無花果寄生線蟲鑒定和綜合防控技術(shù)研究

無花果（FicuscaricaLinn.）果實營養(yǎng)豐富，藥食兩用，生長周期短、盛果期長、多次結(jié)果，宜食宜加工，經(jīng)濟效益高。在庭院栽植普遍，新疆、福建、山東、江蘇等省區(qū)集中栽培面積大，是鄉(xiāng)村振興的重要經(jīng)濟綠化樹種。近年來無花果黃化衰退問題突出，與植物寄生線蟲關(guān)聯(lián)度高。線蟲廣泛存在于自然界水體、土壤、人和動植物體內(nèi)，植物寄生線蟲有200多屬5000多種，以根結(jié)線蟲、胞囊線蟲、滑刃線蟲、莖線蟲、粗線蟲、短體線蟲等屬危害嚴(yán)重。FAO估計全球因線蟲危害對果蔬等造成損失占到 20% 以上，每年損失1000億美元以上。無花果寄生線蟲主要侵染植株根部，并與真菌、細(xì)菌、病毒等形成復(fù)合侵染，在根周圍積累危害，致使樹體變矮、葉片失綠黃化、生長衰弱，影響果實品質(zhì)和產(chǎn)量，甚者造成樹體死亡。

1無花果線蟲發(fā)生危害地域

福建無花果根結(jié)線蟲病發(fā)生普遍，受害無花果主根、側(cè)根根結(jié)嚴(yán)重，造成根系腐爛，地上部分矮化、黃化，產(chǎn)量下降。江蘇地區(qū)發(fā)生的南方根結(jié)線蟲多發(fā)生于無花果幼苗、成年植株，根系結(jié)化明顯，地上部生勢衰弱，葉片黃化脫落，結(jié)實率低2。無花果胞囊線蟲能引起無花果生長遲緩，葉片發(fā)黃，在土壤蟲密度64條 /cm³ 以上時，樹死亡率 100%

從現(xiàn)有文獻來看，江蘇省南京、句容、如東、海門、泗洪、宿遷等地以南方根結(jié)線蟲發(fā)生廣泛，發(fā)生頻次 14%～16%^[2] 。新疆維吾爾自治區(qū)昆玉市皮山農(nóng)場224團、田玉龍喀什鎮(zhèn)4等地普遍發(fā)生。目前上海5、青島等地海關(guān)進口檢疫的無花果及其產(chǎn)品中也有截獲發(fā)現(xiàn)。

2無花果線蟲種類

目前無花果樹線蟲有小桿目、矛線目等2目，異皮科、長針科、墊刃科、真滑刀線蟲科、紐帶科、短體科、端墊科、腎線蟲科等8科，孢囊屬、劍線蟲屬、根結(jié)線蟲屬、默林屬、絲尾墊刃屬、真滑刀線蟲屬、螺旋屬、短體屬、矮化屬、腎狀屬等10屬，計17種。

2.1 國內(nèi)發(fā)現(xiàn)

江蘇6個無花果產(chǎn)區(qū)發(fā)現(xiàn)南方根結(jié)線蟲和咖啡短體線蟲是主體，二者兩次發(fā)病高峰在5＼～6月、10～11月，與無花果新根發(fā)生期和溫度的季節(jié)變化規(guī)律相關(guān)2

不同地域發(fā)現(xiàn)的線蟲種類不同。在新疆南疆皮山農(nóng)場、224團、和田玉龍喀什鎮(zhèn)3地，黨金歡等4調(diào)查發(fā)現(xiàn)了南方根結(jié)線蟲、北方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲、爪哇根結(jié)線蟲、摩洛哥根結(jié)線蟲5種，其中在224團發(fā)現(xiàn)南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲、摩洛哥根結(jié)線蟲3種，在皮山農(nóng)場、和田玉龍喀什鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲的混合種群，三地優(yōu)勢種均是南方根結(jié)線蟲。

朱玲在福建調(diào)查發(fā)現(xiàn)了南方根結(jié)線蟲、雙宮螺旋線蟲、腎形腎狀線蟲、咖啡短體線蟲、飾環(huán)矮化線蟲、湖南劍線蟲、燕麥真滑刃線蟲等7種，其中南方根結(jié)線蟲在福建首次發(fā)現(xiàn)，雙宮螺旋線蟲、飾環(huán)矮化線蟲、腎形腎狀線蟲、湖南劍線蟲系國內(nèi)在無花果上第1次報道，優(yōu)勢種群雙宮螺旋線蟲分離頻率為 48.1%

不同地區(qū)無花果樹根際土壤線蟲群落存在多樣性差異性。新疆無花果樹根際土壤中真滑刃屬是優(yōu)勢屬，燕麥真滑刃線蟲是優(yōu)勢種，絲尾墊刃屬、根結(jié)屬、螺旋屬常見，居中屬稀見，并常用均勻度指數(shù)、豐富度指數(shù)、多樣性指數(shù)、成熟度指數(shù)來評價無花果線蟲群落多樣性。

2.2海關(guān)截獲

目前從上海、青島2地海關(guān)發(fā)現(xiàn)了無花果線蟲。其中上?？诎督孬@的是孢囊線蟲屬無花果孢囊線蟲2齡幼蟲。青島海關(guān)技術(shù)中心2023年5月，從日本郵寄進境無花果種苗中首次截獲了短頸劍線蟲，該線蟲能與巴西種群、新西蘭種群、比利時種群、南非種群聚類、5個日本種群聚類成一個獨立分支，還能危害羅漢松、雞蛋花、秋楓、大葉相思、棕櫚等植物

3不同種的無花果線蟲形態(tài)特征

3.1南方根結(jié)線蟲

墊刃目異皮科根結(jié)線蟲屬。雌蟲口針向背部彎曲， 針錐前半部圓柱狀，后半部圓錐狀，針干后部略寬； 口針長為 15～17μm ，基部球與針干結(jié)合處縊縮，前 部鋸齒狀，橫向伸長。會陰花紋呈橢圓形，弓高不規(guī) 則，背紋緊密呈波浪狀，弓內(nèi)部肛門附近彎曲的細(xì)胞 有細(xì)碎花紋，側(cè)線外的線紋有分叉。

雄蟲唇盤圓、大，比中唇高，側(cè)面看唇盤凹至平，頭冠部高；頭區(qū)環(huán)紋多2～3個，不完全，有的平滑；頭區(qū)與蟲體縮不明顯；口針長 23～25μm ，口針在基部球至背食道腺處開口，距離為 2～4μm ；基部球大，圓形至卵圓形，有時前部鋸齒狀，與針干接合處縮。

3.2北方根結(jié)線蟲

墊刃目異皮科根結(jié)線蟲屬。雌蟲體長 420～ 740μm ，寬 390～550μm ，口針長 15μm ；會陰花紋總體呈圓的六角線或偏平的卵圓形，背面和腹面的線條交會呈角狀，線條平滑或略呈波狀，背弓低，圓形，無側(cè)脊，尾端區(qū)平滑，上有刻點。雄蟲頭區(qū)有明顯的體環(huán)；雌蟲頭區(qū)無體環(huán)，頭冠高而窄。

3.3花生根結(jié)線蟲

墊刃目異皮科根結(jié)線蟲屬。卵腎形，黑褐色，兩端寬而圓，分單細(xì)胞、雙細(xì)胞、桑椹、仔蟲等發(fā)育期。幼蟲5齡，1齡位于卵殼內(nèi)，出殼后即為2齡幼蟲，呈線形無色透明，體長 366.4μm ，寬 15.5μm ；口針長 12.5～15.6μm ，口針基部到食道開口距離 2～5μm 經(jīng)4次蛻皮即成為成蟲。

雌成蟲體形早期似酒瓶，后期似洋梨或桃，乳白色。會陰弓低，排泄孔后方橫紋近似直線形，側(cè)面、陰門周圍的線紋略呈方形，側(cè)紋橫線或翼短而不規(guī)則，近尾端處無刻點[。

雄成蟲體蠕蟲狀，無色透明，頭尖圓，有棍棒狀交合刺1對，體長1351（1060～1550） μm ，寬35（28～40）μm ，引帶長 8μm 。

3.4爪哇根結(jié)線蟲

墊刃目異皮科根結(jié)線蟲屬。雌蟲梨形，長595μm ，幼蟲熱殺后略向腹面彎曲，側(cè)帶有4條溝紋，近尾處縮1＼～2道，尾端鈍圓；會陰弓低，有的高而窄，背部花紋不能延伸到腹面，被側(cè)線外的溝紋隔開，腹面線紋比較平滑，排泄孔在離頭2.5倍口針處或略后；雄蟲體長 1099μm ，口針長 20μm ，唇區(qū)高，無環(huán)紋，側(cè)節(jié)有溝紋4條[]。

3.5無花果孢囊線蟲

墊刃目異皮科孢囊線蟲屬。2齡蟲體長 409.9～ 454.4μm ；唇環(huán)3個；口針發(fā)達(dá)，長 22.6～24.0μm ， 基部球圓形略向前傾斜；體側(cè)線4條，尾長圓錐形， 尾部透明區(qū)段長 24.7～30.5μm ，約占尾長 1/2^[12] 。

3.6燕麥真滑刃線蟲

墊刃目真滑刃線蟲科真滑刃線蟲屬。雌蟲蟲體圓柱狀，加熱殺死后稍向腹面彎曲，兩端漸細(xì)；頭端鈍圓或扁平，無縊縮，具3～4個頭環(huán)；角質(zhì)膜環(huán)紋細(xì)，側(cè)帶上側(cè)線10條極不明顯；背食道腺在中食道球內(nèi)開口，食道腺在背面覆蓋腸；卵巢長，向前伸到近食道腺末端與腸交接處；尾較短，是體寬的1.5～2.5倍，末端呈半圓或?qū)拡A形；未見雄蟲[3]。

3.7短齒默林線蟲

墊刃目端墊刃科默林屬。雌蟲熱殺死后蟲體直或 略向腹面彎曲，頭區(qū)連續(xù)或稍縊縮，環(huán)紋6條，放射 狀隔斷，唇盤六角形；葉針小于 20μm ；頸部乳突明 顯，側(cè)線6條；中食道在食道中部或稍靠前；尾圓錐 形或亞圓柱形，末端表皮厚但不規(guī)則；雄蟲交合刺圓 柱形，直或稍彎曲，末端鈍或凹陷，引帶側(cè)看新月形8。

3.8 普通絲尾墊刃線蟲

墊刃目墊刃科絲尾墊刃屬。雌蟲蟲體小，熱殺死后稍向腹面彎曲；體表環(huán)紋細(xì)，頭部連續(xù)，前端平圓；口針纖細(xì)，有小的基部球；食道腺呈梨形，與腸平截;排泄孔在食道腺前端水平處；單生殖管前伸，卵原細(xì)胞單行排列；陰門在蟲體中后部，橫裂；尾均勻變細(xì)，末端絲狀，尾長是陰肛距的1＼～1.5倍。

3.9雙宮螺旋線蟲

墊刃目紐帶科螺旋屬。雌蟲加熱殺死后螺旋狀，體環(huán)明顯；唇區(qū)半球形；口針發(fā)達(dá)，基部球明顯；背食道腺在口針基部球后 7.5～10.0μm 處開口，排泄孔在食道腺與腸交界的前端，食道腺覆蓋在腸的腹面；雙生殖腺對伸，后生殖腺退化成后陰子宮囊較短；尾圓錐形，向腹面彎曲，腹末有小的腹尾突。

3.10 咖啡短體線蟲

墊刃目墊刃亞目短體科短體屬。雌蟲熱殺死后僵直或稍向腹面彎曲，體環(huán)明顯，中部體環(huán)寬 0.8～1.2 μm ；側(cè)區(qū)約占體寬的1/3，蟲體中部側(cè)區(qū)4條側(cè)線；唇區(qū)低，稍縊縮，前緣平，2個唇環(huán)，頂端唇環(huán)與第2條唇環(huán)寬度幾乎相等，口針發(fā)達(dá)；中食道球卵圓形、發(fā)達(dá)，食道腺在腹面和側(cè)面覆蓋腸的前端，覆蓋長度是體寬的1.2＼～2.3倍；雄蟲與雌蟲基本相似，交合刺纖細(xì)、成對，長約 20μm ，引帶長 4μm ，交合傘包至尾端，尾較尖13]。

3.11 飾環(huán)矮化線蟲

墊刃目端墊科矮化屬。雌蟲加熱殺死后朝腹面彎曲呈C形，唇區(qū)稍縮，有3個明顯體環(huán)；口針發(fā)達(dá)，口針基部球?qū)拡A；背食道腺在口針基部球后2.0＼～2.5μm 處開口；中食道球卵圓形，瓣膜明顯；后食道腺長梨形，與腸平接；雙卵巢對伸，卵原細(xì)胞單行排列，未見受精囊；陰門橫裂，陰道長是體寬的1/2；尾長約是肛門處體寬的3倍，尾部近圓柱形，末端鈍圓或平截，無環(huán)紋。

3.12 腎形腎狀線蟲

墊刃目腎狀線蟲亞科腎狀屬。成熟雌蟲蟲體向腹部彎曲、膨大呈腎形；頸區(qū)彎曲、不規(guī)則膨大；陰門位于蟲體中后部，凸起，雙卵巢；受精囊圓形或不規(guī)則；肛門部半球形，末端尾突明顯；卵橢圓形；雄蟲蠕蟲形，熱殺死后呈C形或?qū)扖形；食道、口針和食道腺退化，口針長 11.9～14.5μm ，中食道球模糊不清，無明顯瓣膜；尾部長圓錐形，交合刺伸出體外，長19.3＼～24.8μm，交合傘退化，未完全包蓋尾端14

3.13 湖南劍線蟲

矛線目長針科劍線蟲屬。在廣東雀梅、上海茶梅根圍僅發(fā)現(xiàn)了雌蟲，熱殺后呈L、C型，最明顯的彎曲在體后1/3處。角質(zhì)膜在蟲體大部分區(qū)域分化2個主要層，尾端角質(zhì)膜明顯厚。體孔明顯，唇區(qū)微縮，寬 10～12μm ，前端寬圓形。側(cè)氣孔幾乎與唇區(qū)等寬。口針細(xì)長，基部球形。陰門極靠前，陰道長約半個陰門處體寬，末端向后傾斜；前生殖管完全退化，后生殖管發(fā)育完全；卵巢單或雙，細(xì)長，回折。子宮長而寬，內(nèi)無特殊分化結(jié)構(gòu)，末端與輸卵管邊接處略微膨大；尾錐形，末端指狀突起物較長，約 13.8～25.4μm 每側(cè)尾孔1＼～3個[15]。

3.14 短頸劍線蟲

矛線目長針科劍線蟲屬。該蟲以無花果作為自然寄主，也有報道寄生于人體內(nèi)；蟲體中等，受熱死后向腹面彎曲呈開螺旋C形，體長 1713.4～ 1910.2μm ，最大體寬 35.8～47.1μm ，兩端漸細(xì)；唇區(qū)圓，縊縮明顯，側(cè)氣囊漏斗狀；齒托基部呈凸緣狀，齒尖針約為齒托長的1.5倍；雙導(dǎo)環(huán)；陰門橫裂，在蟲體中部，陰道長度約是陰門處體寬1/3左右；生殖管較短、對生，發(fā)育完全，卵巢先端回折，子宮內(nèi)無特殊分化；尾短圓錐形，背面彎曲，腹面直，尾尖鈍圓，尾長 24.0～29.5μm ，不短于肛門處體寬。

4線蟲鑒定技術(shù)

無花果線蟲種的鑒定是開展線蟲相關(guān)研究的基礎(chǔ)線蟲鑒別方法歷經(jīng)200多年，總體由傳統(tǒng)形態(tài)研究到分子研究階段，再到二者結(jié)合階段。傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)研究包括形態(tài)學(xué)法、鑒別寄主實驗法、同工酶表達(dá)分析法、細(xì)胞遺傳學(xué)法等一整套的技術(shù)手段。傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定是受到線蟲種內(nèi)變異較大而應(yīng)用的鑒定技術(shù)；同工酶法鑒定比較快速、準(zhǔn)確，但僅適于成熟雌蟲態(tài)，不能鑒定到小種。

4.1形態(tài)學(xué)鑒定

適用的蟲態(tài)有雌蟲、雄蟲、2齡幼蟲。在光學(xué)顯微鏡或掃描電鏡下觀察，一般把蟲體后端的會陰花紋和2齡幼蟲尾部形態(tài)、長度及透明尾長作為鑒定的特征。該方法能直接觀察到線蟲的形態(tài)，但鑒定分類準(zhǔn)確性受到線蟲種內(nèi)變異影響和操作技術(shù)熟練程度影響

4.2寄主表癥鑒別

以煙草、棉花、辣椒、西瓜、花生等為鑒別寄主，通過觀察寄主的病態(tài)表癥，應(yīng)用北卡羅來納小種鑒別法，進行間接觀察，能將南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲分為4個、2個小種。但受到作物種類及栽培技術(shù)的影響和鑒定經(jīng)驗積累的限制，雖然能鑒定到小種，但只適于個別線蟲，不能廣泛應(yīng)用線蟲鑒定分類。

4.3 同工酶分析

前人研究表明，脂酶在區(qū)分南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲等4種常種時最具特異性，成功案例是應(yīng)用薄層聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，對65個國家16種根結(jié)線蟲及291個未鑒定過的種進行酶的表型研究。該方法是依據(jù)線蟲體內(nèi)酶類的表型特征，比較快速、準(zhǔn)確，但容易受到線蟲發(fā)育階段等影響，僅適于成熟雌蟲態(tài)，且不能鑒定到小種。

4.4細(xì)胞遺傳法

國際線蟲協(xié)會以根結(jié)線蟲的生殖方式、細(xì)胞染色體（DNA）數(shù)目作為鑒別分類的重要分類依據(jù)。但該方法所需設(shè)備特殊、操作技術(shù)復(fù)雜，沒得到廣泛應(yīng)用。

4.5分子生物學(xué)法

隨著現(xiàn)代分子生學(xué)發(fā)展，從DNA分子水平表達(dá)產(chǎn)物對線蟲進行分類鑒定得到廣泛應(yīng)用。

傳統(tǒng)DNA克隆技術(shù)。 ① RFLP法。即限制性長度多態(tài)性分析，通過分析DNA限制性片段長度的差異來分析基因的表型，分多拷貝核基因組、單拷貝核DNA、mtDNA等技術(shù)。 ②DNA 探針。任何生物中皆用DNA序列區(qū)別于其他物種，?；结樖氰b定線蟲最為可靠的方法。首先建立目標(biāo)線蟲的基因組文庫；其次用限制性內(nèi)切酶切割另一相關(guān)線蟲的基因組DNA并進行標(biāo)記；然后掃描目標(biāo)線蟲基因組文庫，獲得目標(biāo)線蟲?；孕蛄校蛔詈笥煤Y選出的打點雜交與親緣關(guān)系較遠(yuǎn)物種的基因組DNA雜交驗證其?；浴?/p>

PCR技術(shù)。KerryMullis1985年發(fā)明了PCR技術(shù)，廣泛應(yīng)用于線蟲鑒定，常用模板有rDNA、mtDNA。該技術(shù)以DNA粗提物為模板，靈敏度高，擴增量大，操作簡單，解決了RFLP有時受到獲得DNA量限制、DNA探針使用同位素不方便的問題。

ITS-PCR。真核生物rDNA在基因組內(nèi)以串聯(lián)重復(fù)序列排列，包括18srDNA、5.8srDNA、28srDNA等3個編碼區(qū)、2個內(nèi)源轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）。1990年Gdnzalea提出并應(yīng)用ITS-PCR標(biāo)記技術(shù)鑒定了美洲劍線蟲16個種及種內(nèi)群體、莖線蟲屬、胞囊線蟲屬、傘滑線蟲屬等，但現(xiàn)有實驗表明該技術(shù)不適用M.incognita、M.javanica、M.arenaria3種線蟲分類鑒定。該方法對于兩性生殖線蟲鑒定有效，但對于多起源性、行孤雌生殖的南方、爪哇、花生根結(jié)線蟲不適用。

MtDNA-PCR-RFLP技術(shù)。同一物種中核外小型基因組mtDNA進化速度快于單拷貝的核基因組10＼～100倍，其積累的DNA序列多樣性可用于線蟲種類的分子標(biāo)記。MtDNA-PCR-RFLP已應(yīng)用于爪哇根結(jié)線蟲、M.incognita、M.javanica、M.arenaria、M.hapla、M.chitwoodi及常見線蟲分類鑒定。該方法靈敏度高，單條2齡幼蟲時也能診斷，但耗時較長。

RAPD技術(shù)。即在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上的隨機擴增多態(tài)性DNA技術(shù)，1990年由Williams等和Welsh發(fā)明。其以一系列不同的隨機排列的寡核苷酸作為引物，對所研究物種的DNA進行PCR擴增，并對其進行聚丙烯酰胺或瓊脂凝膠分析，再用ED染色，用PCR分析其區(qū)域多態(tài)性。

SCAR 技術(shù)。在RAPD的基礎(chǔ)上，1993年P(guān)aran、Michelmore首次設(shè)計并擴增出特異引物SCAR，長度長，退火溫度高，穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性高。目前SCAR技術(shù)已準(zhǔn)確鑒定了M.incognita、M.javanica、M.arenaria、M.hapla.、M.exiguc、M.paranaensis.等線蟲。

LAMP技術(shù)。即環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)，在等溫條件下，通過四條引物特異性識別了靶基因的6個區(qū)域，反應(yīng)不需要借助任何專業(yè)設(shè)備及繁瑣的程序，實現(xiàn)了可視化檢測，且結(jié)果清晰明確，被廣泛應(yīng)用于病原物、食品安全和環(huán)境衛(wèi)生的檢測中。LAMP靈敏度是常規(guī)PCR的100倍，精確、簡便、低成本。若在LAMP反應(yīng)產(chǎn)物滴加SYBRGreenI核酸染料，可用眼睛直接觀察或LFD試紙直觀判斷，適宜在田間應(yīng)用

5線蟲入侵寄主機制

植物病原線蟲多數(shù)是土傳病原物，寄主范圍較廣，在土壤中完成越冬和侵染，生活史長。水、風(fēng)、土壤、農(nóng)具是傳播媒介。按其取食機制，植物寄生線蟲分為遷移性外寄生、內(nèi)寄生、定居性內(nèi)寄生，蟲態(tài)有卵期、幼蟲期和成蟲期。2齡幼蟲能識別寄主根系分泌的物質(zhì)以此定位、侵入寄主，揮發(fā)性物質(zhì)引導(dǎo)線蟲的化學(xué)趨向和移動方向來定位寄主根部，以水溶性信號引導(dǎo)線蟲選擇侵入寄主根部位置8]

5.1根結(jié)線蟲

目前對根結(jié)線蟲侵入機制研究較多。在根瘤中，線蟲吸取營養(yǎng)，造成寄主根系發(fā)生阻滯、腐爛，地上部衰弱枯死，以溫暖的江南、華北地區(qū)危害嚴(yán)重。其幼蟲細(xì)小蠕蟲狀；雌蟲梨形，雄蟲線狀。2齡幼蟲是侵染蟲態(tài)，能在土壤孔隙中遷移，以頭部敏感的化感器尋找寄主根，用口針刺破寄主根系伸長區(qū)，在細(xì)胞間隙穿行，先向根尖移動到根的分生組織，后又折回向維管束方向移動，到達(dá)木質(zhì)部，食道腺體分泌生長素、酶等誘導(dǎo)寄主細(xì)胞過度增殖、生長、膨大而特化成巨型細(xì)胞，形成根瘤癥狀。根瘤內(nèi)的2齡幼蟲經(jīng)3次蛻皮化為成蟲，雄蟲脫離寄主根部；雌蟲仍在根部發(fā)育28d左右產(chǎn)卵， 10C 在根瘤內(nèi)孵化，2齡后脫離原寄主進入土壤，隨水流等再次侵染[19]

5.2胞囊線蟲

在植物根外固著寄生，以2齡幼蟲侵染到根內(nèi)的維管束中柱取食，刺激取食點及其周圍細(xì)胞形成合胞體，歷經(jīng)3次蛻皮后蟲體膨大發(fā)育為成蟲；雄成蟲進入王壤尋找雌成蟲交配后死亡；雌成蟲繼續(xù)定居原處危害，歷經(jīng)孕卵、蟲體快速膨大，撐破寄主根表皮露出，但前端狹窄的頸部仍留在根內(nèi)，發(fā)育老熟后體壁加厚、變?yōu)榘?，成為來年侵染源?/p>

5.3滑刃線蟲

此類線蟲多數(shù)自由生活，棲居于土壤、腐爛的植物材料和甲蟲鉆孔道里，常危害寄主的幼芽、葉片、莖、樹干和種子等部位，導(dǎo)致幼芽扭曲、畸形、變色、葉片形成枯斑、葉尖干枯，可造成寄主整體迅速枯死。

6綜合防控

采用“預(yù)防為主，綜合防治”“治未病”方略，線蟲綜合防控主要從農(nóng)藝措施、化學(xué)防控、生物防控、檢疫檢查、基因工程等5個方面進行。

6.1農(nóng)藝措施

主要通過作物輪作、耕翻、選用無線或抗線蟲品種（苗）等。強還原土壤處理（RSD），處理過程中產(chǎn)生的有機酸能夠有效抑制土壤中的植食性線蟲2

在設(shè)施栽培條件下，用雞糞 + 灌水 .+ 覆膜 高溫悶棚處理防治根結(jié)線蟲病防效達(dá) 80% ，但150d后防效減弱近半，也消滅土壤中的有益生物，破壞了土壤團粒結(jié)構(gòu)及生態(tài)系統(tǒng)，費時費力2。調(diào)節(jié)土壤中C/N比，利用含氮物質(zhì)氨化作用也可熏殺線蟲。

施用植物綠肥產(chǎn)生的次級代放產(chǎn)物可殺死線蟲。如施用甲殼素肥料、糞肥、動植物殘體、綠肥等，可改善土壤團粒結(jié)構(gòu)，增強保水保肥能力，促進寄主根系生長，提高自身抗線能力。同時其分解產(chǎn)生殺線物質(zhì)對線蟲抑制率 50% 。實驗證明，煙草廢棄物堆肥可有效緩解根結(jié)線蟲的危害22]。

6.2 化學(xué)防控

在線蟲防控中，早期最成功的藥劑是甲基溴，但由于其對臭氧破壞作用現(xiàn)已禁正使用。神經(jīng)毒劑阿維菌素是經(jīng)登記常用的殺線劑，氯化苦、棉隆等對根結(jié)線蟲也有毒殺作用。田間試驗表明，阿維菌素 ⁺ 氯化苦、阿維菌素 + 棉隆都對根結(jié)線蟲控制作用較好。方法是用阿維菌素稀釋液噴施土壤，植株再注射氯化苦原液或撒施棉隆微粒劑，再旋耕土壤，最后覆膜熏蒸23]

早春土壤株施 41.7% 氟吡菌酰胺 SC0.5mL 防效達(dá) 88.9%^[1] 。氟吡酰胺、阿維菌素按1：5比例混合后防治線蟲效果明顯24。每 666.7m² 施用 25mL 氟吡菌酰胺對北方根結(jié)線蟲防治效果 36.82%^[25] 。

美國研制的Agri-Terra防線劑，在離體條件下對南方根結(jié)線蟲相對抑制率最高達(dá) 93.6% ，對2齡幼蟲校正死亡率達(dá) 98.9% ，高效、低毒、無污染、持效性長、對環(huán)境友好2。但過度施用化學(xué)農(nóng)藥易產(chǎn)生環(huán)境污染、食品安全、土壤退化、生態(tài)失衡等問題。

6.3生物防控

生物防控是利用生物或生物的代謝產(chǎn)物防控害蟲的方法。在線蟲防控中主要應(yīng)用的是以菌治蟲，利用內(nèi)生菌直接攻擊、資源競爭、代謝物肋迫、防御機制激活等方式來控制植物線蟲。

6.3.1放線菌放線菌是根結(jié)線蟲防治的菌源，主要通過其分泌酶作用于線蟲的卵或蟲體，發(fā)酵產(chǎn)生殺蟲活性的代謝產(chǎn)物和揮發(fā)性物質(zhì)，調(diào)節(jié)根區(qū)微生物區(qū)系，誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生免疫防御反應(yīng)來防治線蟲2。試驗表明，施用濃度 3.0g/m² 的淡紫擬青霉、 6.0g/m² 的哈茨木霉防效 89.5% ，略高于化學(xué)藥劑氟烯線礬，生物防治首選淡紫擬青霉藥劑4。長枝木霉TL16對北方根結(jié)線蟲卵囊、卵孵化抑制作用和J2致死作用較好[28]。

6.3.2細(xì)菌在中國堅強芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌已登記用于防治根結(jié)線蟲病。耐鹽芽孢桿菌、芽孢桿菌、海泥芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、東洋芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、銅綠假單胞菌和假蕈狀芽孢桿菌具有中等以上殺蟲活性29]。

芽孢桿菌AMCC100018對南方根結(jié)線蟲的生防高效，殺蟲活性穩(wěn)定3。堅強芽胞桿菌菌株YB-1503發(fā)酵濾液降低南方根結(jié)線蟲的過氧化氫酶、羧酸脂酶和乙酰膽堿脂酶的活性、抗氧化能力，增加線蟲活性氧含量，引發(fā)線蟲死亡3]。解淀粉芽孢桿菌HJO3、沙福芽孢桿菌HJ04、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌HJ07抑制南方根結(jié)線蟲卵孵化、2齡幼蟲尋找固定、侵入寄主、根結(jié)和卵塊形成、鐮刀菌復(fù)合病害癥狀等效果良好，還能促進植株生長、抵抗高溫、紫外線等不良環(huán)境條件[32]。易江慧篩選的 H₁₄ L_16^° G_zs 對南方根結(jié)線蟲2齡幼蟲校正死亡率 93.28% / 90.55% 、 91.59% ，對卵囊乳化的相對抑制率 85.62% / 80.82% 、 81.80% ，但對基礎(chǔ)機理研究沒有研究。

6.3.3食線真菌自然界中食線真菌分為捕食性、內(nèi)寄生性、產(chǎn)毒性、機會性等4類，少孢節(jié)叢孢分布較為廣泛。它們在土壤中營腐生生活，受到線蟲的誘導(dǎo)后會產(chǎn)生特異化的捕線器官-三維粘菌網(wǎng)，能刺透線蟲體壁并將蟲體吸收，防治線蟲效果安全、高效、低毒。捕食性真菌分為叢孢屬、單頂孢屬、小掘氏孢屬，依靠其菌絲特化或分生孢子生長出的捕食器捕食。周亮等34利用基因編輯技術(shù)研制了自發(fā)產(chǎn)生捕食器官的表現(xiàn)型。內(nèi)寄生性菌物包括卵菌門、壺菌門、接合菌門、子囊菌門、半知菌門擔(dān)子菌門，依其侵染方式分為成囊孢子菌物、粘性孢子菌物、吞噬孢子菌物、注射孢子菌物，可以侵染線蟲各蟲態(tài)，以分泌產(chǎn)生胞外酶消解線蟲表皮并侵入體內(nèi)。產(chǎn)毒性菌包括層菌綱、盤菌綱、腔菌綱、核菌綱、不整囊菌綱、絲孢菌綱、腔孢綱，通過分泌毒素或某些裂解酶類物質(zhì)殺死線蟲或抑制線蟲活性。機會性菌在一定條件下，寄生于線蟲雌蟲、卵或定殖于線蟲孢囊、卵囊的土壤真菌，分為專性和兼性寄生菌物35]。

6.3.4植物源藥劑目前已知有57種植物富含殺線的次級代謝產(chǎn)物。如曼陀羅可產(chǎn)生東茛蓉堿等生物堿，十字花科部分植物能產(chǎn)生葡萄糖異硫的氰酸鹽化合物萬壽菊屬植物能產(chǎn)生三聯(lián)噻吩等殺線的物質(zhì)。菽麻石油醚萃取部分毒殺南方根結(jié)2齡幼蟲效果較好，能殺滅土壤中的根結(jié)線蟲，增加植株的系統(tǒng)抗性，抵御對寄主的侵染，促進植株生長，是防治南方根結(jié)線蟲的天然植物源

6.4檢疫檢查

研究發(fā)現(xiàn)，造成無花果根結(jié)線蟲擴散、嚴(yán)重發(fā)生的是無花果種苗或器官攜帶根結(jié)線蟲。檢疫檢查在綜合防治中是前置策略，就是對本國或本區(qū)域有入侵、蔓延風(fēng)險的生物禁止或限制進入的系統(tǒng)措施。因此加強海關(guān)檢疫，降低傳入幾率。

6.5基因工程

近年來，隨著分子生物學(xué)理論和生物工程技術(shù)發(fā)展，國內(nèi)有關(guān)研究機構(gòu)開展了關(guān)于線蟲侵染方式、植物自身抗病防御體系研究，嘗試?yán)没蚬こ淌侄谓⒏咝?、?jīng)濟、環(huán)保的線蟲綜合控防體系，成為前沿治本策略。

霍雨猛克隆了受根結(jié)線蟲誘導(dǎo)的根結(jié)特異性表達(dá)的啟動子RKNIP、完整的OC-I- Δ -D86突變基因pTT33 ，將OC-I△D86基因克隆到原核表達(dá)載體pet21b中，其融合基因在大腸桿菌中得到表達(dá)產(chǎn)物，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法得到了抗線蟲的轉(zhuǎn) pRTO 基因，誘導(dǎo)抗根結(jié)線蟲基因在煙草的植株根結(jié)內(nèi)表達(dá)3，為無花果根結(jié)結(jié)蟲防治打開了基因工程防控的新路徑。

7討論

目前，無花果線蟲研究主要集中在新疆、福建、江蘇、山東等栽培重點地區(qū)，研究內(nèi)容主要涉及線蟲形態(tài)學(xué)鑒定、化學(xué)防治及生態(tài)分布，但對于線蟲種群動態(tài)、遺傳圖譜構(gòu)建、種群遺傳學(xué)、抗線品種、抗線微生物及生物多樣性分子生物學(xué)鑒定及侵染機制等方面的研究較少，且化防、生防、農(nóng)防等田間應(yīng)用研究幾乎空白。

農(nóng)業(yè)措施輪作受限于宜輪植物種類，難以大規(guī)模應(yīng)用；有機肥雖有效但不能徹底殺滅線蟲；基因工程培育抗線品種多處于實驗室階段，實際應(yīng)用較少；微生物防治線蟲機制復(fù)雜，影響因素多，田間防效不理想，商業(yè)化產(chǎn)品稀缺；食線菌、植物源藥劑試驗研究較少，應(yīng)用技術(shù)研究不足。。

未來，應(yīng)立足“治未病”原則，將農(nóng)業(yè)措施作為基礎(chǔ)策略，化學(xué)防控作為短期應(yīng)急策略，生物措施作為長期戰(zhàn)略，檢疫檢驗作為前置策略。結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，借鑒其他寄生植物研究經(jīng)驗，拓展無花果線蟲分類研究領(lǐng)域，深入研究其種群動態(tài)、遺傳學(xué)和入侵機制，以基因編輯技術(shù)和微生物資源開發(fā)為突破點，重點研發(fā)田間條件下穩(wěn)定高效的生防菌株及商業(yè)化產(chǎn)品，形成無花果線蟲及其防控研究熱點。

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