西藏野生垂穗披堿草CnC0R410基因克隆及表達(dá)分析

引用格式：，饒等．西藏野生垂穗披堿草CnCOR410基因克隆及表達(dá)分析[J].草地學(xué)報，2025，33（7）：2090 -2098 CHAI Yi，RAO Xin-yuan，YUANLu-yao，et al. Cloning and Expression Analysis of the CnCOR410 Gene in Campeiostachys nutans Griseb.[J].Acta Agrestia Sinica，2025，33（7） ：2090-2098

Cloning and Expression Analysis of the CnCOR410 Gene in Campeiostachys nutans Griseb.

CHAI Yi1，RAO Xin-yuan1， YUAN Lu-yao1，WANG He-tong1， ZHANG Bo-ning1，MIAO Yan-jun ² CAO Zhong-hua2，YANG Pei-zhi1，HU Tian-mingl*，F(xiàn)U Juan-juan1* （1.DepartmentofGrassandSience，CollegeofGrassadAgricultue，NorthwstAamp;FUniversity，Yanging，aaniProvin0 China;2.CoegeofalSieeAgiculturalndAialHusbadryolgeofbetUnversitygchiiang6a

Abstract： To investigate the molecular mechanism of dehydrin regulating plant abiotic stress response，the CnCOR410 gene was cloned from Xizang wild Campeiostachys nutans Griseb. Amino acid sequence analysis， subcellular localization，and expression profile of the CnCOR41O gene in response to cold，drought，and salt stress were conducted. The results showed that the coding sequences （CDS）of the CnCOR410 gene was 765 bp in length，encoding 254 amino acids，with a molecular weight of 7504.48 Da and an isoelectric point of 4.87.The CnCOR41O protein was a hydrophilic and non-transmembrane protein，and its secondary structure was mainly random coil，accounting for 61.42% . The CnCOR41O contained the conserved domain of dehydrin and belonged to the LEA family. The amino acid sequence similarity between CnCOR41O and wheat （Triticum aestivum L）was the highest at 93.44% ，and the protein was located in the cytoplasm. The RT-qPCR results showed that CnCOR41O was expressed in the root，stem，and leaf tissues of C .nutans，with the highest expression in the leaves. Moreover，the expression of CnCOR410 was regulated by cold，drought，salt stress， and ABA （ Plt;0.05 .The results of this study laid a foundation for further clarifying the mechanism of

CnCOR410 regulating the abiotic stress adaptation of C . nutans. Key Words：Campeiostachys nutans Griseb. ;Dehydrin;CnCOR410;Gene cloning;Expression analysis; Xizang

低溫、干旱、鹽漬化作為全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中嚴(yán)重的非生物逆境，限制植物的正常生長和發(fā)育。在缺水和低溫條件下會導(dǎo)致植物脫水和細(xì)胞損傷，而鹽脅迫會引起植物滲透變化、抑制根系水分吸收，并最終損害植物細(xì)胞[1]。垂穗披堿草（CampeiostachysnutansGriseb.）營養(yǎng)價值高、根系發(fā)達(dá)、抗逆性強(qiáng)，該草種作為青藏高原特色鄉(xiāng)土草本植物，在退化生態(tài)系統(tǒng)治理與人工牧草地建植中具有重要的應(yīng)用價值[2]。經(jīng)過長期自然選擇的西藏野生垂穗披堿草居群已經(jīng)進(jìn)化出對極端低溫、干旱、鹽堿等逆境較強(qiáng)的適應(yīng)性，開展其適應(yīng)低溫、干旱和鹽堿等逆境的分子機(jī)制研究，對于充分利用西藏野生垂穗披堿草野生種質(zhì)資源的優(yōu)良抗性基因遺傳改良其近緣物種具有重要意義[3-5]

脫水素（Dehydrin，DHN）是植物中重要的逆境響應(yīng)蛋白[6]，具有高度親水性、易溶性，屬于胚胎晚期豐富蛋白（Lateembryogenesisabundant，LEA）家族成員，并被歸類為LEAⅡ蛋白。它包含三個植物L(fēng)EA蛋白家族的保守片段（Y，S，K）序列[8-10]DHN具有酶冷凍保護(hù)、膜保護(hù)和針對活性氧的保護(hù)功能，在植物應(yīng)對干旱、鹽堿等非生物脅迫時起到重要保護(hù)作用[1]。DHN一直被認(rèn)為是實現(xiàn)離子結(jié)合功能的輔助因子，可作為冷凍保護(hù)劑并幫助清除自由基，通過非特異性結(jié)合使其與相關(guān)抗逆基因相互作用，降低非生物脅迫過程中大量活性氧物質(zhì)對細(xì)胞造成的傷害12。最近研究發(fā)現(xiàn)脫水素也可以通過調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)基因參與調(diào)控植物的非生物脅迫響應(yīng)[13]。CORs（Cold-regulated genes）基因被認(rèn)為是冷脅迫反應(yīng)中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)基因，在提高植物耐寒性和保持水果采后質(zhì)量方面具有關(guān)鍵作用[14]。ICE-CBF-COR 信號傳導(dǎo)是目前已知調(diào)節(jié)植物低溫脅迫的重要調(diào)節(jié)因子， CBFs 通過激活觸發(fā)各種 CORs 基因在植物耐寒機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用[15]。在擬南芥（Arabidopsisthaliana）上的研究表明，脫水素基因 AtCOR47 同時響應(yīng)脫落酸（Abscisicacid，ABA）低溫和干旱脅迫[16]。溝葉結(jié)縷草中（Zoysiamatrella）也報道了 ZmCOR410 作為一個酸性脫水素基因響應(yīng)低溫脅迫[17]。然而，目前對于垂穗披堿草脫水素基因 CnCOR410 調(diào)控植物非生物脅迫應(yīng)答的機(jī)制尚不明晰。

本研究從當(dāng)雄野生垂穗披堿草中克隆了CnCOR41O基因的編碼序列（CodingDNAsequence，CDS），并對其進(jìn)行生物信息學(xué)、基因表達(dá)模式和亞細(xì)胞定位分析，為深入地解析 CnCOR410 基因調(diào)控西藏野生垂穗披堿草的抗逆功能提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及處理

本研究以西藏當(dāng)雄縣 （30^°28.535^′N ， 91^° 06.246^′E） 采集的野生垂穗披堿草種子為材料，篩選飽滿種子，種子經(jīng) 2.5% 次氯酸鈉溶液消毒 15min 后無菌水沖洗，于 22^°C/18^°C，12000lx（16h/8h 光周期）條件下培養(yǎng)28d對西藏野生垂穗披堿草幼苗進(jìn)行 4^°C 低溫處理 （0，12，24，48，72，120h） ；剪除葉片后于培養(yǎng)箱內(nèi)脫水進(jìn)行干旱脅迫 （0，2，4，8h） ：0.01mmol?L^-1 ABA處理 （0，2，4，8h）;150mmol?L^-1 NaCl鹽脅迫 （0，2，4，8h） 。所有處理均設(shè)立3次獨立生物學(xué)重復(fù)，按照預(yù)設(shè)時間節(jié)點取樣。取樣后立即置于液氮固定，隨后轉(zhuǎn)移至一 80^°C 超低溫冰箱中保存，確保樣本完整性以滿足后續(xù)qRT-PCR試驗要求。

1.2 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

利用莊盟生物總RNA提取試劑盒KKFastPlantTotalRNAKit（ZP405K）從西藏野生垂穗披堿草中提取RNA，采用酶標(biāo)儀檢測提取RNA的質(zhì)量并迅速保存于一 80^°C 冰箱；采用HiScriptⅡ第一鏈cDNA合成試劑盒（諾唯贊，R211-01）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)物于一 20^°C 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3基因克隆與連接

以西藏野生垂穗披堿草cDNA為模板，采用2× PhantaMaxMasterMix超保真酶 50μL 體系進(jìn)行目的基因PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系包含：cDNA模板2μL， 正反向引物（表1）各 2μL 、 2× PhantaMaxMasterMix超保真酶 25μL ，無酶水補(bǔ)足至 50μL 。PCR程序：預(yù)變性 95^°C 持續(xù) 3min ，變性 95^°C 持續(xù) 10s， 退火 58^°C 持續(xù) 30s. 延伸 72^°C 持續(xù) 90s ，最后徹底延伸 72^°C 持續(xù) 3min ，循環(huán)共35個。PCR產(chǎn)物經(jīng) 1% 瓊脂糖凝膠電泳檢測后，使用ZP2O4DNA純化試劑盒（莊盟生物）回收目的片段。隨后，以pCAMBI1302為載體，構(gòu)建35S：CnCOR410-GFP融合表達(dá)載體。載體經(jīng)EcoRI（Thermol品牌）酶切20μL 反應(yīng)體系： 1μg 載體， 2μL 酶， 4μL Buffer，其余體積用無酶水補(bǔ)足，放人PCR中 37^°C 反應(yīng) 15min 后 85^°C 滅活 15min ，通過瓊脂糖凝膠電泳檢驗酶切載體質(zhì)量。采用ClonExpressII一步克隆試劑盒（C112，諾唯贊）， 20μL 反應(yīng)體系： 0.03pmol 載體，0.06pmol片段， 4μL Buffer，2μL酶，無酶水補(bǔ)足，進(jìn)行連接反應(yīng)。將反應(yīng)體系放入PCR中 37^°C 孵育 30min 后轉(zhuǎn)化 DH5α 感受態(tài)細(xì)胞， 37^°C 培養(yǎng) 12～16h 。挑取單克隆菌落，利用菌檢引物（表1）進(jìn)行菌落PCR驗證，陽性克隆經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后提取質(zhì)粒送擎科生物測序，最終獲得35S：CnCOR410-GFP重組載體。

1.4 生物信息學(xué)分析

利用在線軟件InterPro預(yù)測了CnCOR410蛋白保守結(jié)構(gòu)域；使用SOPMA在線軟件預(yù)測了蛋白二級結(jié)構(gòu)；利用在線工具Novopro分析了蛋白親疏水性；使用在線軟件Expasy分析了CnCOR410編碼氨基酸數(shù)量、不穩(wěn)定系數(shù)、脂肪族系數(shù)等；利用在線軟件SWISS-MODEL預(yù)測蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)；利用在線軟件NCBI-Blast進(jìn)行多序列對比；利用Megal1軟件分析CnCOR410蛋白與其他植物COR410蛋白的進(jìn)化關(guān)系并繪制neighbor-joining系統(tǒng)進(jìn)化樹；利用在線軟件Espript繪制氨基酸序列對比圖；利用TMHMM在線軟件進(jìn)行蛋白跨膜區(qū)分析。

1.5 qRT-PCR定量分析

利用諾唯贊ChamQSYBRqPCRMasterMix（Q311-02/03）試劑盒進(jìn)行qRT-PCR定量分析，加人 2× ChamQ SYBR qPCR Master Mix 10μL ，引物各 0.4μL ，加人 50× ROX Reference Dye 0.4μL 垂穗披堿草cDNA加人量不超過 2μL ，以Tubulin作為內(nèi)參基因。采用 2^-ΔΔCt 計算 CnCOR410 基因的相對表達(dá)量。引物序列見表2。

1. 6 亞細(xì)胞定位

經(jīng)菌落PCR驗證正確的 γCAMBI1302：35S CnCOR4IO–GFP 融合載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞，在LB培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)后離心收集菌體，配置新鮮的滲透液 （0.2mmol?L^-1Z 酰丁香酮，10mmol?L^-1MgCl₂ 10mmol?L^-1 MES溶液），利用滲透液重懸菌，調(diào)整菌液濃度至 OD₆₀₀≈0.6，28^°C 避光活化 3h ，將活化菌液注射至4周齡本氏煙草葉片中進(jìn)行瞬時轉(zhuǎn)化實驗。 28^°C 培養(yǎng)2d，利用研究型顯微鏡觀察亞細(xì)胞定位。

1.7 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用IBMSPSSStatistics27軟件進(jìn)行單因素方差分析，在 Plt;0.05 顯著性水平下，采用Duncan法進(jìn)行多重比較檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 CnC0R410基因克隆

以垂穗披堿草葉片RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得約 500～750bp 的特異性條帶。經(jīng)過測序確定片段大小為765bp（圖1）。

2.2 CnCOR410基因生物信息學(xué)分析

利用DNAMAN9軟件預(yù)測CnCOR410氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)CnCOR410編碼254個氨基酸（圖2A）。利用InterPro在線軟件分析，CnCOR41O蛋白含有脫水素保守結(jié)構(gòu)域（圖2B）。利用Expasy在線軟件分析發(fā)現(xiàn)COR410編碼氨基酸中谷氨酸（Glu）含量最高為 16.9% ，其次為賴氨酸（Lys）14. 2% 和丙氨酸（Ala）為 8.7% ，分子式為 C₁₂₀₇H₁₉₆₂N₃₃₈O₄₁₅S₃ ，不穩(wěn)定系數(shù)為57.82，脂肪族系數(shù)為61.81。利用SOPMA在線網(wǎng)站預(yù)測蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)（圖2C），分析顯示：CnCOR410蛋白以無規(guī)卷曲 （61.42% ）為主導(dǎo)構(gòu)象，同時含有 37.01% 的 α 螺旋以及 1.57% 伸展鏈利用Novopro在線軟件分析疏水性為一1.083，表明該蛋白為親水蛋白（圖2D）。利用SWISS-MODEL完成蛋白三級結(jié)構(gòu)（圖2E），與二級結(jié)構(gòu)預(yù)測基本一致。利用TMHMM在線工具軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)跨膜區(qū)分析，結(jié)果表明所有氨基酸均位于細(xì)胞膜外，不存在跨膜結(jié)構(gòu)（圖2F）。上述結(jié)果證明CnCOR410屬于非跨膜蛋白，含有脫水素保守結(jié)構(gòu)域。

2.3 CnCOR410多序列對比及進(jìn)化樹分析

根據(jù)CnCOR410的氨基酸序列利用NCBI-Blast在線軟件分析表明， CnCOR410 蛋白與多種禾本科植物COR410蛋白序列具有高度相似性：與二粒小麥（Triticumdicoccoides）相似度為 93.44% ，小麥（Triticumaestiuum）相似度為 92.37% ，烏拉爾圖小麥（Triticumurartu）相似度為 89.55% ，大麥（Hordeumvulgaresubsp.vulgare）相似度為91. 89% ，二穗短柄草（Brachypodiumdistachyon）相似度為 72.62% ?；贛egal1構(gòu)建的鄰近系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示（圖3A），CnCOR410與大麥COR410蛋白的進(jìn)化關(guān)系最為接近。進(jìn)一步通過Espript3.0進(jìn)行的多重序列比對分析表明，CnCOR410與其他禾本科植物的COR410蛋白具有高度一致的氨基酸序列特征，均含有一段K片段和一段S片段，即KRK-KKKGLKEK序列和SSSSSSSSS序列（圖3B）。

2.4 蛋白亞細(xì)胞定位

采用農(nóng)桿菌瞬時侵染煙草葉片技術(shù)，分析了

CnCOR410的亞細(xì)胞定位情況，發(fā)現(xiàn)CnCOR410：：eGFP熒光主要定位于細(xì)胞質(zhì)中（圖4）。

2.5 CnC0R410表達(dá)模式分析

利用qRT-PCR技術(shù)檢測西藏野生垂穗披堿草CnCOR410基因的組織特異性表達(dá)。結(jié)果顯示，該基因在根、莖、葉組織中均檢測到表達(dá)，其中葉片中的表達(dá)量顯著高于其他組織 （Plt;0.05） （圖5A）。為進(jìn)一步明確 CnCOR410 基因的表達(dá)調(diào)控特征，對西藏野生垂穗披堿草分別進(jìn)行了低溫、ABA、鹽和干旱處理。低溫處理后 CnCOR410 基因表達(dá)量呈現(xiàn)先增加后降低趨勢，在低溫處理 24h 時表達(dá)量最高（圖5B）。ABA處理初期CnCOR410基因表達(dá)量呈現(xiàn)先上升趨勢，處理4h后表達(dá)量達(dá)到峰值，隨后表達(dá)量出現(xiàn)下降（圖5C）。干旱和鹽處理也能夠誘導(dǎo) CnCOR410 基因表達(dá)快速上調(diào)（圖5D-E）。上述研究結(jié)果表明垂穗披堿草CnCOR410參與ABA、鹽、干旱和低溫誘導(dǎo)的脅迫響應(yīng)。

3 討論

干旱、鹽漬、冷害等非生物脅迫會導(dǎo)致植物體內(nèi)水分失衡，光合能力下降，對植物生長發(fā)育乃至作物產(chǎn)量形成的不利影響越來越明顯，嚴(yán)重影響了農(nóng)業(yè)正常生產(chǎn)[18-19]。西藏野生垂穗披堿草是一種廣布于高寒地帶的優(yōu)良牧草，具有適應(yīng)性強(qiáng)、抗寒、抗旱、耐鹽堿等優(yōu)點，可作為解析植物非生物脅迫適應(yīng)機(jī)制的理想實驗材料[20]。前期轉(zhuǎn)錄組分析表明，脫水素基因 CnCOR410 在西藏野生垂穗披堿草響應(yīng)非生物脅迫過程中發(fā)揮重要調(diào)控功能[21]

本研究從西藏野生垂穗披堿草中克隆了CnCOR41O的CDS序列，進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)CnCOR410與二粒小麥、小麥、烏拉爾圖小麥、大麥、二穗短柄草等禾本科植物蛋白相似度在 70% 以上，推測 CnCOR410 基因與這些植物在進(jìn)化中具有高度保守性，這與垂穗披堿草為麥類作物野生近源種一致[22]； CnCOR410 在垂穗披堿草的根、莖、葉中均有表達(dá)，與Abdul等[23]在擬南芥中的發(fā)現(xiàn)結(jié)果一致。COR蛋白作為一種富含親水性氨基酸，能夠維持生物大分子及膜系統(tǒng)的穩(wěn)定性，具有增強(qiáng)植物細(xì)胞抗凍、抗脫水等功能[24]。許多發(fā)現(xiàn)植物在干旱、高鹽、低溫脅迫下脫水素表達(dá)量顯著增加，脫水素表達(dá)量與植物的抗凍能力和滲透平衡調(diào)節(jié)能力呈正相關(guān)[25]。低溫脅迫下冬小麥（Triticum aestiuumL）和大麥（Hordeumvulgare）中脫水素積累，冬小麥WCS120和大麥DHN5的相對脫水素積累與冬季作物存活呈正相關(guān)[26]。與之相似，本研究發(fā)現(xiàn)低溫、干旱、鹽脅迫能夠誘導(dǎo)CnCOR410基因迅速表達(dá)，這與前人在擬南芥（Arabidopsisthaliana）水稻（Oryzasativa）枳（Citrustrifoliata）和檸檬（Citruslimon）等植物上的研究結(jié)果一致[27-32]。Puhakainen等[33]在擬南芥中研究發(fā)現(xiàn)脫水素有助于提高植物的耐凍性。Sena等在白云杉（Piceameyeri）中研究發(fā)現(xiàn)10種脫水素基因在干旱脅迫后轉(zhuǎn)錄水平顯著提高[34]。在大麥中發(fā)現(xiàn)HDhns基因在嚴(yán)重干旱時被大量誘導(dǎo)表達(dá)[35]。此外研究發(fā)現(xiàn)MsDhn1可以正向調(diào)節(jié)紫花苜蓿（MedicagosatiuaL.）缺水的耐受性[36]，這為脫水素提高植株耐旱性提供了科學(xué)依據(jù)。在本研究中，干旱脅迫誘導(dǎo) CnCOR4IO 基因的表達(dá)迅速增加，這與脫水素具有高度親水性，能夠減少干旱脅迫下植物的水分流失的這一功能密切相關(guān)。鹽脅迫下藜麥（Chenopodiumquinoa）胚中脫水素表達(dá)量顯著增加[7]。Kirungu等[38]通過敲除脫水素基因進(jìn)一步證實了DHN有利于提高植物的耐鹽性。綜合上述研究表明垂穗披堿草脫水素 CnCOR410 可能作為一個候選基因應(yīng)用于抗旱、耐寒和耐鹽牧草和麥類作物新品種（系）育種工作中。本研究為深入探究CnCOR410基因調(diào)控垂穗披堿草適應(yīng)西藏獨特的氣候條件（極端低溫、干旱和鹽堿）奠定基礎(chǔ)。

許多研究表明脫水素基因參與響應(yīng)一系列激素信號并在植物非生物脅迫應(yīng)答中協(xié)同發(fā)揮調(diào)控作用[39]。不同類型的脫水素對ABA信號的敏感性存在差異，本研究發(fā)現(xiàn)外源ABA處理能夠誘導(dǎo)CnCOR410基因表達(dá)，表明CnCOR410可能是ABA依賴型脫水素，推測脫水素CnCOR10與ABA信號相互作用調(diào)控西藏野生垂穗披堿草適應(yīng)低溫、干旱和鹽脅迫應(yīng)答。在小麥中研究發(fā)現(xiàn)脫落酸（ABA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、赤霉素（GA）和水楊酸（SA）等均可誘導(dǎo)脫水素的表達(dá)[40]，這些研究成果與本試驗結(jié)果一致。

已有研究表明脫水素中的K段可以形成兩親性 α 螺旋可以與各種其他蛋白質(zhì)的部分脫水表面以及生物膜表面相互作用同時一種DHN蛋白中的K偏段可以形成束，以增強(qiáng)它們在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-生物膜相互作用中的兩親性特性從而增強(qiáng)植物的保護(hù)功能[41]。Wang等42研究發(fā)現(xiàn)脫水素中的S片段可以對煙草亞細(xì)胞定位結(jié)果產(chǎn)生影響而K片段不影響其定位情況。本研究發(fā)現(xiàn)CnCOR410蛋白定位在細(xì)胞質(zhì)中，具有脫水素保守結(jié)構(gòu)域，與Candat等43的研究成果相一致。經(jīng)氨基酸多序列對比發(fā)現(xiàn)CnCOR410含有K片段和S片段。綜上研究表明CnCOR410參與調(diào)控垂穗披堿草響應(yīng)低溫、干旱、鹽等非生物脅迫，且該脫水素蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)發(fā)揮作用。

4結(jié)論

本研究成功克隆了 CnCOR410 的編碼序列，長度為 765bp ，編碼254個氨基酸。CnCOR410蛋白屬于LEA家族，定位于細(xì)胞質(zhì)，為親水性蛋白、非跨膜蛋白，含有K片段和S片段，與二粒小麥、小麥、烏拉爾圖小麥、大麥、二穗短柄草等禾本科植物具有高度相似性。CnCOR410在垂穗披堿草根莖葉中均有表達(dá)，且低溫、干旱、鹽和ABA能夠誘導(dǎo)該基因表達(dá)。本研究結(jié)果為深人解析 CnCOR4IO 基因調(diào)控垂穗披堿草的非生物脅迫應(yīng)答機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]吳瑞，劉文輝，梁國玲，等．燕麥AsGRAS36基因的克隆與表 達(dá)分析[J].草地學(xué)報，2024，32（11）：3371-3382 WUR，LIUWH，LIANGGL，etal.Cloningandexpression analysisof theAsGRAS36 gene in oats[J].ActaAgrestia Sinica，2024，32（11）：3371-3382

[2]陸光平，聶斌．垂穗披堿草利用價值評價[J].草業(yè)科學(xué)， 2002，19（9）：13-15 LUG P，NIE B.Evaluation on utilization value of Elymus nutans[J].PrataculturalScience，2OO2，19（9）：13-15

[3]其美拉姆，普布卓瑪，崔彤彤，等．外源鈣對低溫脅迫下西藏 野生垂穗披堿草生理及相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].草地學(xué)報， 2021，29（5）：919-928 QIMLM，PUBZM，CUITT，etal.Effectsof exogenous calcium on physiologyand related gene expression ofCampeiostachys nutansGriseb.underLow temperature stress in Xizang [J].Acta Agrestia Sinica，2021，29（5）：919-928

[4] 趙雪雁，萬文玉，王偉軍.近50年氣候變化對青藏高原牧草生產(chǎn)潛 力及物候期的影響[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報，2016，24（4）：532-543 ZHAO XY，WANWY，WANGWJ.Impactsofclimate change on forage production potential and phenological period in Qinghai-Xizang Plateau over the past 5O years[J].Chinese JournalofEco-Agriculture，2016，24（4）：532-543

[5]LONGJT，DONGMJ，WANGCQ，etal.Effects of drought and salt stress on seed germination and seedling growth of Elymusnutans[J].PeerJournal，2023，11：e15968

[6]LYUA M，WENWW，F(xiàn)ANNN，et al. Dehydrin MsDHN1 improvesaluminum toleranceof alfalfa（Medicago satiuaL.） byaffecting oxalate exudation from root tips[J]．The Plant Journal ：For Cell and Molecular Biology.2021;108（2）： 441-458

[7]王西子，信欣，張方亦琢，等．植物脫水素的生物學(xué)功能與調(diào) 控機(jī)制研究進(jìn)展[J].植物生理學(xué)報，2022，58（9）：1617-1628 WANGXZ，XINX，ZHANGFYZ，etal.Researchadvances inbiological functionsand regulatory mechanisms of plant dehydrins[J].Plant Physiology Journal，2022，58（9）：1617-1628

[8]WANG Y Z，XU H B，ZHU HL，et al. Classification and expression diversification of wheat dehydrin genes[J]． Plant Science，2014，214：113-120

[9]GRAETHER SP，BODDINGTONKF.Disorder and func tion：a review of the dehydrin protein family[J].Frontiers in Plant Science，20l4，5：576

[10] VERMA G， DHAR Y V，SRIVASTAVA D. Genome-wide analysis of rice dehydrin gene family：itsevolutionary conservedness and expression pattern in response to PEG induced dehydration stress[J]. Plos one，2017，12（5）：0176399

[11]RILEY AC，ASHLOCK AD，GRAETHER SP.Evolution ofthemodular，disordered stressproteinsknown as dehydrins [J].Plos one，2019，14（2）：0211813

[12]BODDINGTON K F，GRATHER S P.Binding of a vitis riparia dehydrin to DNA[J].Plant Science，2019，287：110172

[13]TIWARI P，CHAKRABARTY D. Dehydrin in the past four decades： from chaperones to transcription co-regulators in regulating abiotic stress response[J]. Current Research in Biotechnology，2021，3：249-259

[14] SONG L J，ZHANG WW，LI Q，et al. Melatonin alleviates chiling injury and maintains postharvest quality by enhancing antioxidant capacity and inhibitingcell wall degradation in coldstored eggplant fruit[J].Postharvest Biology and Technology， 2022，194：0925-5214

[15] GUO X Y，ZHANG L，DONG G Q，et al. A novel cold-regulated protein isolated from saussurea involucrata confers cold and drought tolerance in transgenic tobacco （Nicotiana Tabacum）[J].Plant Science，2019，289：110246

[16］王俊娟，陸許可，郭麗雪，等．陸地棉脫水素基因GhDHN1與擬 南芥AtCOR47基因的比較[J]．中國棉花，2018，45（5）：13-15，19 WANG JJ，LUXK，GUO L X，et al. Comparison between cotton dehydrin gene GhDHN1 and Arabidopsis AtCOR47 gene [J].China Cotton，2018，45（5）：13-15，19

[17]張曉寒，陳彥良，馬欣，等．溝葉結(jié)縷草ZmCOR410基因抗逆 功能鑒定[J].華北農(nóng)學(xué)報，2022，37（4）：53-61 ZHANG XH，CHEN YL，MA X，et al.Functional identification of ZmCOR410 gene for stress resistance in Zoysia matrella [J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica，2022，37（4）：53-61

[18］郭倩倩，周文彬.植物響應(yīng)聯(lián)合脅迫機(jī)制的研究進(jìn)展[J].植物 學(xué)報，2019，54（5）：662-672 GUO Q Q， ZHOU W B. Research advances in mechanisms of plant response to combined stress[J]．Chinese Buletin of Botany，2019，54（5）：662-672

[19］陳乃鈺，張洋，施麟，等.GRAS轉(zhuǎn)錄因子在植物生長發(fā)育及非 生物脅迫應(yīng)答中的研究進(jìn)展[J]．植物生理學(xué)報，2025，61 （3）：215-228 CHEN N Y，ZHANG Y，SHI L，et al. Research progress on GRAS transcription factors in plant growth，development and abiotic stress responses[J].Plant Physiology Journal，2025，61 （3）：215-228

[20]郭榮明，趙芯，高國榮，等．垂穗披堿草的研究進(jìn)展[J]．畜牧 與飼料科學(xué)，2024，45（2）：73-81 GUO R M，ZHAO X，GAO G R，et al. Research progress on Elymus nutans[J].Animal Husbandry and Feed Science，2024， 45（2）：73-81

[21]FU JJ，HU T M，YANG P Z，et al. De novo transcriptome sequencing and gene expression profiling of Elymus nutans undercold stress[J]. BMC Genomics，2016，17（1）：870

[22]YANGCR，BAUMBR，JOHNSON DA，et al.Molecular diversity of the 5S nuclear ribosomal DNA in Campeiostachys with StHY haplome constitution[J].Journal of Systematics and Evolution，2020，58：69-76

[23]ABDULAM，SABEEMM，MULLATHSK，etal.Plant group II LEA proteins：intrinsically disordered structure for multiple functions in response to environmental stresses [J]. Biomolecules，2021，11：1662

[24]THALHAMMER A，HINCHA D K. A mechanistic model of COR15 protein function in plant freezing tolerance：integration ofstructural and functional characteristics[J].Plant Signal Behav.2014，9（12）：e977722

[25]NIAN Y W，ASLAM M M，WANG X，et al. The CpCOR1 gene enhances cold tolerance and antioxidant activity of papaya fruit in response to postharvest chilling stress[J].Postharvest Biology and Technology，2024，218：113154

[26］龔玲，黃偉，王雙友，等．枳和檸檬低溫鍛煉相關(guān)基因COR8結(jié) 構(gòu)比較與低溫響應(yīng)分析[J].分子植物育種，2025，27（3）：1-9 Gong L，HUANG W，Wang S Y，et al. Structural Comparison andLow-TemperatureResponse Analysis ofCold AcclimationRelated Gene COR8 in Citrus trifoliata and Citrus limon[J]. Molecular Plant Breeding，2025，27（3）：1-9

［27］李帥頡，張文娜，張志剛，等．桃COR413基因家族鑒定及其在 采后低溫和LTC處理中的表達(dá)[J].分子植物育種，2022，20 （24）：8091-8098 LISJ，ZHANGWN，ZHANGZG，etal.Identificationof the COR413 gene family in peach and its expression under postharvest low temperature and LTC treatment[J]. Molecular Plant Breeding，2022，20（24）：8091-8098

[28]坎智勇，張德輝，李中興，等．90個蘋果品種耐寒性評價和全 基因組關(guān)聯(lián)分析[J].園藝學(xué)報，2023，50（5）：921-932 KAN ZY，ZHANG D H，LI Z X，et al. Cold tolerance evaluationand genome-wide association analysis of 9O apple cultivars [J].Acta Horticulturae Sinica，2023，50（5）：921-932

[29］齊學(xué)禮，李瑩，李春盈，等.bHLH轉(zhuǎn)錄因子在植物耐冷基因工 程中的應(yīng)用進(jìn)展[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，52（11）：1-9 QI XL，LIY，LI C Y，et al. Advances in application of bHLH transcription factors in plant cold tolerance genetic enginering [J].Journal of Henan Agricultural Sciences，2023，52（11）：1-9

[30］馬宇航，王克濤，胡恒康，等.核桃JrDHN基因調(diào)控體胚萌發(fā) 的機(jī)制[J].分子植物育種，2025，27（3）：1-12 MA Y H，WANG K T，HU H K，et al. Mechanism of walnut JrDHN gene in regulating somatic embryo germination[J]. Mnlerular Plant Rreeding 2025 27（3）.1-12

[31]GANESHAN S，VITAMVASP，F(xiàn)OWLERDB，et al.Quantitative expression analysis of selected COR genes reveals their differential expression inleafand crown tissuesofwheat（Triticum aestivum L.）during an extended low temperature acclimation regimen[J]. Journal of Experimental Botany，2Oo8，59（9）： 2393-2402

[32] HOUDE M，DALLAIRE S，N'DONG D，et al. Overexpres\" sion of the acidic dehydrin WCOR41O improves freezing tolerance in transgenic strawberry leaves[J]. Plant Biotechnology Journal，2004，2（5）：381-387

[33]PUHAKAINENT，HESSMW，MAKELAP，etal.Overexpression of multiple dehydrin genes enhances tolerance to freezing stress in Arabidopsis [J].Plant Molecular Biology，2004，54 （5）：743-753

[34] STIVAL S J，GIGUERE I，RIGAULT P，et al. Expansion of the dehydrin gene family in the Pinaceae is associated with considerable structural diversity and drought-responsive expression [J].Tree Physiology，2018，38（3）：442-456

[35]ABEDINIR，GHANEGOLMOHAMMADIF，PISHKAMRADR，et al. Plant dehydrins：shedding light on structure and expression patterns of dehydrin gene family in barley[J]. Journal of Plant Research，2017，130（4）：747-763

[36]LVAM，SULT，F(xiàn)ANNN，etal.TheMsDHN1-MsPIP2; 1-MsmMYBmodule orchestratesthe trade-offbetween growth and survival of alfalfa in response to drought stress[J].Plant Biotechnology Journal，2024，22（5）：1132-1145

[37]BURRIEZA HP，KOYRO HW，TOSARL M，etal. High salinityinduces dehydrin accumulation in Chenopodium quinoa Willd.cv.Hualhuas embryos[J].Plantand Soil，2O11，354：69-79

[38]KIRUNGUJN，MAGWANGA RO，PUL，et al. Knockdown ofGh_A05G1554（GhDHN_03）and Gh_D05G1729 （GhDHN_O4）dehydrin genes，reveals their potential role in enhancing osmotic and salt tolerance in cotton[J].Genomics， 2020，112（2）：1902-1915

[39]HU XF，LIU JH，LIU EH.et al. Arabidopsis cold-regulated plasma membrane protein Cor4l3pml is a regulator of ABA response[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2021，561：88-92

[40]ZHU WN，ZHANGDP，LUXX，et al. Characterisation of an skn-type dehydrin promoter from wheat and its responsiveness to various abiotic and biotic stresses[J]. Plant Molecular Biology，2014，32：664-678

[41] YANG Y Q，SUN X D，YANG S H，et al. Molecular cloning andcharacterization of a novel SK3-type dehydrin gene from Stipa purpurea[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2014，448（2）：145-150

[42]WANGXY，YUZY，LIUH，et al. Effect of K-/S- segments on subcelllar localization and dimerization of wheat dehydrin WZY1-2[J]. Plant Signaling and Behavior，2O2O，15（12）： 1827583

[43] CANDAT A，PASZKIEWICZ G，NEVEU M，et al. The ubiquitousdistribution of lateembryogenesisabundant proteins across cell compartments in Arabidopsis offers tailored protection against abiotic stress[J]. Plant Cell，2014，26：3148-3166

（責(zé)任編輯付宸）