改變波長高效液相色譜法測定氨咖敏片中氨基比林和咖啡因含量

(河南省濮陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 濮陽 457000)

氨咖敏片是以氨基比林、咖啡因?yàn)橹饕煞值膹?fù)方制劑。在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]中，其氨基比林與咖啡因含量測定方法為化學(xué)分析法，其中氨基比林采用中和滴定法，存在輔料干擾引起的空白和樣品滴定終點(diǎn)色澤不一致的誤差;咖啡因采用氯仿萃取后剩余碘量法，操作煩瑣、不準(zhǔn)確。同時，咖啡因的含量較低。為使結(jié)果更精確，筆者采用改變檢測波長的高效液相色譜法[2－3]測定，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;Secomam UVIKON xL型雙光束掃描紫外/可見分光光度計;Precisa 92－SM－202A型電子天平。氨基比林、咖啡因?qū)φ掌?批號分別為 100503－200301，100101－198403，中國藥品生物制品檢定所);氨咖敏片(成都第一制藥有限公司);甲醇(色譜純)，冰醋酸(分析純)，水(純化水)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－ 水－ 冰醋酸(40 ∶60 ∶0.2);流速:1.0 mL/mL;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20 μL。外標(biāo)法定量峰面積。理論板數(shù)按氨基比林峰計應(yīng)不低于2 000，分離度符合要求。

2.2 檢測波長確定

以流動相為溶劑，配制質(zhì)量濃度分別為20 μg/mL的氨基比林與咖啡因?qū)φ掌啡芤?，?00～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果氨基比林在263 nm波長處、咖啡因在273 nm波長處有最大吸收。在選定色譜條件下，氨基比林和咖啡因的平均保留時間分別為2.5 min和3.6 min。由于咖啡因的含量較低，為了提高方法的靈敏度和準(zhǔn)確度，使檢測器的檢測波長在檢測時均處于兩種主要成分的最大吸收波長處，本試驗(yàn)采用變波長檢測，即0～3 min時為263 nm，3～15 min時為273 nm。

2.3 溶液制備

取氨基比林對照品50.21 mg，置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液Ⅰ;取105℃下干燥至恒重的咖啡因?qū)φ掌?0.16 mg，置100 mL量瓶中，用流動相溶解稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液Ⅱ;精密量取上述兩種貯備液各5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按處方制備不含氨基比林和咖啡因的陰性對照品溶液。取氨咖敏片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于氨基比林0.1 g)，置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取陰性對照品溶液、對照品溶液、供試品溶液，分別注入液相色譜儀。結(jié)果陰性對照品溶液在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置無吸收，證明陰性無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:取2.3項(xiàng)下對照品溶液，用色譜儀自動進(jìn)樣器分別進(jìn)樣 5，10，15，20，25，30 μL，測定峰面積，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，氨基比林回歸方程Y=55.85 X+73.635(r=0.999 8)，進(jìn)樣量在 0.5 ～ 3.0 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好;咖啡因回歸方程 Y=78.342 X+20.057(r=0.999 7)，進(jìn)樣量在 0.05 ～0.30 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一批供試品溶液，重復(fù)測定6次。結(jié)果氨基比林峰面積的 RSD=0.08%，咖啡因峰面積的 RSD=0.21%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積基本不變，氨基比林峰面積的 RSD=0.13%，咖啡因峰面積的 RSD=0.29%。

加樣回收試驗(yàn):精密量取已知含量的樣品6份，每份10 mL，每2份分別精密加入氨基比林對照品(質(zhì)量濃度74.4 μg/mL)、105℃下干燥至恒重的咖啡因?qū)φ掌?質(zhì)量濃度7.81 μg/mL)的混合溶液12，10，8 mL，按供試品溶液制備方法制備成供試液，分別測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.5 樣品含量測定

依法測定了4批樣品，結(jié)果見表2。

3 討論

在流動相中加入冰醋酸，峰形得到改善，同時在一定程度上緩解了拖尾現(xiàn)象。在每 100 mL 流動相中加入 0.1，0.2，0.3 mL 的冰醋酸，柱效、峰形隨冰醋酸的加入明顯提高，冰醋酸的加入量以0.2 mL為宜。試驗(yàn)中比較了250 mm，150 mm兩種長度的C18柱。結(jié)果采用250 mm的C18柱時，咖啡因的色譜峰嚴(yán)重拖尾、對稱性差;采用150 mm的C18柱時，氨基比林、咖啡因兩主成分色譜峰的峰形均較理想，因此選用150 mm的C18柱。

表2 樣品含量測定結(jié)果

[1]WS－10001－(HD－1297)－2003，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)(第十四冊)[S].

[2]祝 波.正相高效液相色譜法測定腦清片中咖啡因和氨基比林的含量[J].首都醫(yī)藥，2002，9(9):45.

[3]祖元剛，趙春建.改變檢測波長高效液相色譜法測定喜樹堿和羥基喜樹堿的含量[J].分析化學(xué)，2004，32(11):1 421－1 425.