海南暗羅枝和葉中總?cè)扑岬暮繙y定

翟明君 ， 劉冰晶 ，2， 陳光英 ，2*， 簡 藍 ， 畢和平 ，2， 鮑長余 ，2， 孔杜林 ，2

（1.海海南師范大學 化學與化工學院，海南 ?？?571158；2.海南師范大學“省部共建-熱帶藥用植物化學”教育部重點實驗室，海南 ?？?571158）

海南暗羅枝和葉中總?cè)扑岬暮繙y定

翟明君1， 劉冰晶1，2， 陳光英1，2*， 簡 藍1， 畢和平1，2， 鮑長余1，2， 孔杜林1，2

（1.海海南師范大學 化學與化工學院，海南 ?？?571158；2.海南師范大學“省部共建-熱帶藥用植物化學”教育部重點實驗室，海南 ?？?571158）

建立了測定海南暗羅枝和葉中總?cè)扑岷康姆椒?以烏蘇酸為對照品，以質(zhì)量分數(shù)5%香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液系統(tǒng)為顯色劑，采用紫外分光光度法在546 nm波長處測定樣品的吸光度.烏蘇酸對照品在0.20～1.60 g·m L-1范圍內(nèi)呈良好線性關系，回歸方程為Y=0.1548C+0.0286，r=0.9993.海南暗羅枝和葉中的總?cè)扑岷糠謩e為0.72%和1.56%.本法操作簡便，結(jié)果可靠，重復性好，可用作海南暗羅中總?cè)扑岬暮繙y定.

海南暗羅；三萜酸；紫外分光光度法

海南暗羅（Polyalthia laui）隸屬番荔枝科（An?nonaceae）暗羅屬（Polyalthia genus）植物，系海南島的特有種[1].國內(nèi)外學者從暗羅屬的20多種植物中得到了多種萜類[2-3]、生物堿[4]等多種類型化合物.三萜酸類化合物具有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤、保肝、解毒、抗衰老等作用[5-7].目前未見海南暗羅中總?cè)扑岬暮繙y定報道.藥材中總?cè)扑岬臏y定通常采用紫外分光光度法和高效液相色譜法[8-9].本實驗以烏蘇酸為對照品，采用質(zhì)量分數(shù)5%香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液為顯色系統(tǒng)，采用紫外分光光度法測定海南暗羅枝中總?cè)扑岬暮?，為海南暗羅的進一步開發(fā)利用提供科學依據(jù).

1 儀器、試劑與材料

UV2600紫外可見分光光度計（上海國美科技儀器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本，東京理化）.

95%乙醇，無水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸等均為國產(chǎn)分析純，烏蘇酸標準品購自上海順勃生物工程有限公司（純度大于98.0%）.

海南暗羅采自海南省昌江縣，經(jīng)霸王嶺自然保護區(qū)陳慶工程師鑒定為番荔枝科暗羅屬植物Poly?althia laui，標本現(xiàn)存于海南師范大學省部共建-熱帶藥用植物化學教育部重點實驗室.

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備

準確稱取105℃干燥至恒重的烏蘇酸對照品20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.400 g/L溶液，精確移取溶液2.5 mL，定容至100 mL，得濃度為0.01 g/L的對照品溶液.

2.2 供試品溶液制備

將粉碎過的海南暗羅的枝和葉于50℃烘箱干燥24 h，各準確稱取2.00 g，分別用無水乙醇浸泡2 h，索式提取8 h，提取液用TLC測定,至與濃H2SO4不顯紫色為止，提取液減壓回收乙醇，放冷至室溫，用無水乙醇定容至100 mL.枝和葉的提取液分別準確吸取5.0 mL和2.5 mL于100 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，制得供試品溶液.

2.3 測定波長選擇

取對照品溶液5.0 mL，加質(zhì)量分數(shù)為5%香草醛-冰醋酸0.2 mL和高氯酸0.8 mL顯色后，進行全波長掃描，隨行空白對照.結(jié)果表明，對照品溶液在546 nm處有最大吸收峰（見圖1），故選擇546 nm作為樣品測定的波長.

圖1 對照品紫外可見吸收圖Fig.1 UV absorption spectrum of reference substations

2.4 標準曲線繪制

準確吸取對照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL分別置于10 mL容量瓶中，沸水浴揮去無水乙醇，冷卻，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，和高氯酸溶液0.8 mL，將容量瓶放人70℃水浴中加熱15 min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容到刻度，搖勻.在546 nm波長處測定吸光度值A，隨行進行空白對照.以烏蘇酸含量為橫坐標，吸光度A為縱坐標，作圖得到標準曲線（見圖2），標準方程為Y=0.1548C+0.0286，式中：C為濃度（μg·m L-1），Y為吸收度值A.相關系數(shù):r=0.9993.

圖2 標準曲線圖Fig.2Standard curve

2.5 穩(wěn)定性實驗

取對照品和樣品溶液各5.0 mL，按照2.4項下方法進行，每隔15 min測定一次，結(jié)果見表1，RSD值較小，分別為3、7.4、1.07、1.51，表明本法在1.5 h內(nèi)基本穩(wěn)定.

2.6 精密度實驗

取同一批樣品液，進行5次平行實驗，測定含量，結(jié)果見表2,葉和枝的分別為RSD=1.07%（n=5）和RSD=1.51%（n=5），精密度良好.

2.7 加樣回收實驗

準確量取5份已知含量的海南暗羅葉和枝提取液各5.0 mL，準確加入一定量的的熊果酸對照品，余下部分按2.4項下方法操作，實驗結(jié)果見表3.實驗表明，葉提取物平均回收率99.56%，RSD=1.85%（n=5），枝提取物平均回收率100.76%，RSD=1.95%（n=5）.

2.8 樣品含量測定

準確量取各3份海南暗羅葉和枝的樣品溶液5.0 mL于50.0 mL容量瓶中，沸水浴揮去無水乙醇，冷卻后加入5%香草醛-冰醋酸溶液1.0 mL，高氯酸4.0 mL，容量瓶放人70℃水浴中加熱15 min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容，搖勻，余下部分按2.4項方法操作.實驗和計算結(jié)果見表4，海南暗羅葉中總?cè)扑岷繛?.564%，RSD=0.12%（n=3），枝中總?cè)坪繛?.717%，RSD=0.21%（n=3）.

表1 穩(wěn)定性實驗Tab.1 Stability test

表2 精密度實驗Tab.2 Precision test

表3 加樣回收實驗Tab.3Recovery test

表4 樣品測量結(jié)果Tab.4Determination results of samples

3 討論

本文以無水乙醇作為溶劑，以香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液系統(tǒng)為顯色劑，采用紫外分光光度法測定總?cè)扑幔摲ê啽憧煽?，結(jié)果穩(wěn)定，重復性好.本法與比色法[10]比較，減化了實驗步驟，縮短了實驗時間.本文測得海南暗羅枝和葉中總?cè)扑岷糠謩e為0.717%和1.564%，其中葉中總?cè)扑岷枯^多，為進一步開發(fā)利用海南暗羅提供了科學依據(jù).

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Determination of the Content of Triterpenoidic Acid in Stems and Leaves of Polyalthia laui

ZHAI Mingjun1，LIU Bingjing1，2，CHEN Guangying1，2*，JIAN Lan1，BI Heping1，2，BAO Changyu1，2，KONG Dulin1，2
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou571158，China）

A method for the determination of the total triterpenoidic acid in the stems and leaves ofP.lauiwas estab?lished.The total triterpenoidic acid in the stems and leaves of M.Paniculata Lauiwere determined by Ultraviolet Spec?trophotometric method at 546 nm wavelength.The result showed a good linear relationship at the range of 0.20～1.60 μg·m L-1,and the curve was Y=0.1548 C+0.0286，r=0.9993.The content of stems was 0.72%and of leaves was 1.56%.This spectrophotometric method is simple,reproducible and suitable for the determination of total triterpenoidic acid.

Polyalthia Laui；Triterpenoidic acid；Ultraviolet spectrophotometric method

R 284.1

A

1674-4942（2010）04-0407-03

2010-05-21

海南省高校碩士研究生創(chuàng)新科研課題（Hxwsy2009-10）；國家大學生創(chuàng)新實驗項目（101165815）

*通訊作者

畢和平