HPLC法測(cè)定參芪通絡(luò)顆粒中羥基紅花黃色素A的含量

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2025）11-0052-03

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.11. zgmzmjyyzz202511011

Determination of Hydroxysafflower Yellow A in Shenqi Tongluo Granules by HPLC

LIN Qunfeng'XU Jie2*ZHANG Huijing2 LI Ning2LI Qiang2 1. ， ， ，; 2. ， ，

Abstract：ObjectiveToestablishahighpeformance liquidchromatographymethodforthequantificationof hydroxysafflower Yellow A in Shenqi Tongluo granules. Methods After dissolved with 50% methanol，ultrasonic， filtered，the test sample was loaded onto a YMC - Triart C₁₈ （ 250mm×4.6mm ， 5μm ）column to separate with a mobile phase of methanol -acetonitrile -0.7% （2 phosphoric acid（30：2：68），the detection wavelength was 403nm ，the column temperature was 30 C ，the injection volume was 10 （20 μL ， the flow rate was 1.0mL/min . Results The calibration curve of hydroxysafflower yellow A showed a good linearity（ R²=1 ） in the range of32.55-651 ng.The recoverieswere in the range of100.17%-102.64 % ， the relative stard deviations（RSD） was 0.87% .Conclusion The method issimple，accurate，reproduciblestable，can beused forthedeterminationof hydroxysafflower yellow A in Shenqi Tongluo granules.

KeyWords：Shenqi Tongluo Granules；Hydroxysafflower Yellow A；Content Determination；HPLC

參芪通絡(luò)顆粒處方來(lái)源于壽光市中醫(yī)醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方。該制劑由黃芪、太子參、當(dāng)歸、生地黃、赤芍、川芎、紅花、菊花等十八味中藥組成，按一定比例混合均勻，加水浸泡，煎煮，濾過(guò)，濃縮，制成顆粒，干燥，即得。該制劑具有活血通絡(luò)、益氣養(yǎng)陰、健脾補(bǔ)腎等功效，臨床上常用于糖尿病周圍血管病變導(dǎo)致的肢體發(fā)涼、麻木、疼痛、腿足攣急、酸脹疼痛或小腿抽搐、肢端皮膚紫紺或蒼白、或間歇性跛行等癥狀的治療[1-2] 。

紅花味辛，性溫，活血通絡(luò)，祛瘀止痛，輔助赤芍、川芎、當(dāng)歸促進(jìn)血液循環(huán)，為本方的重要藥材，在藥效發(fā)揮中起到了重要作用[3-4]。羥基紅花黃色素A是紅花中的主要有效成分，具有抗氧化、減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷、降血糖等功效，且在紅花中含量較高，在《中國(guó)藥典》中作為評(píng)價(jià)紅花質(zhì)量的指標(biāo)[5-6]。該院內(nèi)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未建立含量測(cè)定方法，因此本文探討了參芪通絡(luò)顆粒中羥基紅花黃色素A的高效液相色譜測(cè)定方法，為參芪通絡(luò)顆粒的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試劑LC-20A高效液相色譜儀（日本島津制作所，UV檢測(cè)器，Labsolution工作站），LE204E電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多上海有限公司），GR202電子分析天平（日本艾安得股份有限公司），KQ3200DV數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。羥基紅花黃色素A對(duì)照品（批號(hào)：111637－202111；中國(guó)食品藥品檢定研究院），參芪通絡(luò)顆粒（批號(hào)：20220401，20220402，20220403；壽光市中醫(yī)醫(yī)院；規(guī)格：每袋 15g ），甲醇（色譜級(jí)，德國(guó)Merck公司），乙睛（色譜級(jí)，德國(guó)Merck公司），磷酸（分析純，煙臺(tái)雙雙化工有限公司），實(shí)驗(yàn)用水為超純水（電阻率為 18.25MQ?cm 。

1.2方法

1.2.1對(duì)照品溶液的制備取羥基紅花黃色素 A對(duì)照品適量，精密稱定，置量瓶中，加人 50% 甲醇水溶液，使溶解并定容，配制成每 1mL 含13.02μg 的溶液，即得。

1.2.2供試品溶液的制備取參芪通絡(luò)顆粒約3.0g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取25mL 50% 甲醇水溶液加入，密塞，稱定重量，超聲處理（功率2 4 0 ～W "，頻率 40kHz ） 45min ，放冷至室溫，再次稱定重量，加入適量 50% 甲醇水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。1.2.3陰性對(duì)照溶液的制備取處方中去除紅花的其他藥物，按處方比例制成不含羥基紅花黃色素A的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品，照“1.2.2”項(xiàng)下的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。1.2.4色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，YMC-Triart C₁₈ （ 250mm×4.6mm ， 5μm ），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7% 磷酸（30：2：68），流速 1.0mL/min ，柱溫30% ，檢測(cè)波長(zhǎng) 403nm ，進(jìn)樣體積 10μL 。

2結(jié)果

2.1專屬性考察分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。由圖1可見(jiàn)，陰性對(duì)照品溶液中未出現(xiàn)干擾羥基紅花黃色素A的色譜峰；供試品色譜圖中，羥基紅花黃色素A主峰與其他雜質(zhì)峰完全分離，表明在該色譜條件下，羥基紅花黃色素A可以被檢出，且處方中其他成分不干擾羥基紅花黃色素A的測(cè)定，方法的專屬性高，選擇性好。

2.2線性范圍考察取羥基紅花黃色素 A對(duì)照品適量，精密稱定，用 50% 甲醇水溶液使溶解并定容，制成每 1mL 含 1.302mg 的儲(chǔ)備液1；精密量取 5mL 儲(chǔ)備液1置 50mL 量瓶中，加入 50% 甲醇水溶液定容至刻度，搖勻，即得儲(chǔ)備液2；用 50% 甲醇水溶液將儲(chǔ)備液2稀釋后配制成質(zhì)量濃度分別為3.255 μg/mL 、 6.51μg/mL 、 13.02μg/mL 32.55μg/mL ！ 65.1μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別注入液相色譜儀，照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積值，以羥基紅花黃色素A對(duì)照品的峰面積（ χ_y^′ ）對(duì)其進(jìn)樣量（ng）進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 y= 3034.7x-5852.1 （ R²=1 ）。結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A在 32.55～651ng 質(zhì)量范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3重復(fù)性考察 取20220401批次供試品，照“1.2.2”項(xiàng)下供試品制備方法制得供試品溶液，平行配制6份，照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算6份樣品中羥基紅花黃色素A的平均含量為 110.63μg ，其RSD為 0.57% ，表明本方法測(cè)定參芪通絡(luò)顆粒中的羥基紅花黃色素A的重復(fù)性良好。

2.4精密度考察取20220401批次供試品，照“1.2.2”項(xiàng)下供試品制備方法制得供試品溶液，照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，羥基紅花黃色素A的峰面積RSD為0.30% ，保留時(shí)間的RSD為 0.35% ，表明該儀器測(cè)定羥基紅花黃色素A的精密度良好。

2.5穩(wěn)定性考察取20220401批次供試品，照“1.2.2”項(xiàng)下供試品制備方法制得供試品溶液，照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別于 ^0h 、^2h ！ ^4h ！ 6h ！ 、 ^10h 1 ^12h 、 ^16h 、 24h 進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，在 0～24h 內(nèi)，供試品中羥基紅花黃色素A的平均峰面積為380140.4，峰面積的RSD為 0.82% ，表明供試品溶液中羥基紅花黃色素A在 24h 內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.6加樣回收率考察取已知羥基紅花黃色素 A含量的20220401批次供試品約 1.50g ，精密稱定，置 50mL 具塞錐形瓶中，按照與供試品（ 1.50g） 中羥基紅花黃色素A的量之比為1：1，精密加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品，用 50% 甲醇水溶液溶解，照“1.2.2”項(xiàng)下供試品制備方法制得供試品溶液，平行制備6份。按“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.7含量測(cè)定取3批參芪通絡(luò)顆粒樣品，照“1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行羥基紅花黃色素A含量測(cè)定，批號(hào)為20220401、20220402、20220403的三批供試品中羥基紅花黃色素A的含量分別為111.75μg/g 、1 11.24μg/g 、 112.12μg/g 。

3討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)及流動(dòng)相的考察檢測(cè)波長(zhǎng)直接參考《中國(guó)藥典》紅花中羥基紅花黃色素A的檢測(cè)方法，方法中其檢測(cè)波長(zhǎng)采用了 403nm ，故本方法檢測(cè)波長(zhǎng)定為403nm；流動(dòng)相參考藥典及文獻(xiàn)[3.6-9]分別考察了甲醇-乙腈- 0.7% 磷酸溶液（26：2：72），甲醇－乙腈- 0.7% 磷酸溶液（30：2：72），甲醇-乙睛 -0.7% 磷酸溶液（33：2：72）3種流動(dòng)相等度洗脫方法，結(jié)果表明甲醇-乙腈-0.7% 磷酸溶液（30：2：72）為流動(dòng)相時(shí)，供試品中各成分分離度較好，且在羥基紅花黃色素A相應(yīng)的出峰位置沒(méi)有干擾，因此選擇用此色譜條件作為本方案色譜條件。

3.2提取方法的考察參考相關(guān)文獻(xiàn)[10-I1]，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中考察了提取溶劑（ 25% 甲醇、 50% 甲醇、75% 甲醇），超聲時(shí)間（ 30min 7 45min ！ 60min ）及提取方式（加熱回流和超聲）對(duì)羥基紅花黃色素A提取率的影響。加熱回流和超聲提取相比，提取效果無(wú)明顯差異。考慮超聲提取操作更簡(jiǎn)便，可操作性強(qiáng)，故選取超聲提取作為含量測(cè)定最終提取方法。羥基紅花黃色素A極性較大，在甲醇溶劑中溶解性比較好，最終確定 50% 甲醇超聲處理（ 240‰ ，頻率 40kHz ） 45min 為最優(yōu)提取方法。

綜上所述，本研究中采用HPLC法測(cè)定參芪通絡(luò)顆粒中的羥基紅花黃色素A含量，以甲醇－乙腈 -0.7% 磷酸溶液為流動(dòng)相，采用等度洗脫，其羥基紅花黃色素A的色譜峰與其他雜質(zhì)峰具有良好的分離度，具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性良好等優(yōu)點(diǎn)，可用于參芪通絡(luò)顆粒中的羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定，為制定參芪通絡(luò)顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1］李紅霞，崔小敏，雷琨，等．正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選參芪通絡(luò)顆粒的提取工藝［J]．西北藥學(xué)雜志，2017，32（4）：443-446.

[2」馬俊峰.參芪抑糖通絡(luò)丸治療氣陰兩虛夾瘀型2型糖尿病合并穩(wěn)定型心絞痛的療效觀察［D].蘭州：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，2023.

[3］崔健，李海萍，殷佳蕊．HPLC法測(cè)定血痹顆粒中丹酚酸B、羥基紅花黃色素A、姜黃素和齊墩果酸含量[J]．中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2024，33（2）：131-135.

[4］韓盟帝，馬飛祥，汪亞楠，等．基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討紅花活性成分及藥理作用機(jī)制［J]．內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，41（2）：126-130.

[5］牛芬溪，劉悅，劉雅楠，等．羥基紅花黃色素A的藥理作用及研究進(jìn)展［J]．中國(guó)藥學(xué)雜志，2021，56（17）：1372-1377.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：157.

[7］路麗，張洪坤，黃玉瑤，等．HPLC法測(cè)定參梅養(yǎng)胃顆粒（無(wú)蔗糖）中羥基紅花黃色素A的含量［J］．中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2024，33（3）：41-45.

[8］羅漢宇，羅瀅娟.HPLC法測(cè)定史國(guó)公藥酒中羥基紅花黃色素A［J]．海峽藥學(xué)，2018，30（7）：88-90.

[9]唐吉思，圖力吉爾，薩如拉，等．新薩烏日樂(lè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J]．中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2022，28（3）：44-46.

[10］王艷楠，孔德娟，任婭婷，等．高效液相色譜法測(cè)定蒙成藥阿嘎日-8中羥基紅花黃色素A的含量[J]．中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2021，27（7）：58-60.

[11］彭偉文，高玉橋，梅全喜，等．反高效液相色譜法測(cè)定骨科洗劑1號(hào)方中羥基紅花黃色素A的含量［J].中國(guó)藥房，2006，17（24）：1898-1899.（收稿日期：2024-09-03編輯：陶希睿）