RP-HPLC 法測定頭孢噻肟鈉的含量

陳向明，代現(xiàn)平，孫居鋒（濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，煙臺市 264003）

頭孢噻肟鈉為第3代半合成頭孢類抗生素，對革蘭菌的抗菌活性高于第1、2代[1，2]。目前，測定頭孢噻肟鈉含量的方法有熒光光譜法[3]、高效液相色譜法[4～6]。但熒光光譜法需要對樣品進(jìn)行衍生，受到的影響因素比較多。我國藥典采用是高效液相色譜法[7]，所用的流動相pH為8.4左右，對色譜柱的損害比較大。筆者在優(yōu)化頭孢噻肟鈉生產(chǎn)工藝的過程中首先采用藥典中的方法測定產(chǎn)品的含量，結(jié)果組分保留時間長、峰形差。本試驗通過改變色譜條件，建立了新的測定頭孢噻肟鈉含量的方法，且分析時間短、靈敏度高。

1 儀器與試藥

Waters 600-2489型高效液相色譜儀（美國Waters公司，配備四元梯度泵、在線真空脫氣機、紫外-可見檢測器、手動進(jìn)樣器）；Ultimate-C18柱（美國月旭公司）；EL20數(shù)顯酸度計（梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-50E型超聲波清洗（昆山市超聲儀器有限公司）；EL204電子天平（北京賽多利斯系統(tǒng)有限公司）。

頭孢噻肟鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純（天津福晨化學(xué)試劑廠）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：20 μL；紫外檢測波長：254 nm；流動相：1.0 g·L－1的三乙胺水溶液（用磷酸調(diào)pH值至6.2）-甲醇（68∶32）。色譜見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

精密稱取頭孢噻肟鈉對照品0.044 8 g，用純凈水溶解并定容至100 mL容量瓶中，精密量取5 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣前貯藏于4℃冰箱中。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取頭孢噻肟鈉供試品約0.04 g，用純凈水溶解并定容至100 mL容量瓶中，精密量取5 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣前貯藏于4℃冰箱中。

2.4 線性范圍及檢測限

取頭孢噻肟鈉對照品溶液用水依次2倍稀釋，稀釋后的溶液各進(jìn)樣20μL，按照“2.1”項下色譜條件分析，直到稀釋后的樣品色譜峰高約為基線噪聲的3倍為止。以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝2×108X+1.8×103（r＝0.999 9）。結(jié)果線性范圍為2.7×10－6～0.020 7 g·L－1。以3 倍信噪比計算出頭孢噻肟的檢測限為9×10－9g·L－1。

2.5 精密度試驗

取濃度為2.24×10－2、2.24×10－3、2.24×10－4g·L－1的頭孢噻肟鈉對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件分別重復(fù)測定6次，測定保留時間和峰面積，計算精密度。結(jié)果，頭孢噻肟鈉的保留時間的RSD依次為0.20%、0.19%、0.17%，峰面積的RSD依次為1.21%、1.07%、0.98%。

2.6 穩(wěn)定性試驗

將“2.3”項中試品溶液用水稀釋10倍和100倍，將3種溶液按照“2.1”項下色譜條件每天測定1次，連續(xù)測定6 d。結(jié)果，峰面積的RSD分別為2.93%、2.61%、2.72%，表明頭孢噻肟鈉在試驗條件下穩(wěn)定，且儀器的精密度良好。

2.7 回收率試驗

精密稱取頭孢噻肟鈉對照品9份，用水溶解并稀釋，制備相當(dāng)于樣品溶液濃度的80%、100%、120%的溶液，每一濃度各3份，按照“2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣20 μL，以外標(biāo)法計算其含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

2.8 樣品含量的測定

筆者在優(yōu)化頭孢噻肟鈉合成工藝的過程中，得到了多批樣品，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，計算含量。結(jié)果，編號為1～8的樣品含量分別為91.40%、80.10%、94.98%、91.68%、95.29%、98.29%、92.95%、95.23%。

3 討論

藥典方法所用流動相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀60 mg與磷酸氫二鈉1.2 g，加水溶解并稀釋成1 000 mL）-甲醇（89∶11），筆者則采用Ultimate-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）分離頭孢噻肟鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。流動相的pH值約為8.4，對色譜柱固定相的損害比較大，且峰形差。峰形差的原因可能是因為頭孢噻肟鈉分子中含有多個N原子，為改善峰形，向流動相水相中加入1.0 g·L－1三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH為弱酸性，發(fā)現(xiàn)流動相pH在5.0～6.5之間，分離效果都比較理想。筆者采用pH6.2的溶液作為流動相，取得了良好的分離結(jié)果，且具有分析時間短、分離度好、色譜峰對稱性好、靈敏度高等優(yōu)點，不僅可以測定原料藥中頭孢噻肟鈉的含量，還可用于測定制劑中和生物樣品中的含量。

[1]陳新謙，金有豫主編.新編藥物學(xué)[M].第13版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：67.

[2]徐春麗，潘秀芳，鄭志昌，等.替硝唑葡萄糖注射液與注射用頭孢噻肟鈉的配伍穩(wěn)定性[J].中國藥房，2010，21（4）：236.

[3]張遠(yuǎn)馥，王金中，李永強，等.熒光法測定頭孢噻肟鈉的含量[J].分析科學(xué)學(xué)報，2008，24（1）：82.

[4]明金蘭，朱會琴.HPLC法測定頭孢噻肟鈉的含量[J].藥物分析雜志，2000，20（4）：271.

[5]孫淑芬，董偉林.高效液相色譜法測定血液中頭孢噻肟鈉的濃度[J].中國藥學(xué)雜志，2001，36（10）：697.

[6]朱建平，高燕霞，梁立革，等.關(guān)于頭孢噻肟鈉測定方法的商榷[J].中國藥事，2005，19（1）：40.

[7]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：195.