贊皇大棗黑腐病菌拮抗菌的室內(nèi)多重篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化

李靜虹等

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）黑腐病主要病原菌莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進行室內(nèi)多重篩選，并通過單因素試驗對篩選獲得的目標菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產(chǎn)量、果實品質(zhì)和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實病害的農(nóng)藥使用具有較高的要求。生物農(nóng)藥相對于化學(xué)農(nóng)藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物已成功應(yīng)用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經(jīng)濟和社會效益[4]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經(jīng)應(yīng)用于生產(chǎn)實踐[5]；蠟質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強的適應(yīng)力和耐受性。目前有關(guān)棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農(nóng)用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內(nèi)混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農(nóng)抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學(xué)農(nóng)藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進行了室內(nèi)多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學(xué)應(yīng)用化學(xué)研究所實驗室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點[13]而備受關(guān)注。一些芽孢桿菌菌株已經(jīng)開發(fā)成生物農(nóng)藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內(nèi)篩選中表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，具有作為生物農(nóng)藥的潛力，但還需對其田間效果作進一步試驗研究。此外，還需對該菌株進行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質(zhì)測定、劑型研制、安全性試驗等方面的研究工作，為開發(fā)具有實際應(yīng)用價值的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] 及 華，關(guān)軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學(xué)報，2004，21（6）：540-543.

[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術(shù)研究[D].河北保定： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，2000（12）：10-12.

[4] 張麗萍，張貴云.微生物農(nóng)藥研究進展[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000（4）：22-24.

[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，40（9）：111-114.

[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質(zhì)芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2006，14（1）：189-192.

[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，1989（8）：3-7.

[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術(shù)研究[J].中國森林病蟲，2005（5）：3-6.

[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實驗[M].北京：高等教育出版社，2001.

[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學(xué)報，2003，33（2）：174-177.

[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992（3）：46-49.

[12] 沈光斌，周明國.水稻白葉枯病菌對噻枯唑的抗藥性監(jiān)測[J].植物保護，2002，28（1）：9-11.

[13] 朱玥妍，劉 姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（34）：16635-16638.

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）黑腐病主要病原菌莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進行室內(nèi)多重篩選，并通過單因素試驗對篩選獲得的目標菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產(chǎn)量、果實品質(zhì)和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實病害的農(nóng)藥使用具有較高的要求。生物農(nóng)藥相對于化學(xué)農(nóng)藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物已成功應(yīng)用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經(jīng)濟和社會效益[4]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經(jīng)應(yīng)用于生產(chǎn)實踐[5]；蠟質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強的適應(yīng)力和耐受性。目前有關(guān)棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農(nóng)用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內(nèi)混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農(nóng)抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學(xué)農(nóng)藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進行了室內(nèi)多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學(xué)應(yīng)用化學(xué)研究所實驗室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點[13]而備受關(guān)注。一些芽孢桿菌菌株已經(jīng)開發(fā)成生物農(nóng)藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內(nèi)篩選中表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，具有作為生物農(nóng)藥的潛力，但還需對其田間效果作進一步試驗研究。此外，還需對該菌株進行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質(zhì)測定、劑型研制、安全性試驗等方面的研究工作，為開發(fā)具有實際應(yīng)用價值的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] 及 華，關(guān)軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學(xué)報，2004，21（6）：540-543.

[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術(shù)研究[D].河北保定： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，2000（12）：10-12.

[4] 張麗萍，張貴云.微生物農(nóng)藥研究進展[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000（4）：22-24.

[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，40（9）：111-114.

[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質(zhì)芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2006，14（1）：189-192.

[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，1989（8）：3-7.

[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術(shù)研究[J].中國森林病蟲，2005（5）：3-6.

[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實驗[M].北京：高等教育出版社，2001.

[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學(xué)報，2003，33（2）：174-177.

[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992（3）：46-49.

[12] 沈光斌，周明國.水稻白葉枯病菌對噻枯唑的抗藥性監(jiān)測[J].植物保護，2002，28（1）：9-11.

[13] 朱玥妍，劉 姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（34）：16635-16638.

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）黑腐病主要病原菌莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進行室內(nèi)多重篩選，并通過單因素試驗對篩選獲得的目標菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產(chǎn)量、果實品質(zhì)和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實病害的農(nóng)藥使用具有較高的要求。生物農(nóng)藥相對于化學(xué)農(nóng)藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物已成功應(yīng)用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經(jīng)濟和社會效益[4]。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經(jīng)應(yīng)用于生產(chǎn)實踐[5]；蠟質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強的適應(yīng)力和耐受性。目前有關(guān)棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農(nóng)用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內(nèi)混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農(nóng)抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學(xué)農(nóng)藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進行了室內(nèi)多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學(xué)應(yīng)用化學(xué)研究所實驗室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點[13]而備受關(guān)注。一些芽孢桿菌菌株已經(jīng)開發(fā)成生物農(nóng)藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內(nèi)篩選中表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，具有作為生物農(nóng)藥的潛力，但還需對其田間效果作進一步試驗研究。此外，還需對該菌株進行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質(zhì)測定、劑型研制、安全性試驗等方面的研究工作，為開發(fā)具有實際應(yīng)用價值的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] 及 華，關(guān)軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學(xué)報，2004，21（6）：540-543.

[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術(shù)研究[D].河北保定： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，2000（12）：10-12.

[4] 張麗萍，張貴云.微生物農(nóng)藥研究進展[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000（4）：22-24.

[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，40（9）：111-114.

[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質(zhì)芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2006，14（1）：189-192.

[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術(shù)研究[J].林業(yè)科技通訊，1989（8）：3-7.

[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術(shù)研究[J].中國森林病蟲，2005（5）：3-6.

[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實驗[M].北京：高等教育出版社，2001.

[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學(xué)報，2003，33（2）：174-177.

[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992（3）：46-49.

[12] 沈光斌，周明國.水稻白葉枯病菌對噻枯唑的抗藥性監(jiān)測[J].植物保護，2002，28（1）：9-11.

[13] 朱玥妍，劉 姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（34）：16635-16638.