復(fù)方洛美沙星即型凝膠滴耳劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

俞 冰，劉志承 ，李 東，溫中明，陳麗娜

鹽酸洛美沙星(lomefloxacin)是第3代喹諾酮類抗菌藥物，抗菌譜廣，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、變形桿菌及大腸桿菌都有很強(qiáng)的抗菌活性[1]。將洛美沙星制成滴耳液后局部用藥，則可使藥液與患部直接接觸，在耳漏和中耳黏膜中獲得高濃度，起到殺菌作用，其副作用少，無耳鳴及聽力損害[2－4]。地塞米松(dexamethasone)為甾體類強(qiáng)效抗炎藥，可以減輕病變過程中的炎癥反應(yīng)及組織損害，減少疤痕形成，抑制抗原抗體反應(yīng)，減輕炎細(xì)胞浸潤，使炎癥反應(yīng)過程縮短。臨床微生物研究結(jié)果顯示，局部的感染常由細(xì)菌引起，細(xì)菌感染通常會導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，故用抗菌藥物治療感染的同時(shí)應(yīng)用抗炎藥來避免或減輕炎癥很有必要[5－6]。為滿足臨床需要，筆者研制了復(fù)方洛美沙星即型凝膠滴耳劑，并對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

KNAUER高效液相色譜儀，包括K－2501型紫外檢測器(德國諾爾);TU－1810型紫外－可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);Acculab電子天平(德國艾科勒);KQ2200B型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司);PHS－3C型精密pH計(jì)(上海雷磁精密儀器廠)。鹽酸洛美沙星對照品(批號為0452－200001)，地塞米松對照品(批號為100122－200304)均購自中國藥品生物制品檢定所;復(fù)方洛美沙星即型凝膠滴耳劑(自制，批號分別為 20090201，20090202，20090203);乙腈(色譜純)，枸櫞酸(分析純)均購自天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心;三乙胺(分析純，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站);三蒸水(本實(shí)驗(yàn)室自制)。所有試液使用前均經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品為均勻、細(xì)膩、易涂布、易洗除的淡黃色半透明凝膠劑。

2.2 酸堿度測定

取樣品5 g，用純化水25 mL稀釋后測定 pH。結(jié)果pH為5.7，符合滴耳劑弱酸性的要求。

2.3 凝膠穩(wěn)定試驗(yàn)

離心試驗(yàn):取樣品適量，置離心管中，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心30 min后，觀察有無分層現(xiàn)象。結(jié)果凝膠劑無分層現(xiàn)象。

耐熱耐寒試驗(yàn):取樣品適量，分別置55℃干燥箱6 h，－18℃冰箱24 h，觀察凝膠劑有無分層現(xiàn)象，外觀顏色和黏度有無變化。結(jié)果凝膠劑無分層現(xiàn)象，外觀顏色和黏度均無變化。

放置試驗(yàn):將本制劑在室溫下避光放置3個月，觀察凝膠劑有無外觀顏色和黏度的變化。結(jié)果凝膠劑外觀顏色和黏度均無變化，穩(wěn)定性好。

2.4 含量測定[3－4]

2.4.1 紫外檢測波長選擇

取鹽酸洛美沙星對照品 0.005 9 g和地塞米松對照品0.010 3 g，置100 mL量瓶中，加乙腈使溶解并稀釋至刻度，取1 mL至10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，得洛美沙星質(zhì)量濃度為5.9 μg/mL 和地塞米松質(zhì)量濃度為 10.3 μg/mL 的溶液。在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果地塞米松在240 nm波長處有最大吸收，洛美沙星在287 nm波長處有最大吸收，兩者互不干擾，見圖1。故選擇240nm為地塞米松的測定波長，287nm為洛美沙星的測定波長。

圖1 紫外掃描圖

2.4.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

洛美沙星:色譜柱為 Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動相為0.05 mol/mL枸櫞酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.0)－ 乙腈(85 ∶15)，流速為 1 mL/min，柱溫為 40 ℃ ，UV 檢測波長為287 nm，進(jìn)樣量為20μL，靈敏度0.08 AUFS。定量方法為外標(biāo)法。在此條件下，洛美沙星保留時(shí)間為18 min，理論板數(shù)按洛美沙星峰峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。標(biāo)準(zhǔn)色譜見圖2 A。

圖2 洛美沙星高效液相色譜圖

地塞米松:色譜柱為 Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈 － 水(40 ∶60)，pH 為 3.0～3.5，流速為 1 mL/min，柱溫為40℃，UV檢測波長240 nm，靈敏度0.08 AUFS;定量方法外標(biāo)法。理論板數(shù)按地塞米松峰計(jì)算應(yīng)不低于4 753。標(biāo)準(zhǔn)色譜見圖3 A。

圖3 地塞米松高效液相色譜圖

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

洛美沙星:精密稱取于105℃干燥至恒重的鹽酸洛美沙星對照品12.1 mg，置200 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為60.5μg/mL的對照品溶液，分別精密量取1，3，5，8，12，15 mL，置 50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度分別為 1.21，3.63，6.05，9.68，14.52，18.15 μg/mL的對照品溶液，照高效液相色譜法[7]，在2.4.2項(xiàng)下色譜條件下，分別取20μL注入液相色譜儀，每樣進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=50 337.19C+6 276.33，r=0.999 8。結(jié)果表明，洛美沙星質(zhì)量濃度在1.21～18.15μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

地塞米松:精密稱取于105℃干燥至恒重的地塞米松對照品0.015 1 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定量稀釋制得質(zhì)量濃度為0.151 g/L的儲備液。分別精密量取儲備液適量，用甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為 0.015 1，0.018 12，0.024 16，0.030 2，0.036 24 g/L的工作溶液(分別相當(dāng)于標(biāo)示量的50%，60%，80% ，100% ，120%)，照高效液相色譜法[7]，在 2.4.2 項(xiàng)下色譜條件下，分別取上述對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，各質(zhì)量濃度進(jìn)樣3次，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=295.2 C－113.16，r=0.999 9(n=3)。結(jié)果表明，地塞米松質(zhì)量濃度在 0.015～0.036 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.4 回收率試驗(yàn)

洛美沙星:取鹽酸洛美沙星對照品適量(相當(dāng)于處方量的120%，100%，80%各3份)，精密稱定，模擬處方加入與之相對應(yīng)量的空白輔料，制得洛美沙星即型凝膠滴耳劑。分別精密量取1 mL置9個10 mL，量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再分別精密取1 mL置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。另取鹽酸洛美沙星對照品適量，精密稱定，用流動相稀釋制成每1 mL中含鹽酸洛美沙星6.62μg的溶液，作為對照品溶液。按2.4.2項(xiàng)下色譜條件，分別取對照品、供試品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果平均回收率為99.8%，RSD為0.55%(n=5)。

地塞米松:取地塞米松對照品適量(相當(dāng)于處方量的80%，100%，120%各3份)，精密稱定，模擬處方加入與之相對應(yīng)量的空白輔料，按工藝制得地塞米松滴耳液。分別精密量取3 mL置9個100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取1 mL置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，再分別精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，得供試品溶液。另取地塞米松對照品適量，精密稱定，用甲醇稀釋制成每1 mL中含地塞米松0.3μg的溶液，作為對照品溶液。按2.4.2項(xiàng)下色譜條件，分別取對照品、供試品溶液各20μL注入色譜儀測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果平均回收率為99.01%，RSD為2.90%(n=5)。

2.4.5 精密度試驗(yàn)

洛美沙星:精密稱取于105℃干燥至恒重的鹽酸洛美沙星對照品12.1 mg，置200 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為60.5μg/mL的對照品溶液，分別精密量取1，5，15 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度分別為 1.21，6.05，18.15 μg/mL 的對照品溶液。按 2.4.2 項(xiàng)下色譜條件，每個質(zhì)量濃度分別取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以洛美沙星峰面積計(jì)算。結(jié)果的 RSD分別為0.75%，0.60%，0.83%(n=5)，表明該法精密度良好。

地塞米松:精密稱取地塞米松對照品0.002 8 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，取1 mL置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度作為對照品溶液，取1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按2.4.2項(xiàng)下色譜條件，精密量取該對照品溶液20μL注入色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，以地塞米松峰面積計(jì)算。結(jié)果的 RSD為0.15%(n=6)，表明該法的精密度良好。

2.5 樣品含量測定

洛美沙星:精密量取樣品1 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取鹽酸洛美沙星對照品適量，精密稱定，用流動相稀釋制成每1 mL中含洛美沙星6.0μg的溶液，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μL，按2.4.2項(xiàng)下色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

地塞米松:精密量取樣品3 mL(約相當(dāng)于地塞米松3 mg)，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，去掉初濾液，再精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μL，按2.4.2項(xiàng)下色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果見表1。

3 討論

復(fù)方洛美沙星滴耳液為含有洛美沙星和地塞米松兩主藥的復(fù)方制劑，在控制產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)需要分別對兩主藥的含量進(jìn)行檢測，由于兩主藥在同一色譜條件下不容易完成，故對兩個主藥需分別檢測，建立不同的色譜條件。

含量測定方法學(xué)考察結(jié)果表明，本法精密度、線性、回收率均較好。樣品可不經(jīng)分離，而即型凝膠空白基質(zhì)在此無吸收，對測定無干擾，方法快速簡便，故建立的高效液相色譜法適用于本品中洛美沙星和地塞米松的含量測定。方法不足之處是保留時(shí)間較長，影響分析效率。

[1]Davis R，Bryson HM.Levofloxacin:A review of its antibacterial activity，Pharmacokinetics and theraopeutic efficacy[J].Drugs，1994，47:677 －700.

[2]李 東，張 雁，陳曉凱，等.加替沙星凝膠滴耳劑的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究[J].中國藥業(yè)，2004，13(8):26.

[3]陳麗娜，李 東，謝燕賢，等.HPLC法測定復(fù)方洛美沙星即型凝膠滴耳劑中洛美沙星的含量[J].中國藥房，2010，21(25):2 371－2 373.

[4]陳麗娜，李 東，謝燕賢，等.高效液相色譜法測定復(fù)方洛美沙星即型凝膠滴耳劑中地塞米松含量[J].中國藥業(yè)，2010，19(12):36－37.

[5]奚念朱.藥劑學(xué)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:232－233.

[6]周 軍，孫增先.復(fù)方左旋氧氟沙星滴耳液的制備及臨床觀察[J].中國藥業(yè)，2002，11(12):43.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:184，附錄 28.