HPLC 法測(cè)定小兒肺熱平膠囊中黃芩苷的含量

田雁鈺（河南南陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，南陽(yáng)市 473061）

小兒肺熱平膠囊是由黃連、黃芩、柴胡、甘草、朱砂、珍珠、羚羊角、人工牛黃、冰片等17味中藥制成的復(fù)方制劑，具清熱化痰、止咳平喘、鎮(zhèn)驚開(kāi)竅之功效。黃芩的有效成分為黃芩苷，《中國(guó)藥典》2010年版（一部）[1]對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了鑒別一項(xiàng)，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定小兒肺熱平膠囊中黃芩苷含量，方法可靠、簡(jiǎn)單可行、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-2010CHT高效液相色譜儀（日本島津公司）；超聲波清洗儀（上海金利超聲公司）；黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110715-200514）；小兒肺熱平膠囊（吉林省華僑藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20090407、20090709、20090908）；甲醇、乙腈為色譜純，水為實(shí)驗(yàn)室自制Ⅰ級(jí)純化水，磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.2%磷酸（30∶70）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2 000，各組分間的分離度符合要求。

2.2 線性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h的黃芩苷對(duì)照品約20.04 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣，各20 μL，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行回歸分析，得到方程為Y＝2 285.2X+39.6（r＝0.999 9）。結(jié)果，黃芩苷進(jìn)樣量在0.160 3～1.282 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 陰性樣品的干擾試驗(yàn)

取不含黃芩的陰性樣品的裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物約1 g，精密稱(chēng)定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇約40 mL，超聲（功率220 W，頻率50 Hz）處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為陰性樣品溶液。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，陰性樣品對(duì)黃芩苷的測(cè)定無(wú)任何影響。色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.黃芩苷對(duì)照品；B.小兒肺熱平膠囊樣品；C.陰性樣品；1.黃芩苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.baicalin control；B.samples of Xiao’er feireping capsules；C.negative sample；1.baicalin

2.4 精密度試驗(yàn)

取黃芩苷對(duì)照品貯備液4.0 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。取此對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20 μL。結(jié)果，測(cè)得黃芩苷峰面積RSD＝0.32%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6份，分別測(cè)定黃芩苷含量。結(jié)果，平均含量為每粒1.26 mg，RSD＝0.46%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品的裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物約1 g，精密稱(chēng)定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇約40 mL，超聲（功率220 W，頻率50 Hz）處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。在室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h，作為供試品溶液。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得黃芩苷峰面積RSD＝0.82%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的小兒肺熱平膠囊樣品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，共6份，分置于50 mL量瓶中，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品貯備液4.0 mL，按照“2.6”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定黃芩苷，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芩苷回收率測(cè)定結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test of baicalin（n＝6）

2.8 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)樣品的裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約1 g，精密稱(chēng)定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇約40 mL，超聲（功率220 W，頻率50 Hz）處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品貯備液4.0 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件，各進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中黃芩苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

3.1 供試品溶劑的選擇

本試驗(yàn)分別考察了用鹽酸-甲醇（1∶100）、甲醇超聲提取[2]，結(jié)果顯示供試品在甲醇中黃芩苷提取完全，故選甲醇作為供試品的溶劑。

3.2 超聲時(shí)間選擇

供試品采用甲醇超聲提取，比較了超聲提取20、30、40、50 min的提取效果，結(jié)果顯示，超聲30 min黃芩苷提取完全，故超聲時(shí)間選擇30 min。

3.3 流動(dòng)相的選擇

采用甲醇-磷酸[2]體系，黃芩苷與樣品中其它成分分離效果不理想，而采用乙腈－0.2%磷酸（30∶70）為流動(dòng)相，分離效果好，無(wú)干擾，故選擇乙腈－0.2%磷酸（30∶70）為流動(dòng)相。

綜上所述，采用HPLC法測(cè)定小兒肺熱平膠囊中黃芩苷含量，方法可靠、簡(jiǎn)單可行、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：484.

[2]王安民，張亞軍.高效液相色譜法測(cè)定鼻康寶膠囊中黃芩苷的含量[J].兒科藥學(xué)雜志，2009，15（1）：43.