HPLC法測(cè)定復(fù)方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊中主藥的含量

蘇 勍，徐光奇，莫宗琪，連素敏

鹽酸偽麻黃堿具有選擇性收縮血管作用，可收縮鼻腔、鼻竇及上呼吸道黏膜血管，消除組織水腫和充血，使呼吸道暢通[1]。萘普生鈉為新型非甾體抗炎藥，能抑制花生四烯酸代謝中的環(huán)加氧酶，減少前列腺素的合成，起到解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用[2]。筆者以二者研制的復(fù)方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊可有效控制流行性感冒引起的鼻塞、頭痛、發(fā)熱等癥狀?！吨袊?guó)藥典》2005版中，鹽酸偽麻黃堿和萘普生鈉的含量測(cè)定均采用非水滴定法，操作較繁瑣且無法同時(shí)檢測(cè)，本文介紹以HPLC法同時(shí)測(cè)定二者含量，建立了一種分離度好、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、迅速的方法。

1 材 料

1.1 樣品與試劑 復(fù)方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊 （自制。規(guī)格：鹽酸偽麻黃堿60 mg；萘普生鈉110 mg/粒。批號(hào)：090320、090321、090322）；鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；萘普生鈉對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純（天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；磷酸、磷酸二氫鉀、十二烷基硫酸鈉均為市售分析純?cè)噭?/p>

1.2 儀器 SP8800高效液相色譜儀 （美國(guó)Spectra-Physics公司），Spectra100紫外檢測(cè)器 （美國(guó)Spectra-Physics公司），Echrom98色譜工作站 （大連依利特科學(xué)儀器有限公司），pHS-3C型酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）,PE Lambda2紫外-可見分光光度計(jì)（美國(guó)PE公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：KromasilC18色譜柱，250×4.6 mm，5 μ；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（0.05 mol/L磷酸二氫鉀）—甲醇按照30∶70比例混合后，用磷酸調(diào)節(jié)pH值到3.0，每300 ml再加入十二烷基硫酸鈉0.1 g即得；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；流速：1.0 ml/min。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在“2.1”條色譜條件下，各組分分離效果良好，分離度R=9.0，理論塔板數(shù)以萘普生鈉計(jì)，不低于3000。

2.3 干擾試驗(yàn) 按處方比例稱取輔料適量，以流動(dòng)相配制成一定濃度的溶液，按上述色譜條件測(cè)定，可見輔料峰對(duì)測(cè)定無干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定 分別精密稱取萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品約100.6、50.5 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，然后分別精密量取適量以甲醇稀釋配制，得到萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿的系列濃度樣品，各取10 μl進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件以HPLC法測(cè)定。以對(duì)照品峰面積（A）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品溶液濃度（C）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿在質(zhì)量濃度20.12～503.00 μg/ml和 10.10～252.50 μg/ml內(nèi)呈較好的線性相關(guān)性。萘普生鈉的回歸方程為C=1.027×10-5A-14.633，r=0.99 9；鹽酸偽麻黃堿的回歸方程為C=6.133×10-5A-1.465，r=0.999 9。

2.5 最低檢測(cè)限 參照中國(guó)藥典2005年版二部附錄XVIIIA中方法，以信噪比為3∶1的相應(yīng)量確分別確定萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿的檢測(cè)限，結(jié)果測(cè)得鹽酸偽麻黃堿的最低檢出量為0.6 ng，萘普生鈉的最低檢出量為0.11 ng。

2.6 精密度測(cè)定 配制萘普生鈉約100 g/ml、鹽酸偽麻黃堿約25 g/ml的對(duì)照品溶液，各取10 μl分別連續(xù)6次進(jìn)樣分析，記錄峰面積，萘普生鈉與鹽酸偽麻黃堿平均值分別為11712306和421128，RSD分別為0.98%和1.17%，均<2.0%，符合要求。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿濃度約為50、25 μg/ml的溶液，在室溫下放置，分別于 0、2、4、6、8、12 h取樣10 μl進(jìn)HPLC分析，記錄峰面積，2組分的含量測(cè)定結(jié)果與放置0 h時(shí)相比基本不變，萘普生鈉與鹽酸偽麻黃堿平均值分別為 4934262和 379547，RSD分別為 1.42%和1.08%，均<2.0%，符合要求。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取萘普生鈉、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml中約含萘普生鈉、鹽酸偽麻黃堿分別為110、60 μg的溶液作為對(duì)照品溶液。另精密稱取萘普生鈉樣品適量，按照處方比例加入輔料，然后加甲醇配成約85、110、130 μg/ml的溶液各3份作為萘普生鈉供試品溶液；取鹽酸偽麻黃堿樣品適量，按照處方比例加入輔料，然后加甲醇配制成約45、60、72 μg/ml的溶液各3份作為鹽酸偽麻黃堿供試品溶液，分別取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.9 三批樣品測(cè)定 取本品20粒，取內(nèi)容物，精密稱取適量 （約相當(dāng)于鹽酸偽麻黃堿60 mg，萘普生鈉110 mg），置100 ml量瓶中，加甲醇振搖溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 ml，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取減壓干燥至恒重的鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品約60 mg，萘普生鈉對(duì)照品約110 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度搖勻，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。結(jié)果見表2。

表 1 鹽酸偽麻黃堿和萘普生鈉含量測(cè)定回收率試驗(yàn)

表 2 三批樣品的鹽酸偽麻黃堿及萘普生鈉含量（%）

3 討 論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取鹽酸偽麻黃堿和萘普生鈉適量，分別以甲醇溶解，作紫外掃描，在紫外光譜吸收區(qū)域內(nèi)，二者均以末端吸收為主，故將檢測(cè)波長(zhǎng)定為215 nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇 在實(shí)驗(yàn)過程中，曾試用乙腈-磷酸鹽緩沖液，甲醇-磷酸鹽緩沖液等溶劑系統(tǒng)，并加入離子對(duì)試劑作比較，結(jié)果顯示，使用乙腈-磷酸鹽緩沖液系統(tǒng)雖結(jié)果靈敏，分離度好，但保留時(shí)間過長(zhǎng)，故將流動(dòng)相定為：磷酸鹽緩沖液（0.05 mol/L磷酸二氫鉀）-甲醇按照30∶70比例混合后，用磷酸調(diào)節(jié)pH值到3.0，每300 ml再加入十二烷基硫酸鈉0.1 g。在調(diào)節(jié)pH值過程中，開始曾用2 mol/L磷酸調(diào)節(jié)，但因加入量較多，改變了流動(dòng)相比例，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生變化，故改為用磷酸調(diào)節(jié)。在本條件下，兩種組分的保留時(shí)間、峰形及分離度都較為理想，本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為評(píng)價(jià)復(fù)方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊質(zhì)量的可靠方法。

[1]湯 光，李大魁.現(xiàn)代臨床藥物學(xué)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003.605.

[2]石方云，洪建衡.萘普生與泰諾林退熱口服液退熱療效的對(duì)照觀察[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，25（1）：60.