高效液相色譜法測定曲匹布通片中曲匹布通含量

汪 杰

(武警部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 102613)

曲匹布通片是一種利膽藥，用于治療膽囊炎及膽道疾病，收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)》(第四冊)，其中含量測定方法為容量法。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法[1]測定曲匹布通片的曲匹布通含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

HP1050型液相色譜儀，HP8452型紫外色譜儀，AP-250D型電子天平，超聲波儀。曲匹布通片(南京某藥廠，批號為041201;沈陽某制藥公司，批號分別為050801001，050801037);曲匹布通對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100439-200301);甲醇(色譜純)，超純水、磷酸二氫鉀等其他試劑和輔料(均為分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:資生堂 MG C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液(取磷酸二氫鉀1.36 g加水至1 000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(30∶70);流速:0.8 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:235 nm;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按曲匹布通峰計(jì)算大于9 000。

2.2 溶液制備

精密稱取曲匹布通對照品20.36 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精密量取對照品儲備液3.0 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液;取曲匹布通片10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于曲匹布通20 mg)，置25 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲15 min，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液1 mL，加至25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液;稱取處方量的空白輔料，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下的3種溶液各10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。由圖1可見，空白輔料不干擾樣品測定。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣5，10，20 μL，在235 nm波長下測定峰面積，平行測定2次。以對照品進(jìn)樣量對平均峰面積進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=4 438.3 X-0.998 6，r=0.999 99(n=7)。結(jié)果表明，曲匹布通進(jìn)樣量在0.040 72～0.814 40 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液，依法進(jìn)樣10 μL。結(jié)果峰面積的 RSD為0.04%(n=6)。

穩(wěn)定性考察:取同一供試品溶液，避光放置，分別在0，4，8，12，24 h時進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的 RSD為0.86%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取已測定含量的樣品6份，分為3組，每組分別按80%，100%，120%的比例精密加入曲匹布通對照品適量，配成低、中、高3個質(zhì)量濃度的溶液，進(jìn)樣10 μL。按外標(biāo)法分別計(jì)算含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 曲匹布通加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取兩個廠家樣品各10片，每個批號平行操作2次，依法制備供試品溶液并測定含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

以甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液(60∶40)為流動相，曲匹布通峰保留時間在15 min處;改變流動相比例，以甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液(70∶30)為流動相，曲匹布通峰保留時間在8 min處，且峰形良好，縮短檢測時間近一半，提高了檢測效率。另據(jù)文獻(xiàn)[2]報(bào)道，曲匹布通在用甲醇-水作流動相主峰拖尾嚴(yán)重，但若在流動相中加入少量磷酸二氫鉀，用磷酸調(diào)pH至3.0，則能顯著改善峰形。

曲匹布通的甲醇溶液在235，270，328 nm波長處有最大吸收，且吸收峰形均較好，3個波長處均無干擾，但235 nm波長處響應(yīng)值最大，檢測靈敏度最高，故選此波長為測定波長。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，HPLC法準(zhǔn)確可靠，可用于測定曲匹布通片的曲匹布通含量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄28.

[2]牛劍釗.HPLC法測定曲匹布通含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2005，25(1):61-63.