抑制脯氨酰內(nèi)肽酶表達(dá)對(duì)非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的影響及作用機(jī)制

摘要：目的探究脯氨酰內(nèi)肽酶（PREP）對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型的影響及可能的機(jī)制。方法將18只健康6＼～8周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、NASH組和NASH+迷迭香酸（RA）組，每組6只。正常對(duì)照組飼予普通飼料16周，NASH組及 NASH+RA 組飼予高脂飲食16周，第9周NASH+RA組予加PREP抑制劑RA灌胃，100mg/kg，1 次 /d ，干預(yù)8周。造模和干預(yù)結(jié)束后處死小鼠，檢測(cè)不同組別小鼠的血清炎癥指標(biāo)、肝臟甘油三酯（TG）濃度，觀察肝臟脂質(zhì)、炎癥、肝纖維化的改變，并計(jì)算NAFLD活動(dòng)度（NAS）積分，應(yīng)用Westem Blot、熒光定量PCR法分別檢測(cè)各組小鼠肝組織PREP、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體- ?γ（PPAR-γ ）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（FGF21）、沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）蛋白和mRNA水平。正態(tài)分布的計(jì)量資料多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t和Dunnett’s-T3檢驗(yàn)。不滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料多組間比較及進(jìn)一步兩兩比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)。結(jié)果NASH+RA組小鼠血清IL-6、TNF- ??α∝ TG水平均較NASH組顯著降低（ P 值均 lt;0.05 ），NASH+RA組肝脂肪變性、肝細(xì)胞水腫較NASH組明顯減輕，炎細(xì)胞浸潤(rùn)較NASH組減少，肝組織病變明顯好轉(zhuǎn)。 ΔNASH+RA 組NAS積分與NASH組相比顯著降低（ Plt; 0.05）;NASH組血管周?chē)z原纖維增多，偶見(jiàn)纖維橋連， ΔNASH+RA 組的肝臟纖維化與NASH組比較，血管周?chē)z原纖維稍減少。NASH組肝臟膠原面積百分比較正常對(duì)照組明顯升高 .Plt;0.05） ，而 ΔNASH+RA 組膠原面積百分比較NASH組無(wú)明顯下降 （Pgt;0.05） 。 NASH+RA 組較NASH組PPAR- ?γ 、FGF21、SIRT1蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高（ 值均 lt;0.05 ），而PREP蛋白相對(duì)表達(dá)量較NASH組明顯降低 （Plt;0.05） 。 ΔNASH+RA 組較NASH組PPAR- ?γ mRNA、FGF21mRNA、SIRT1mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高（ P 值均 lt;0.05 ），PREP 相對(duì)表達(dá)量較NASH組顯著下降（ Plt;0.05. ）。結(jié)論P(yáng)REP通過(guò)調(diào)控PPAR- γ -FGF21-SIRT1信號(hào)通路降低炎癥水平，改善小鼠NASH。

關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪性肝?。桓滨９央拿割?；小鼠，近交C57BL基金項(xiàng)目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金（2022D01A139）

Effectof prolylendopeptidase expressioninhibitionona mouse model ofnon-alcoholic steatohepatitisandits mechanism XIONG Jingping'，ZHANGYuexin

1.DepartmentofGastroenterology，TheSeventh AfliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830o28，China;

2.Infectious Disease CenterofThe FirstAfliated Hospitalof Xinjiang Medical University， Urumqi 83oo54，China

Corresponding author： XIONG Jingping，469993008@qq.com （ORCID： 0009-0005-0654-9920）

Abstract：ObjectiveTo investigatetheefectand possible mechanismof prolylendopeptidase（（PREP）onamouse modelof nonalcoholicsteatohepatitis（NASH）induced by high-fat diet.MethodsA totalof18 healthymale C57BL/6Jmice，aged 6-8 （204號(hào) weks，were randomlydivided into normalcontrol group，NASH group，and NASH+rosmarinic acid（RA）group，with 6 mice in each group.The micein thecontrolgroup werefedwith normaldietfor16 weeks，and those in theNASHgroupandtheNASH+RA group werefedwithhigh-fatdietfor16weeks;the miceintheNASH+RA groupweregiventhePREP inhibitorRAby gavag since week 9 at a dose of 100mg/kg ，once a day for 8 weeks.The mice were sacrificed after modeling and intervention，and each group of micewasbservedintersofseruminflammatoryindicators，theconcentratinoftriglycerideintheliver，andthechangesinliver lipids/inflammation/liverfibrosis；NAFLDactivityscore（NAS）wascalculated.Westeblotandquantitativereal-timePCRwere used to measure the proteinand mRNA expresion levels of PREP，peroxisome proliferator-activated receptor- γ （PPAR- γ ）， fibroblastgrowthfactor21（FGF21），andsilentinformationregulator1（SIT）inlivertisue.Aone-wayanalysisofvariancewas used forcomparisonof normalldistributed continuousdata betweenmultiple groups，while the least significant diffrence t -test and the Dunnett' s -T3 test were used for further comparison between two groups.The Kruskal-Wallis H test was used for comparison of non-normalydistributedcontinuousdatabetweenmultiple groupsandfurthercomparisonbetweentwo groups.ResultsCompared with theNASH group，theNASH+RA grouphadsignificantreductions intheserumlevelsof interleukin-6，tumornecrosisfactor α ， and triglyceride（all Plt;0.05 ），as well as significant improvements in hepatic steatosis，hepatocyte edema，inflammatory cell infiltration，andlivertissuelesion.TheNASH+RA group hadasignificantreductioninNAScompared withtheNASH group（ Plt; 0.05），and the NASH grouphadanincrease inperivascularcolagen fiber withocasionalfiberbridging，whiletheNASH+RA grouphadaslightreductioninperivascularcollgenfibercompared withtheNASH group.Comparedwiththe normalcontrol group， the NASH group had a significant increase in collagen area percentage in the liver （ Plt;0.05 ），while the NASH+RA group had no significantreductionincolagenareapercentagecompared withtheNASH group.Compared withtheNASHgroup，theNASH+RA group had significant increases in the relative protein expression levels of PPAR- γ ，F(xiàn)GF21，and SIRT1（all Plt;0.05 ）anda significant reduction in the relative protein expression level of PREP（ Plt;0.05 ）. Compared with the NASH group，the NASH+RA group had significant increases in the relative mRNA expression levels of PPAR- γ ，F(xiàn)GF21，and SIRT1（ Plt;0.05 ）and a significant reduction in the relative mRNA expression level of PREP （ Plt;0.05 ）.ConclusionPREP reduces the level of inflammation and improves NASH in mice by regulating the PPAR-γ/FGF21/SIRT1 signaling pathway.

Key Words：Non-alcoholic Fatty Liver Disease;Prolyl Oligopeptidases；Mice，Inbred C57BL

Research funding：Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region （2O22D01A139）

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）為肝臟脂質(zhì)沉積過(guò)多的一系列疾病，包括非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholicsteatohepatitis，NASH），常伴肥胖、代謝綜合征、糖尿病、心血管疾病、肝外惡性腫瘤等[14]。NAFLD是全球最常見(jiàn)的肝病之一，患病率約為 30% ，且逐年增加，其負(fù)擔(dān)在世界各地區(qū)迅速增長(zhǎng)[5]。NAFLD的亞型NASH是導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化、肝細(xì)胞癌的主要原因[67]。治療NAFLD藥物已逐漸用于臨床[8]，但選擇非常有限，有待進(jìn)一步明確NASH的發(fā)病機(jī)制，開(kāi)發(fā)更多的新藥。脯氨酰內(nèi)肽酶（prolylendopeptidase，PREP）為絲氨酸蛋白酶，可水解多種細(xì)胞因子、神經(jīng)活性肽及小肽類激素[9]，有研究報(bào)道NAFLD小鼠肝組織PREP基因表達(dá)升高，抑制或敲除PREP基因可顯著改善NAFLD小鼠的肝脂肪變性和炎癥反應(yīng)[10-11]。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PREP抑制后過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體- γ （peroxisomeproliferator activated receptor- γ ，PPAR- γ ）mRNA表達(dá)顯著降低，脂肪變性L02細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累顯著減少[12]。PPAR ?γ 可調(diào)控成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（fibroblastgrowth factor2，F(xiàn)GF21）表達(dá)[13]，F(xiàn)GF21可緩解NAFLD的炎癥，抑制肝纖維化[13-14]。FGF21通過(guò)轉(zhuǎn)錄沉默信息調(diào)節(jié)因子1（sirtuin1，SIRT1）通路抑制炎癥因子TNF- α_?∝ 和IL-6產(chǎn)生，改善高脂誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[15]。本研究通過(guò)高脂飲食建立NASH小鼠模型，用PREP抑制劑迷迭香酸（rosmarinicacid，RA）對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，探索抑制PREP表達(dá)后，如何調(diào)節(jié)PPAR- ?γ -FGF21-SIRT1通路，改善小鼠NASH的可能機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)C57BL/6雄性健康小鼠18只， 6～ 8周齡，體質(zhì)量 18～22g ，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（浙）2019-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK（浙）2021-0051。飼養(yǎng)于杭州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室溫度 （22±2）^°C ，相對(duì)濕度 60%～80% ，小鼠自由攝取水分和食物，晝夜節(jié)律。

1.2動(dòng)物分組與處理采用隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠分為3組：正常對(duì)照組（6只）NASH組（6只）及 ΔNASH+RA 組（6只）。正常對(duì)照組小鼠予16周的標(biāo)準(zhǔn)飲食喂養(yǎng)。NASH組小鼠予16周的高脂飼料（含有 60% 的脂肪供能，并額外添加了 1% 的膽固醇）（江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司提供）喂養(yǎng)。NASH+RA組小鼠予高脂飼料喂養(yǎng)

8周，第9周開(kāi)始高脂飼料喂養(yǎng)并加RA灌胃， 100mg/kg

1次/d，持續(xù)8周。

1.3小鼠血清炎癥因子水平檢測(cè)在造模完成后，隔夜禁食，于次日上午，摘眼球收集全血，分離血清。使用IL-6和TNF-試劑盒以ELISA法測(cè)定每組血清樣本中IL-6和TNF- α_?α 的含量。

1.4小鼠肝組織中TG濃度檢測(cè)收集各實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組織，準(zhǔn)確稱取組織質(zhì)量，按質(zhì)量 Π（g） ：體積 （mL）=1：9 的比例，加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，冰水浴條件下機(jī)械勻漿， .2500r/min ，離心 10min ，取上清液待測(cè)。使用生化試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組肝組織中TG濃度。

1.5HE染色觀察肝組織病理形態(tài)收集各組小鼠肝組織，用生理鹽水沖洗干凈血水后固定于 10% 中性福爾馬林中。包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織病理學(xué)改變。并依據(jù)是否有不同的病理表現(xiàn)和嚴(yán)重程度，采用NAFLD活動(dòng)度積分評(píng)分法（NAS）進(jìn)行評(píng)分。該評(píng)分系統(tǒng)包含三個(gè)組織學(xué)指標(biāo)：肝細(xì)胞脂肪變性（0～3分）小葉內(nèi)炎癥（0＼～3分）和肝細(xì)胞氣球樣變（0＼～2分）。當(dāng)NAS總分 ^??5 分時(shí)，即可診斷為NASH。

1.6油紅O染色觀察肝組織脂質(zhì)沉積用OCT包埋小鼠肝組織樣本，冰凍切片（厚度 8μm ，室溫回溫，蒸餾水浸洗。加入 60% 異丙醇浸洗 30s 。在密閉條件下加入新配制好的油紅O工作液浸染 10min 。加人 60% 異丙醇，使其分解至間質(zhì)清晰，接著使用蒸餾水對(duì)其進(jìn)行清洗。用蘇木素染色 2min ，然后用蒸餾水清洗，最后用甘油明膠密封，并使用顯微鏡進(jìn)行觀察和拍攝。

1.7Masson染色觀察肝組織纖維化收集各組小鼠肝組織，包埋，切片，烤片，脫蠟，水化，漂洗，Masson染色，封片，在光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片進(jìn)行觀察，評(píng)估膠原纖維比例。

1.8肝組織PREP、PPAR- γ FGF21和SIRT1蛋白表達(dá)檢測(cè)用RIPA裂解液提取肝臟樣本中的蛋白質(zhì)，BCA蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。蛋白裂解物用SDS-PAGE膠電泳分離，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。 5% 的脫脂奶粉（含有 5% 的溶劑）對(duì)轉(zhuǎn)移膜進(jìn)行1h的封閉處理，之后使用TBST進(jìn)行3次清洗，每次持續(xù) 5min 。加入鼠抗 β -actin1：510000（購(gòu)自北京義翹神州科技股份有限公司）兔抗小鼠FGF21抗體1：500（購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司），兔抗小鼠PREP1：400、兔抗小鼠PPAR- ?γ1：800 兔抗小鼠SIRT11：500的一抗（均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司），將其放置在 4^°C 的環(huán)境中孵化一晚，然后使用1×TBST進(jìn)行清洗，每次持續(xù) 5min ，總共漂洗3次。加入HRP標(biāo)記的二抗，于室溫下孵育1h后將 2mL 顯色液加至膜上，使用化學(xué)發(fā)光儀（Chemiscope3000，上海勤翔科學(xué)儀器有限公司）檢測(cè)、拍照。

1.9肝組織PREP、PPAR- γ 、FGF21和 SIRT1mRNA測(cè)定將組織在液氮包圍的情況下，研磨成粉，取 50mg 肝組織，應(yīng)用TRLZOL法提取肝組織總RNA，采用qRT-PCR將mRNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。經(jīng)熒光定量PCR擴(kuò)增，基因相對(duì)水平以RQ值 （2^-ΔΔCT） 表示，以GAPDH為內(nèi)參，計(jì)算PREP、PPAR- ?γ FGF21、SIRT1基因相對(duì)水平。引物由上海生工公司設(shè)計(jì)合成，PCR擴(kuò)增引物序列見(jiàn)表1。

1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用GraphPadPrism5.0進(jìn)行圖像繪制。正態(tài)分布的計(jì)量資料采用 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t（方差齊時(shí)）和Dunnett's-T3（方差不齊時(shí)）檢驗(yàn)。不滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料采用 M（P₂₅～P₇₅） 描述，多組間比較及進(jìn)一步兩兩比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組小鼠血清炎癥因子水平比較NASH組小鼠的血清IL-6、TNF- ??a 水平均顯著高于正常對(duì)照組（ P 值均lt;0.05） ; ΔNASH+RA 組小鼠血清IL-6、TNF- ??a 水平較NASH組顯著下降（ P 值均 lt;0.05 （表2）。

2.2三組小鼠肝組織中TG水平比較NASH組小鼠肝組織TG水平 2.045±0.395 ）mmol/L較正常對(duì)照組（ 0.798± 0.049）mmol/L顯著升高（ Plt;0.05 ）， ΔNASH+RA 組小鼠TG水平（ 1.003±0.088 ） mmol/L 較NASH組顯著降低（ Plt;0.05 ）。

2.3三組小鼠肝臟病理形態(tài)改變及NAS積分比較鏡下大體觀察，正常對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞形態(tài)良好，個(gè)別肝細(xì)胞輕度水腫；NASH組肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞出現(xiàn)大量脂肪空泡，部分區(qū)域脂肪變性嚴(yán)重，小葉內(nèi)較多炎細(xì)胞灶狀浸潤(rùn)，部分匯管區(qū)纖維組織增生；與NASH組比較， ΔNASH+RA 組肝組織脂肪變性明顯減輕，肝細(xì)胞水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肝組織病變明顯好轉(zhuǎn)（圖1）。NASH組NAS積分顯著升高，經(jīng)RA干預(yù)后，脂肪變性得到改善，NAS積分顯著下降（ Plt;0.05 （表3）。

2.4三組小鼠肝組織油紅O染色結(jié)果比較鏡下大體觀察，正常對(duì)照組肝組織內(nèi)脂滴的含量及分布面積均較??；與正常對(duì)照組比較，NASH組肝組織內(nèi)脂滴含量顯著升高，分布面積顯著增大； ΔNASH+RA 組與NASH組比較，肝組織內(nèi)脂滴含量及分布面積均顯著降低（圖2）。

2.5三組小鼠肝組織纖維化比較鏡下大體觀察，小鼠肝組織中膠原纖維染色為藍(lán)色，肝細(xì)胞染色為紅色。正常對(duì)照組小鼠肝組織中膠原纖維較少，僅在血管周?chē)倭砍练e；與正常對(duì)照組比較，NASH組小鼠肝臟部分細(xì)胞脂肪變性，血管周?chē)z原纖維增多，偶見(jiàn)纖維橋連；與NASH組比較， ΔNASH+RA 組脂肪變性程度、范圍減輕，血管周?chē)z原纖維稍減少（圖3）。NASH組肝臟膠原面積百分比（ 19.89%±2.47% ）較正常對(duì)照組（ 12.02%±1.79% ）有顯著升高（ ?-0.05 ）， ΔNASH+RA 組肝臟膠原面積百分比（ 17.32%±3.59% 較NASH組無(wú)顯著降低 。

2.6三組小鼠肝組織各蛋白的表達(dá)水平在NASH組中，PREP、PPAR- ?γ 和FGF21蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組顯著升高（ P 值均 lt;0.05 ），SIRT1蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組顯著下降 （Plt;0.05） ；而在NASH+RA組中，PREP的蛋白表達(dá)較NASH組顯著下降 Plt;0.05 ，SIRT1、PPAR ?γ 和FGF21的蛋白表達(dá)較NASH組明顯升高（ P 值均 lt;0.05 （表4，圖4）。

2.7三組小鼠肝組織中PREP、PPAR- γ SIRT1和FGF21mRNA測(cè)定結(jié)果在NASH組中，PREP、PPAR ?γ 和FGF21mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著升高（ ∣P∣ 值均 lt;0.05 ），而SIRT1mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著下降（ Plt; 0.05）。在 ΔNASH+RA 組中，PREPmRNA表達(dá)水平較NASH組顯著下降（ （Plt;0.05） ），PPAR ?γ FGF21、SIRT1mRNA表達(dá)水平明顯高于NASH組（ P 值均 lt;0.05 （表5）。

3討論

在遺傳易感基礎(chǔ)上，由脂質(zhì)代謝異常、脂毒性、細(xì)胞

因子及脂肪因子改變、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、線粒體功能障礙及腸道生態(tài)失調(diào)等因素共同作用導(dǎo)致NAFLD的“多重打擊理論\"逐漸被接受[16-19]。但NAFLD特別是NASH的具體發(fā)病機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。

PREP為700個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白，小鼠肝細(xì)胞脂肪變時(shí)PREPmRNA表達(dá)升高，使用丙戊酸鈉抑制PREPmRNA表達(dá)后，NAFLD小鼠肝臟的炎癥及脂肪變性得到了明顯改善[13]。本研究中，NASH小鼠肝組織中PREPmRNA及蛋白表達(dá)水平升高，RA干預(yù)NASH小鼠后PREPmRNA及蛋白表達(dá)降低，表明PREP可能參與NASH的發(fā)生發(fā)展。Zhou等[12]的體外研究顯示，PREP可影響與脂質(zhì)代謝密切相關(guān)的PPAR- ?γ 的表達(dá)。PPAR- ?γ 具有雙向調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用，可調(diào)控脂肪酸合酶、硬脂酰輔酶

A去飽和酶等脂肪合成基因的表達(dá)，促進(jìn)脂肪合成，同時(shí)可調(diào)控細(xì)胞脂肪型酸結(jié)合蛋白、脂肪酸轉(zhuǎn)移蛋白等脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)基因的表達(dá)，促進(jìn)脂肪酸的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)[20]。本研究中，NASH小鼠肝組織中PPAR- ?γ mRNA及蛋白表達(dá)水平升高，RA干預(yù)后進(jìn)一步升高，說(shuō)明可能PPAR- ?γ 表達(dá)水平升高促進(jìn)脂肪合成導(dǎo)致NASH，在RA干預(yù)下PPAR- ?γ 表達(dá)水平進(jìn)一步升高，促進(jìn)脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)改善 NASH_Ω 。FGF21能介導(dǎo)PPAR- γ 的生理作用[15]。Raptis等[21]研究結(jié)果顯示FGF-21在NAFLD早期上調(diào)，抑制脂質(zhì)在肝臟積聚并抑制炎癥反應(yīng)。如NAFLD持續(xù)存在，F(xiàn)GF-21的保護(hù)作用出現(xiàn)抵抗或耐受，活性下降。本研究中，NASH小鼠肝組織FGF21蛋白及mRNA表達(dá)水平顯著升高，RA干預(yù)后進(jìn)一步升高。NASH組小鼠FGF21蛋白及mRNA表達(dá)水平持續(xù)升高，可能是NAFLD持續(xù)存在不逆轉(zhuǎn)，F(xiàn)GF-21保護(hù)作用出現(xiàn)抵抗或耐受導(dǎo)致。RA干預(yù)后，小鼠肝組織FGF21蛋白及mRNA表達(dá)仍持續(xù)上調(diào)，可能經(jīng)RA干預(yù)，上述抵抗或耐受狀態(tài)消失，F(xiàn)GF-21的活性恢復(fù)，從而改善NASH。同時(shí)，F(xiàn)GF21可增加SIRT1以及過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體- ?γ 輔激活因子 .1α（PGC-1α） ）的基因表達(dá)，改善線粒體功能和高脂誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞脂肪堆積，減少細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥因子釋放[15]。有研究結(jié)果顯示，SIRT1表達(dá)升高可抑制炎癥反應(yīng)，改善NAFLD進(jìn)展[22]。持續(xù)的慢性炎癥在NASH進(jìn)展過(guò)程中處于核心地位[23-24]。IL-6和TNF- σ?α?α?α?α 在NASH進(jìn)展過(guò)程中起促炎作用。本研究中，NASH小鼠較正常對(duì)照組小鼠肝組織中SIRT1蛋白及mRNA表達(dá)水平降低，血清中炎癥因子IL-6、TNF- σ?α?α?α?α 水平升高。肝臟NAS積分明顯升高，肝臟明顯脂肪變、小葉內(nèi)炎癥變化明顯，肝組織內(nèi)脂滴含量顯著升高，分布面積顯著增大；血管周?chē)w維組織增多，偶見(jiàn)纖維橋連。而RA干預(yù)NASH小鼠后，SIRT1蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯升高，血清IL-6和TNF- α?α∝ 水平，以及NAS積分都有了顯著的下降。同時(shí)，肝臟的脂肪變性明顯緩解，脂肪細(xì)胞的數(shù)量和覆蓋范圍明顯減少。肝組織內(nèi)脂滴含量及分布面積均顯著降低。而小葉內(nèi)的炎癥緩解不明顯，血管及周?chē)w維組織稍減少。說(shuō)明FGF21可增加SIRT1表達(dá)，抑制IL-6、TNF- α_?∝ 的促炎作用，改善NASH，但對(duì)改善小鼠肝纖維化作用不明顯。

綜上所述，RA通過(guò)抑制PREP蛋白及 ，影響PPAR- γ FGF21、SIRT1蛋白及mRNA表達(dá)，下調(diào)炎癥因子，抑制NASH小鼠肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)、緩解NASH肝臟的脂肪變性，顯著下調(diào)NAS積分；而對(duì)NASH小鼠肝纖維化改善并不明顯。由此可見(jiàn)，抑制PREP表達(dá)，可調(diào)控PPAR- γ -FGF21-SIRT1通路，改善小鼠脂肪性肝炎。

倫理學(xué)聲明：本研究方案于2021年10月15日經(jīng)由新疆醫(yī)科大學(xué)第七附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，批號(hào)：20211015-03，符合實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物管理與使用準(zhǔn)則。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：熊靜平負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)論文框架，起草和修改論文；張躍新負(fù)責(zé)修改論文。

參考文獻(xiàn)：

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收稿日期：2024-11-19：錄用日期：2025-03-03本文編輯：朱晶

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