薄層層析法檢測(cè)中藥蔓荊子不同部位的化學(xué)成分

李鋮璐 趙振坤

[摘要]目的分析中藥蔓荊子不同部位的化學(xué)成分。方法采用超聲波輔助溶劑提取、分步萃取以及薄層色譜等方法，根據(jù)各個(gè)部位的Rf值和顯色行為進(jìn)行歸并，Rf值相同、顯色行為類似的部分歸并為同一個(gè)餾分。采用萃取法分離蔓荊子提取物，得到石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和水部位。結(jié)果石油醚部位主要是油脂和揮發(fā)性油，氯仿部位主要是萜類，乙酸乙酯部位主要是黃酮類化合物，水部位含有極性不相同的較多物質(zhì)。結(jié)論本研究可為蔓荊子的藥理活性成分的研究打下一定的基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞]蔓荊子；化學(xué)成分；藥理活性；薄層色譜

[中圖分類號(hào)]R927.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1674-4721（2012）12（a）-0057-04

蔓荊子（fructusviticis）又名白背木耳、白背楊、水捻子、白布荊。為馬鞭草科植物單葉蔓荊（VitextrifoliaL.var.simplicifoliaCham.）的果實(shí)[1]?！缎滦薇静荨纷钤缑枋隽寺G子植物形態(tài)：“蔓荊，苗蔓生，故名蔓荊。生水濱，葉似杏葉而細(xì)，莖長(zhǎng)丈余，花紅白色。今人誤以小荊為蔓荊，遂將蔓荊子為牡荊子也”[2]。根據(jù)植物形態(tài)及生境，蔓荊子當(dāng)為馬鞭草科牡荊屬的單葉蔓荊，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目的功效。用于風(fēng)熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明、頭暈?zāi)垦?。民間還用于抗癌、治療痢疾、胃腸感染、急性結(jié)膜炎及抗感染，是臨床常用辛涼解表藥之一?，F(xiàn)代藥理研究表明，蔓荊子還具有鎮(zhèn)痛、抗菌、抗感染、催眠、祛痰、抗腫瘤等作用，是國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求量較大的常用中藥材品種[3]。蔓荊子由于產(chǎn)地不同會(huì)引起成分的差異。對(duì)不同產(chǎn)地的藥材進(jìn)行分析，可將其分為3類：山東嶗山、山東青島、山東牟平、山東日照、遼寧大連、福建莆田歸為一類，江西星子、江西都昌、湖南湘陰、安徽安慶歸為一類，河北任縣、浙江青田歸為一類[4]。除此之外，不同采收時(shí)期（早、中、晚）的單葉蔓荊子揮發(fā)油的含量也有明顯差異。其揮發(fā)油主要成分各有特征：早期呈高蒎烷型，中期呈高乙酰氧基一對(duì)－薄荷烷型，晚期呈高對(duì)－薄荷烷（二烯）型[5-8]。照此看來，深入研究蔓荊子的生物特性及其化學(xué)成分將給科學(xué)與臨床醫(yī)療帶來頗多益處。本文筆者采用薄層層析法檢測(cè)了中藥蔓荊子中不同部位的化學(xué)成分，現(xiàn)報(bào)道如下：

1蔓荊子的提取

1.1儀器與試藥

（1）實(shí)驗(yàn)材料：干燥的蔓荊子果實(shí)，購(gòu)于南昌市黃慶仁藥棧。（2）實(shí)驗(yàn)試劑見表1。（3）實(shí)驗(yàn)儀器見表2。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1實(shí)驗(yàn)原理 以70%的酒精作溶媒，用冷浸-超聲輔助法提取蔓荊子中的有效成分，利用有機(jī)溶劑分步萃取法，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯對(duì)粗提物的有效成分進(jìn)行萃取分離。再利用薄層層析法分別對(duì)各部分萃取物中的化學(xué)成分進(jìn)行薄層檢測(cè)。操作流程見圖1。

1.2.2蔓荊子醇提物的粗提取 稱量50g干燥蔓荊子研磨成粉末，用600mL70%的酒精浸泡48h，取出，放到超聲波清洗器中超聲處理30min，利用真空泵進(jìn)行抽濾，取濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器分離回收溶劑，減壓蒸餾得到流浸膏，浸泡、超聲、分離，重復(fù)操作2次，合并2次的提取物。

1.2.3蔓荊子粗提物的萃取 （1）萃取過程：依次用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，每種溶劑均重復(fù)3次，分別合并每種溶劑的萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收溶劑，于水浴鍋上蒸干稱重。（2）石油醚萃取：將得到的200mL提取物與等體積的石油醚共同裝入1000mL的分液漏斗中，搖勻使之充分混合，靜置鐵架臺(tái)上分層，上層金黃色，下層即水層深棕色，得上層液（石油醚第1次萃取物）。重復(fù)3次，合并3次萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收溶劑。（3）氯仿萃取：向分液漏斗中加入200mL的氯仿，搖勻使之充分混合，靜置于鐵架臺(tái)上至其分層，上層棕褐色，即水層。下層黃綠色，即氯仿層，中間層出現(xiàn)乳黃色物質(zhì)，分離出來。得下層液（氯仿第1次萃取物），重復(fù)3次，合并3次萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收溶劑。（4）乙酸乙酯萃?。和忠郝┒返乃畬又屑尤?00mL的乙酸乙酯，搖勻使之充分混合，靜置鐵架臺(tái)上分層，上層亮黃色，下層即棕褐色黃色，中間層出現(xiàn)了一層乳黃色物質(zhì)，單獨(dú)分離出來。得上層液（乙酸乙酯第1次萃取物），重復(fù)3次，合并3次萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收溶劑。

1.2.4提取結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，蔓荊子提取物經(jīng)萃取后大部分物質(zhì)仍留在了水層，石油醚、氯仿、乙酸乙酯中所含主要是蔓荊子當(dāng)中的小分子物質(zhì)，總質(zhì)量為0.69g，得率為1.38%，見表3。

2蔓荊子的薄層鑒別

2.1儀器與試藥

（1）實(shí)驗(yàn)材料：第1塊板為石油醚萃取物，第2塊板為氯仿萃取物，第3塊板為乙酸乙酯萃取物，第4塊板為水層。（2）所用試劑見表4。（3）所用儀器見表5。

2.2方法與結(jié)果

2.2.1實(shí)驗(yàn)原理 薄層色譜（thinlayerchromatography）常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。將適宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均勻薄層。等點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，用以進(jìn)行物質(zhì)種類與含量的測(cè)定。其原理是利用混合物中各成分在固定相和展開劑之間的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的目的。如吸附薄層，被分離的各成分極性不同，則在同一吸附劑上吸附力的強(qiáng)弱也不同。被分離的混合物中與吸附劑親和力大的成分就留在接近原點(diǎn)處（即Rf值?。?，反之則隨展開劑移動(dòng)，Rf值就大，于是混合物中各成分就得到了分離。

2.2.2展開劑的配制 第1塊板按石油醚︰氯仿=7︰3（V/V）（經(jīng)多次試驗(yàn)獲得）的比例分別用干燥的移液管量取7mL的石油醚、3mL氯仿，依次加入到試管中，混合均勻。再倒入展開槽中搖勻，槽中兩邊的液面要相平，加蓋。每次展1塊板，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可重復(fù)使用；第2塊板按石油醚︰氯仿=7︰3（V/V）的比例配制；第3塊板按氯仿︰甲醇=10︰1（V/V）的比例配制；第4塊板按氯仿︰甲醇=10︰1（V/V）的比例配制。

2.2.3點(diǎn)樣 在薄層板1離下沿1cm處用鉛筆劃線，將供試品溶液用管口平整的毛細(xì)管分別滴加于離薄層板下沿0.5cm處的起點(diǎn)線上，從左至右，分別為樣品1（石油醚萃取物）不同濃度的點(diǎn)。用毛細(xì)管點(diǎn)樣時(shí)點(diǎn)1次后用電吹風(fēng)的冷風(fēng)吹干，再點(diǎn)下1次，第1個(gè)點(diǎn)點(diǎn)3次，第2個(gè)點(diǎn)點(diǎn)4次，以此類推，總共4個(gè)點(diǎn)，樣品的間隔約為0.5cm。且在同一水平線上。在薄層板2中點(diǎn)樣物質(zhì)為氯仿萃取物，方法同上。在薄層板3中點(diǎn)樣物質(zhì)為乙酸乙酯萃取物，方法同上。在薄層板4中點(diǎn)樣物質(zhì)依為水層中的物質(zhì)，方法同上。

2.2.4展開 將薄層板置于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，采用上行展開方式，浸入深度為0.8cm。待展開劑前沿離頂端約0.5cm附近時(shí)，將色譜板取出，晾干。把展開槽中的展開劑倒出來，用電吹風(fēng)吹干。重新配制展開劑，將薄層板2置于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，采用上行展開方式，浸入深度為0.8cm。待展開劑前沿離頂端約1～1.5cm附近時(shí)，將色譜板取出，晾干。薄層板3、4同法。

2.2.5紫外分析儀觀察 分別將薄層板置于紫外檢測(cè)儀中，打開電源，分別選擇254、300、365nm的波長(zhǎng)，觀察有無熒光斑點(diǎn)。在無斑點(diǎn)處說明樣品吸收了紫外光，用相機(jī)拍下記錄結(jié)果。

2.2.6碘蒸汽顯色 分別將上述薄層板置于專用碘蒸汽染色缸內(nèi)，約5min后，觀察薄層板的顏色變化，用相機(jī)拍下記錄結(jié)果。

2.2.7高錳酸鉀顯色 記錄完碘蒸氣顯色結(jié)果后，將薄層板置于桌面直至碘揮發(fā)盡。再把配置好的高錳酸鉀溶液均勻地噴灑在薄層板上，靜置大約5min，用電吹風(fēng)吹干，觀察薄層板的顏色變化，用相機(jī)拍下記錄結(jié)果。

2.3薄層鑒別結(jié)果

2.3.1石油醚層 薄層板1的碘蒸氣及高錳酸鉀顯色見圖2、3，圖上各斑點(diǎn)從左至右依次為石油醚萃取物點(diǎn)樣3、4、5、6次的結(jié)果。從圖中可知，石油醚層中尚有部分物質(zhì)沒有展開。

2.3.2氯仿層 薄層板2的顯色見圖4、5，圖上各斑點(diǎn)從左至右依次為依次為氯仿萃取物點(diǎn)樣3、4、5、6次的結(jié)果。從圖中可知，氯仿層中由于物質(zhì)種類較多，部分種類尚無法完全展開。

2.3.3乙酸乙酯層 薄層板3的顯色見圖6、7、8，圖上各斑點(diǎn)從左至右依次為乙酸乙酯萃取物點(diǎn)樣3、4、5、6次的結(jié)果。從圖中可知，乙酸乙酯層中各斑點(diǎn)沒有完全展開。

2.3.4水層 薄層板4的顯色見圖9、10、11，圖上各斑點(diǎn)從左至右依次為水層點(diǎn)樣3、4、5、6次的結(jié)果。從圖中可知，水層當(dāng)中有些物質(zhì)展開的較充分，但仍有許多物質(zhì)無法展開，且梯度并不明顯。

3討論

本實(shí)驗(yàn)以70%的酒精作為溶媒，用冷浸-超聲法提取蔓荊子中的化學(xué)成分，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯，對(duì)粗提物進(jìn)行初步的萃取分離，最后用薄層層析法對(duì)各部分萃取物進(jìn)行檢測(cè)分析。經(jīng)石油醚、氯仿、乙酸乙酯依次萃取以后，提取物中的組成成分因極性的差異被分成4個(gè)部分，從得率可知主要集中在極性較低的氯仿層當(dāng)中。

本實(shí)驗(yàn)采用薄層層析對(duì)蔓荊子提取物進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)層析板上Rf值的不同，判斷萃取物中所含物質(zhì)的多少。石油醚層當(dāng)中主要存在一些油脂和揮發(fā)性油，由于展開劑極性過小，石油醚層中尚有部分物質(zhì)沒有展開，應(yīng)再調(diào)配展開劑中石油醚與氯仿的比例，增大展開劑的極性；氯仿層中主要是萜類，其中物質(zhì)種類較多，尚無法完全展開；乙酸乙酯層主要是黃酮類化合物，經(jīng)過3次紫外光照射可知，蔓荊子中含有許多不同種類的黃酮類化合物，其在不同波長(zhǎng)的紫外光下皆有光斑，如要更詳細(xì)地鑒定其中的成分，還需要進(jìn)一步的分離純化；水層當(dāng)中含有較多種類的物質(zhì)，其極性亦不相同，有些物質(zhì)展開的較充分，但仍有許多物質(zhì)無法展開，且梯度并不明顯，應(yīng)增加梯度點(diǎn)樣間隔。

下一步的工作主要是對(duì)分離出來的各萃取層的物質(zhì)進(jìn)一步純化，進(jìn)行定量研究并鑒定其中的生物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，闡明其藥理活性和作用機(jī)理。

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（收稿日期：2012-05-31 本文編輯：袁 成）