性表達27例，且RSK4陽性表達與Fuhrman分級、病理TNM分期、

表150例患者的臨床病理資料分析(n)

臨床參數nRSK4+RSK4-P值年齡(歲)≥502716110.191<50231112性別男3215170.250女18126Fuhrman分級Ⅰ～Ⅱ級2110110.001Ⅲ～Ⅳ級291712腫瘤直徑(cm)≥6.015870.641<6.0351916集合系統(tǒng)受累受累5320.02未受累452421病理TNM分期pT1～pT2165110.006pT3～pT4342212病理類型ccRCC7520.038PRCC341717CRCC633混合細胞癌321淋巴結轉移有8710.012無422022

集合系統(tǒng)受累、淋巴結轉移、病理類型等因素呈正相關。

2.2單因素、多因素生存分析單因素分析顯示，顯示RSK4陽性表達與Fuhrman分級(P=0.001)、TNM分期(P=0.001)、集合系統(tǒng)是否受累(P=0.001)、淋巴結是否轉移(P=0.001)與患者生存期有關；患者性別(P=0.428)、年齡(P=0.060)、腫瘤直徑(P=0.621)、病理類型(P=0.335)與生存率無關。Cox回歸模型顯示，僅RSK4陽性表達、Fuhrman分級、病理TNM分期、集合系統(tǒng)受累、淋巴結轉移與腫瘤生存期相關，見表2。

表250例患者術后單因素、多因素生存分析

臨床參數n中位生存時間(個月)P值單因素生存分析多因素生存分析RSK4+27340.0010.035-2375年齡(歲)≥5027740.060>0.05<502351性別男32600.428>0.05女1865Fuhrman分級Ⅰ級～Ⅱ級21820.0010.047Ⅲ級～Ⅳ級2944腫瘤直徑(cm)≥6.015590.621>0.05<6.03561集合系統(tǒng)受累受累580.0010.026未受累4571病理TNM分期pT1～pT216800.0010.069pT3～pT43424病理類型ccRCC7620.335>0.05PRCC3452CRCC679混合細胞癌316淋巴結轉移有8210.0010.031無4276

3討論

在腎臟實性腫瘤中超過80%成為腎細胞癌，而良性腫瘤則多為血管平滑肌脂肪瘤、嗜酸細胞瘤等〔3〕。ccRCC是腎細胞癌中最常見的病理類型，約占腎細胞癌的90%。其他腎癌病理類型還包括多房囊性腎細胞癌、PRCC、CRCC等〔4〕。腎癌早期無明顯癥狀，倘若患者出現(xiàn)腰痛、血尿、腹部腫塊時，往往提示病情已經發(fā)展到晚期。絕大多數腎臟腫瘤可在體檢時通過B超等影像學檢查發(fā)現(xiàn)。當超聲檢查發(fā)現(xiàn)問題時，可進行增強CT檢查，進一步明確腫瘤的性質及分期，同時也能為手術治療提供必要的解剖細節(jié)。早期腎癌患者預后較好，術后5年生存率可達90%左右〔5〕。在治療上，由于腎癌對放化療不敏感，有效率低，一般不推薦患者做放化療。目前，外科手術是腎癌最主要的治療方式，也是唯一有可能使疾病得到根治的手段。早期的局限性腫瘤，根據腫瘤的大小、位置、生長類型以及與腎臟大血管的關系，可以選擇腎根治性切除和保腎手術。對于早期腎癌，腹腔鏡微創(chuàng)手術在大城市三甲醫(yī)院已成主流，手術創(chuàng)傷小、恢復快〔6〕。如在泌尿外科，患者接受腹腔鏡腎切除手術后3～5 d即可出院。若無轉移，術后定期復查即可，一般不推薦再進行其他治療。中期腎癌患者表現(xiàn)為腫瘤的局部進展，腫瘤可侵犯腎盂、腎周脂肪甚至腎靜脈和下腔靜脈，此時也需要進行手術治療。若瘤栓與腫瘤切除徹底，病人一般預后尚可，5年生存率約為40%〔7〕。部分病人在發(fā)現(xiàn)腎癌時就已經出現(xiàn)轉移，這種情況下一般也需行減瘤性腎切除術，切除腫瘤再治療轉移灶比不切除腫瘤直接治療的效果要好。當腎臟原發(fā)腫瘤切除后，極少數患者的轉移病灶會出現(xiàn)自發(fā)性消退。

腎癌發(fā)病原因比較復雜，與遺傳和環(huán)境因素相關，已經確定的危險因素包括吸煙、高血壓和肥胖〔8〕。由于腎癌發(fā)病的隱匿性，早發(fā)現(xiàn)十分重要。因此尋找高效、低毒的小分子抗癌藥物一直是當今癌癥治療領域的難點和熱點之一。 絲氨酸、蘇氨酸以及酪氨酸殘基的磷酸化過程是真核生物細胞內信號傳導以及進行正常的細胞周期調控的最主要的機制。Ras-MAPK激酶通路對調控細胞正常分裂、生存、生長以及分化過程起著極為重要的作用，該通路中許多激酶蛋白的突變或者過表達往往會導致腫瘤細胞的生成。RSK家族處于Ras-MAPK通路的下游。RSK激酶蛋白特異性的磷酸化胞內及核內許多細胞周期相關的下游蛋白，從而起到調控細胞生命周期的功能〔9〕。RSK激酶結構域內外的幾個位點包括Ser380、Thr359、Ser363和Thr573的磷酸化都對RSK的激酶活性激活非常重要。RSK1～3可以被MAPKs磷酸化激活，也可以通過自身磷酸化激活，還可以被一些生長因子或神經遞質等誘導激活的PI3K信號通路所激活。RSK在被MAPK磷酸化激活時，是由Ras、Raf-1、MAP kinase kinase(MEK)和MAP kinase信號通路所介導。PI3K誘導的RSK1激活是由絲氨酸/蘇氨酸激酶mTOR介導的。RSK1在葡萄糖穩(wěn)態(tài)調控和細胞大小的調控中起重要作用。RSK可以磷酸化并調節(jié)轉錄因子c-fos和糖原合成酶激酶3(GSK3)的活性。有報道RSK1可以和MAPK1、IκBα、TOB和TSC2等相互作用〔9～11〕。RSK可以在有絲分裂信號刺激下會轉位到細胞核內。RSK2可以特異性地磷酸化底物蛋白上面的蘇氨酸和絲氨酸殘基，其很多底物蛋白本身就是被集中研究的癌癥治療靶點。RSK2亞型被證實在人類乳腺癌和前列腺癌細胞中的表達量明顯增長，另外RSK2在骨髓瘤細胞的造血轉移過程中也起著關鍵作用〔12～14〕。本研究提示RSK4有助于不同類型腎癌的鑒別診斷及其可以成為腎細胞癌的潛在的獨立預后因子之一。

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〔2013-05-15修回〕

(編輯曹夢園)