歐洲花楸的組織培養(yǎng)和快速繁殖試驗研究

黃立華　王占龍　于　欣

摘要：春季采取歐洲花楸品種1（Sorbus aucuparia European Mounain） 和品種2“太陽神”（Sorbus aucuparia Titan）的尚未萌動的1年生帶側(cè)芽莖段為試材，用0.1％Hgcl2分別用不同的時間進行處植體表面消毒。結(jié)果表明這兩個品種的1年生帶側(cè)芽莖段滅菌時間為15min效果較好；而在分化增殖階段，培養(yǎng)基MS+6-BA0.8mgL-1(以下單位同)+NAA0.4+肌醇15的分化苗較為粗壯，增殖系數(shù)大于9。而在同一個生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.5+NAA0.05中培養(yǎng)生根苗時，光照時間為14 小時，發(fā)根情況好，苗健壯，移栽易成活。

關(guān)鍵詞：歐洲花楸；組織培養(yǎng)；繁殖試驗

歐洲花楸（Sorbus aucuparia ），屬薔薇科、花楸屬。原產(chǎn)歐洲和亞洲西部。歐洲花楸為喜光和半耐蔭先鋒樹種，耐旱性強，耐寒力強，栽培性狀優(yōu)良，既可耐冷濕環(huán)境，也能耐干燥瘠薄土壤，可用于荒山綠化。歐洲花楸屬落葉小喬木，春天花朵為白色，復(fù)傘房花序，花朵密集，繁花似錦，葉片春夏季為深綠色，秋季為鮮艷的紫紅色，有光澤，整個冬季至翌年2月橘紅色的果實宿存于枝頭，與瑞雪互映，這在東北一般園林花木中是不可多得的。歐洲花楸在歐洲已被廣泛應(yīng)用于園林綠化中。果實可用于加工天然實用色素、食品、功能性飲料、藥品。可以說歐洲花楸是集食用、園林和生態(tài)價值于一身的珍貴樹種。

為了加快推廣速度，滿足市場的苗木需求，我們自2004年開始通過組培快繁大量獲得歐洲花楸組培苗，快繁組培苗已達到每年約50000株已形成規(guī)模化生產(chǎn)。期望本文能對歐洲花楸規(guī)?；耘嗵峁┮粭l可能有效的途徑。

1試驗材料

1.1植物名稱a.歐洲花楸（Sorbus aucuparia European Mounain）

b.歐洲花楸“太陽神”（Sorbus aucuparia Titan）。

1.2 材料類別1年生帶側(cè)芽莖段

1.3 取材時間4月份芽尚未萌動前。

1.4 取材地點遼寧省干旱地區(qū)造林研究所的歐洲花楸試驗園。

2 試驗材料的處理與消毒

將品種a.（Sorbus aucuparia European Mounain）和品種b.太陽神（Sorbus aucuparia Titan）的外植體材料流水沖洗30min。放入肥皂液中用毛刷輕輕刷去植物表面的泥土，清水沖洗干凈。將外植體剪成15cm左右的莖段，用自來水沖洗2～3h后將材料置于超凈工作臺上，先用75％酒精消毒1min，再用無菌水沖洗3次，繼而以0.1％的Hgcl2分別對兩個品種的外植體表面消毒10 min、15min、20min（滅菌效果見表1），無菌水沖洗5次，取出一根莖段將其放在已經(jīng)過高溫滅菌的吸水紙上，吸干表面水分后，在無菌紙上將外植體切成1～2cm左右?guī)б秆康那o段，接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶為一個帶芽莖段。啟動培養(yǎng)成功后，再將啟動培養(yǎng)萌動的嫩梢轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)進行增殖培養(yǎng)。

3 培養(yǎng)條件

3.1培養(yǎng)基

芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS＋6－BA1.0mgL-1(單位下同)＋NAA0.2。

分化增殖培養(yǎng)基：

MS＋6-BA0.8+NAA0.4（1）

MS+6-BA0.8+NAA0.4+肌醇15（2）

MS+6-BA0.8+NAA0.1（3）

MS+6-BA0.4+NAA0.4（4）

MS+6-BA1.5+NAA0.4（5）

生根培養(yǎng)基：1/2MS+IBA0+NAA0.05

本試驗以MS為基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中均附加3%蔗糖和0.6%瓊脂，PH5.8，培養(yǎng)室溫為23～28℃，光照度為1500～2000Lx，啟動培養(yǎng)和分化增殖培養(yǎng)的光照時間為12hd-1，生根培養(yǎng)的光照時間為12hd-1、14hd-1、16hd-1。

4 無菌培養(yǎng)

4.1 芽的誘導(dǎo)與叢生芽培養(yǎng)

芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS＋6－BA1.0mgL-1＋NAA0.2中培養(yǎng)20d后開始萌動，伸長成無菌苗。培養(yǎng)超過30d后，長成3～6cm高的大量叢生芽。將無菌綠苗剪切成2cm左右的莖段，轉(zhuǎn)接到激素含量不同的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長增殖結(jié)果見表2。

4.2 根的誘導(dǎo)

繼代增殖培養(yǎng)的2～5cm高的無根幼苗切成單株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基+6-BA0.2+NAA0，生根培養(yǎng)的光照時間為12hd-1、14hd-1、16hd-1。培養(yǎng)7d后在不定芽的基部開始有不定根突起，15d后大部分不定芽均有根長出，生根率達90%～100%，30d左右每個小芽可發(fā)根4～8條形成幼苗，生根情況見表3

5 煉苗與移栽

生根苗培養(yǎng)30d后，苗長到5cm高時，把瓶蓋揭開一半，往瓶里倒少許自來水，以防培養(yǎng)基抽干，馴化3d后，再把瓶蓋全部揭開，再馴化一周之后，取出生根苗，用水洗去全部培養(yǎng)基，移栽到營養(yǎng)杯中，營養(yǎng)杯中的營養(yǎng)基質(zhì)為肥沃熟表土＋草炭土＋鐵礦尾砂，比例為：4：3：3。將營養(yǎng)基質(zhì)用高錳酸鉀消毒。培養(yǎng)苗移栽至培養(yǎng)杯后澆透定根水，上搭遮陰網(wǎng)，栽培環(huán)境溫度控制在17℃～27℃，相對濕度為90％，1周噴1/2MS大量元素營養(yǎng)液1次。30d后，苗的成活率可達97％。

6 結(jié)果與分析

6.1 不同滅菌時間對滅菌效果的影響

用0.1Hgcl2對兩個試驗品種的外植體進行10min、15min、20min的滅菌，結(jié)果見表1。

從表1 可以看出，這兩個品種的1年生莖段的滅菌時間15min效果較好，滅菌率在80％以上。試驗中發(fā)現(xiàn)，滅菌時間短，雜菌不能全部殺死就會造成污染，而滅菌時間超過15min，兩個品種的莖段及腋芽除污染外，大部分褐化，雖培養(yǎng)了較長時間也未見萌動。

6.2不同培養(yǎng)基對芽的分化增殖的影響

將誘導(dǎo)成功的無菌綠苗剪切成2cm左右的莖段轉(zhuǎn)接到激素含量、營養(yǎng)物質(zhì)不同不同的培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，生長、增殖情況見表2。

由表2可以看出，1號培養(yǎng)基MS＋6-BA0.8+NAA0.4和2號培養(yǎng)基MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15中培養(yǎng)的無菌苗增殖系數(shù)高，并且無菌苗長得較為粗壯。尤其是2號培養(yǎng)基，自2005年10月對無菌苗進行大量增殖培養(yǎng)后，用2號培養(yǎng)基重復(fù)繼代培養(yǎng)2005年春季的誘導(dǎo)分化成功的無菌苗，苗的增殖系數(shù)始終保持在9.0 以上，生長狀況穩(wěn)定，未見發(fā)生變異，生根狀況良好。與每年新誘導(dǎo)分化成功的新的無菌苗的增殖生長情況無差異。而未加肌醇的培養(yǎng)基中的無菌苗，隨著繼代次數(shù)的增加，組培苗的分化系數(shù)呈下降趨勢，長勢弱于2號培養(yǎng)基中的組培苗。這說明肌醇有利于歐洲花楸的組培苗增殖。5號培養(yǎng)基MS+6-BA1.5+NAA0.04雖然分化系數(shù)最高，但叢生苗過于細弱，幼苗生長無力，試管苗有玻璃化現(xiàn)象。3號培養(yǎng)基MS+6-BA0.8+NAA0.1中苗生長無力，葉色發(fā)黃、落葉。4號培養(yǎng)基MS+6-BA0.4+NAA0.4中無菌苗的增殖系數(shù)低，不利于增殖分化?？梢?，6-BA濃度低時，增殖系數(shù)低，而6-BA濃度高時，增殖系數(shù)高，但容易形成大量弱叢生苗，不能用于下一步的分化、生根培養(yǎng)；6-BA濃度過高時，莖基部會產(chǎn)生大量愈傷組織，試管苗發(fā)生玻璃化現(xiàn)象，影響分化。所以說，2號培養(yǎng)基MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15是歐洲花楸增殖分化的最適培養(yǎng)基。

6.3不同光照時間對歐洲花楸無菌苗生根的影響

2～5cm高的叢芽切成單株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.5+NAA0.05中，生根培養(yǎng)的光照時間為12hd-1、14hd-1、16hd-1培養(yǎng)，無菌苗的生根情況見表3。

由表3可以看出，在相同的生根培養(yǎng)基中，光照時間在14小時以上，生根苗的根系生長好，植株長高，健壯、葉色鮮綠（見圖片二），移栽成活率超過90％。光照14hd-1與光照16hd－1的生長情況無差異，從節(jié)約能源角度出發(fā)，生根時的光照時間為14hd-1即可。

7 結(jié)論

7.1 對1年生、尚未萌動的帶側(cè)芽莖段消毒的時間以15min較好，滅菌率在80％以上。

7.2 激素濃度與營養(yǎng)物質(zhì)影響芽的分化率與增殖系數(shù)，每千克激素濃度相同的培養(yǎng)基中加入15g肌醇可使經(jīng)過多次繼代培養(yǎng)的無菌苗的增殖系數(shù)仍保持在9以上。初步篩選出芽分化增殖階段的最適培養(yǎng)基為MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15；

7.3 在生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根培養(yǎng)階段光照時間在14小時以上，有利于根系的生長。苗壯，苗移栽成活率高。

通過四年的歐洲花楸組培擴繁試驗，雖然獲得了一些有成效的經(jīng)驗，為加快歐洲花楸組培擴繁和推廣速度具有一定的參考意義。但仍有需要完善和進一步探索的地方，如：在增殖分化培養(yǎng)基中加入肌醇對增加增殖系數(shù)的最佳量及作用機理還需做深入的探索、研究。

參考文獻

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