• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    單細(xì)胞測序結(jié)合機器學(xué)習(xí)算法揭示心力衰竭病人細(xì)胞間通訊及關(guān)鍵調(diào)控基因

    2025-03-10 00:00:00王學(xué)付饒晉張立劉旭雯張宇峰
    關(guān)鍵詞:診斷模型機器學(xué)習(xí)心力衰竭

    摘要""目的:基于單細(xì)胞測序和機器學(xué)習(xí)算法構(gòu)建心力衰竭(HF)的診斷模型,并探索HF病人中細(xì)胞間通訊。方法:使用Seurat包對單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序(scRNA-seq)數(shù)據(jù)質(zhì)控、降維、聚類和注釋。通過AUCell評估各細(xì)胞亞群的免疫活性,選擇免疫活性最高的細(xì)胞亞群進行后續(xù)分析?;谂哭D(zhuǎn)錄組測序(Bulk RNA-seq)數(shù)據(jù),使用limma包篩選差異表達基因并進行基因集富集分析(GSEA)。進一步將疾病分類被作為反應(yīng)變量,差異基因作為解釋變量,通過4種機器學(xué)習(xí)模型來篩選具有診斷價值的巨噬細(xì)胞相關(guān)特征基因,并通過受試者工作特征(ROC)曲線評估關(guān)鍵基因的診斷能力。構(gòu)建列線圖預(yù)測HF發(fā)生的總風(fēng)險分?jǐn)?shù)。最后使用CellChat來探索細(xì)胞亞群之間的細(xì)胞間相互作用。結(jié)果:與正常樣本相比,HF病人中巨噬細(xì)胞的比例高于正常樣本,且巨噬細(xì)胞免疫活性評分最高。巨噬細(xì)胞亞群差異基因富集分析表明,白細(xì)胞介導(dǎo)的免疫過程和抗原的處理和呈遞顯著富集。多種機器學(xué)習(xí)算法相交結(jié)果發(fā)現(xiàn)SERPINA3、GPAT3、ANPEP和FCGBP可作為特征基因并與巨噬細(xì)胞密切相關(guān)。ROC曲線表明,診斷模型具有很好的預(yù)測能力。細(xì)胞通訊發(fā)現(xiàn),由巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)介導(dǎo)的成纖維細(xì)胞-巨噬細(xì)胞以及ANNEXIN介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞-中性粒細(xì)胞之間的信號通路表現(xiàn)出復(fù)雜的傳出和傳入動力學(xué)。結(jié)論:4個關(guān)鍵基因作為生物標(biāo)志物具有良好的診斷價值。巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫過程以及細(xì)胞間通訊在HF的免疫微環(huán)境中起著關(guān)鍵作用。

    關(guān)鍵詞""心力衰竭;單細(xì)胞測序;機器學(xué)習(xí);診斷模型;細(xì)胞通訊

    doi:10.12102/j.issn.1672-1349.2025.04.006

    Single-cell Sequencing Combined with Machine Learning Algorithms Reveals Cell-cell Communication and Key Regulatory Genes in Patients with Heart Failure

    WANG Xuefu RAO Jin ZHANG Li LIU Xuwen ZHANG Yufeng

    1.School of Health Sciences and Engineering, University of Shanghai for Science and Technology, Shanghai "200093, China;

    2. Shanghai Changzheng Hospital, Shanghai "200003, China; 3. School of Medicine, Guangxi University

    Corresponding Author "ZHANG Yufeng, E-mail: zyflwj@smmu.edu.cn

    Abstract Objective:To construct a diagnostic model for heart failure(HF) based on single-cell sequencing and machine learning algorithms,and explore cell-cell communication in HF patients.Methods:The Seurat package was used for quality control,dimensionality reduction, clustering,and annotation of single-cell transcriptome(scRNA-seq) data.The immune activity of each cell subset was evaluated using AUCell,and the cell subset with the highest immune activity was selected for further analysis.Differential expression genes were screened using the limma package based on bulk transcriptome(Bulk RNA-seq) data,and gene set enrichment analysis(GSEA) was performed.Furthermore,disease classification was used as the response variable and differential genes as the explanatory variables to select macrophage-related feature genes with diagnostic value through four machine learning models.The diagnostic ability of key genes was evaluated using receiver operating characteristic(ROC) curves.Bar plots were also constructed to predict the overall risk score of HF occurrence. Finally,CellChat was used to explore cell-cell interactions between cell subtypes.Results:Compared to normal samples, the proportion of macrophages in HF patients was higher,and macrophages had the highest immune activity score.Gene enrichment analysis of macrophage subtypes showed significant enrichment of leukocyte-mediated immune processes and antigen processing and presentation.The intersection of multiple machine learning algorithms revealed that SERPINA3,GPAT3,ANPEP,and FCGBP could serve as feature genes and were closely related to macrophages.Receiver operator characteristic(ROC) curves demonstrated that our diagnostic model had good predictive ability.Cell communication analysis revealed complex outgoing and incoming dynamics in the signaling pathways between fibroblast-macrophage mediated-neutrophil mediated by MIF and macrophages--neutrophils mediated by ANNEXIN.Conclusion:The four key genes serve as biomarkers and have good diagnostic value. Macrophage-mediated immune processes and cell-cell communication play a crucial role in the immune microenvironment of HF.

    Keywords""heart failure; single cell sequencing; machine learning; diagnostic models; cell communication

    心力衰竭(HF)是一種復(fù)雜的臨床綜合征,是心血管疾病的終末期表現(xiàn)1-2。新出現(xiàn)的證據(jù)表明,炎癥激活和免疫浸潤與心力衰竭的發(fā)病、進展和預(yù)后密切相關(guān)3-4。浸潤免疫細(xì)胞釋放轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)等細(xì)胞因子,促進心臟重塑5。因此,研究心力衰竭發(fā)展中的免疫微環(huán)境改變和關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,對心力衰竭的早期診斷以及預(yù)后具有重要意義。巨噬細(xì)胞是先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的重要組成部分,在心血管系統(tǒng)的正常運作中發(fā)揮作用6。有研究表明,巨噬細(xì)胞來源的白細(xì)胞介素10(IL-10)在高血壓或心力衰竭的發(fā)展過程中過量分泌,促進心臟的促纖維化機制7。此外,在高血壓心力衰竭病人中,Trem2缺陷的巨噬細(xì)胞使促血管生成基因程序的表達受損,促炎性細(xì)胞因子的表達增加8。雖然對于巨噬細(xì)胞研究取得了一定成果,但其在心力衰竭中的詳細(xì)機制仍未完全了解。批量轉(zhuǎn)錄組測序(Bulk RNA-seq)已經(jīng)對導(dǎo)致心力衰竭發(fā)病機制提供了重要的見解,但缺少細(xì)胞特異性信息。因此,本研究通過Bulk RNA-seq聯(lián)合單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序(scRNA-seq)進一步揭示心力衰竭病人中細(xì)胞間通訊以及關(guān)鍵調(diào)控基因。

    1 資料與方法

    1.1 數(shù)據(jù)收集

    本研究所使用的數(shù)據(jù)集均下載于基因表達綜合數(shù)據(jù)庫(GEO)。GSE222144為scRNA-seq,包括一個正常樣本和一個心力衰竭樣本的測序數(shù)據(jù)9。GSE57338為Bulk RNA-seq,共有313例有/無心力衰竭的個體10。GSE26887作為外部驗證集,進一步評估模型的準(zhǔn)確性11。

    1.2 scRNA-seq數(shù)據(jù)處理

    scRNA-seq數(shù)據(jù)分析是通過使用Seurat包進行的12。對于最初的質(zhì)量控制過濾,排除了低質(zhì)量的細(xì)胞(基因表達少于300或線粒體基因表達超過25%)。然后,使用harmony包來整合不同處理的數(shù)據(jù)集,并消除批次效應(yīng)13。使用主成分分析(principal component analysis,PCA)進行降維,以探索異質(zhì)性并通過FindAllMarkers函數(shù)找到特定聚類的標(biāo)記基因,使用CellMarker 2.0將細(xì)胞亞群注釋為已知細(xì)胞類型14。

    1.3 免疫相關(guān)基因集評分

    基于AUCell R包計算免疫相關(guān)基因集的曲線下面積(AUC),生成每個細(xì)胞的基因表達排名,以估計每個細(xì)胞中的高表達基因集比例15。使用AUCell_exploreThresholds函數(shù)來確定識別基因組活躍細(xì)胞的閾值。得到基因集分?jǐn)?shù)后,使用Seurat內(nèi)置的函數(shù)將每個細(xì)胞的AUC得分映射到細(xì)胞亞群,以評估各細(xì)胞亞群的免疫活性。

    1.4 Bulk RNA-seq差異基因的篩選

    通過GEOquery包從GEO數(shù)據(jù)庫下載GSE57338的原始數(shù)據(jù)并進行歸一化。使用limma包篩選差異表達基因。調(diào)整后的Plt;0.05,|logFC|>0.5被認(rèn)為是差異表達的基因。

    1.5 差異基因富集分析

    通過FindMarkers函數(shù)獲取巨噬細(xì)胞亞群中差異基因,通過clusterProfiler R包進行京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析和基因本體(GO)功能富集分析,從而對差異基因進行功能定位。對Bulk RNA-seq差異分析獲取的基因進行基因集富集分析(GSEA)以揭示差異基因關(guān)鍵功能。

    1.6 巨噬細(xì)胞關(guān)鍵調(diào)控基因的篩選及驗證

    穩(wěn)定和顯著的特征對于預(yù)測心力衰竭發(fā)病和進展風(fēng)險至關(guān)重要。疾病分類被認(rèn)為是反應(yīng)變量,差異基因作為解釋變量建立4種機器學(xué)習(xí)模型(包括LightGBM、XGBoost、RF、SVM)來篩選具有診斷價值的巨噬細(xì)胞相關(guān)特征基因。

    1.7 特征基因與免疫細(xì)胞相關(guān)性分析

    通過單樣本基因集富集分析(ssGSEA)算法評估特征基因與28種免疫細(xì)胞的相關(guān)性。

    1.8 細(xì)胞間通訊分析

    使用CellChat推斷細(xì)胞亞群之間的細(xì)胞間相互作用關(guān)系16。根據(jù)受體和配體的表達預(yù)測潛在的相互作用強度,推斷細(xì)胞狀態(tài)特異性通信并篩選所有細(xì)胞組中差異表達的信號通路及相關(guān)基因。

    2 結(jié)果

    2.1 心力衰竭組織中的單細(xì)胞景觀

    正常(Con)和心力衰竭的單細(xì)胞樣本經(jīng)過質(zhì)控,共獲得18 104個細(xì)胞和24 781個基因。樣本合并分析發(fā)現(xiàn)不同樣本之間存在潛在的批次效應(yīng),因此,本研究用harmony算法校正批次效應(yīng)(見圖1)。選擇0.3作為細(xì)胞亞群區(qū)分的最佳分辨率,共獲得14個細(xì)胞亞群。根據(jù)亞群標(biāo)記基因,亞群被注釋為9個不同的細(xì)胞系,包括成纖維細(xì)胞(fibroblast)、內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cell)、B細(xì)胞(B cell)、中性粒細(xì)胞(neutrophils cell)、自然殺傷細(xì)胞(NK cell)、巨噬細(xì)胞(macrophages)、平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell)、神經(jīng)元細(xì)胞(neuronal cell)和心肌細(xì)胞(cardiomyocytes),見圖2、圖3。此外,本研究發(fā)現(xiàn)心力衰竭病人中巨噬細(xì)胞的比例高于正常樣本(見圖4)。因此,后續(xù)分析主要聚焦于巨噬細(xì)胞。圖5顯示了每種細(xì)胞類型的代表性標(biāo)記基因的表達水平。

    2.2 免疫相關(guān)基因集評分

    為了研究心力衰竭中的免疫特征,AUCell R軟件包被用來確定每個細(xì)胞系的免疫活性(見圖6)。巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞AUC值最高,表現(xiàn)出更高的免疫活性。詳見圖7。此外,基于GSE57338數(shù)據(jù)集的免疫浸潤分析進一步證實了巨噬細(xì)胞高浸潤的特征。詳見圖8。由于巨噬細(xì)胞亞群心力衰竭組明顯增加,進一步對巨噬細(xì)胞簇中的差異基因進行GO和KEGG分析。GO術(shù)語主要與白細(xì)胞的細(xì)胞-細(xì)胞黏連、白細(xì)胞遷移和白細(xì)胞介導(dǎo)的免疫過程有關(guān),而KEGG分析表明,吞噬體、抗原的處理和呈遞以及核因子-κB(NF-κB)信號通路顯著富集。詳見圖9、圖10。

    2.3 Bulk RNA-seq差異基因的篩選

    為了研究心力衰竭病人基因的表達特征,本研究分析了GSE57338中的313個樣本,其中包括177例心力衰竭病人樣本和136名正常樣本。通過Limma包篩選出428個差異表達的基因(見圖11)。GSEA富集分析結(jié)果與巨噬細(xì)胞亞群的表達特征具有相似性,吞噬作用與免疫和炎癥反應(yīng)顯著富集(見圖12)。以上結(jié)果表明巨噬細(xì)胞是心力衰竭病人中免疫過程的主要參與者。

    2.4 巨噬細(xì)胞關(guān)鍵調(diào)控基因的篩選

    Bulk RNA-seq差異基因與巨噬細(xì)胞亞群中的差異基因相交,共獲得27個差異表達的巨噬細(xì)胞相關(guān)基因(見圖13)。機器學(xué)習(xí)在預(yù)測心力衰竭發(fā)病方面具有更高的準(zhǔn)確性,因此,應(yīng)用多種機器學(xué)習(xí)算法篩選特征變量。基于LASSO算法,獲得6個特征變量(見圖14)。圖15顯示RF算法對變量的重要性排名順序。此外,基于XGBoost和LightGBM模型的SHAP依賴分析描述了預(yù)測模型的單個特征變量的重要性(見圖16、圖17)。特征變量的SHAP值越高,心力衰竭的可能性就越大。值得注意的是,所有的算法中最重要的變量是SERPINA3。最后,多種機器學(xué)習(xí)算法結(jié)果相交,發(fā)現(xiàn)SERPINA3、GPAT3、ANPEP和FCGBP可調(diào)控心力衰竭的進展,并與巨噬細(xì)胞密切相關(guān)(見圖18)。

    進一步行ssGSEA分析也表明,SERPINA3、ANPEP和FCGBP與巨噬細(xì)胞的浸潤呈顯著正相關(guān),而GPAT3與巨噬細(xì)胞的活性呈顯著負(fù)相關(guān)(見圖19)。

    2.5 特征基因的驗證

    構(gòu)建邏輯回歸模型來探索特征基因和心力衰竭之間的關(guān)聯(lián)。森林圖(見圖20)所示的多變量邏輯回歸分析顯示,4個標(biāo)記物的表達與心力衰竭獨立相關(guān)。列線圖給每個特征變量值分配一個分值,通過將所有特征變量的分值相加得到患心力衰竭的總風(fēng)險分?jǐn)?shù),見圖21。此外,4個基因的表達水平在兩個數(shù)據(jù)集中都有明顯差異,見圖22、圖23。隨后,在訓(xùn)練隊列和外部隊列中進行ROC分析,結(jié)果表明,4個診斷基因具有較高的預(yù)測價值,尤其是SERPINA3。詳見圖24、圖25。

    2.6 scRNA-seq數(shù)據(jù)中細(xì)胞間通訊分析

    為了破譯不同細(xì)胞間的配體-受體相互作用關(guān)系,本研究使用CellChat分析了9個細(xì)胞簇之間的通信。CellChat結(jié)果表明,成纖維細(xì)胞是信號的主要發(fā)出者,而巨噬細(xì)胞是主要的接受者(見圖26、圖27)。細(xì)胞之間通過31條途徑相互作用,而由巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)介導(dǎo)的成纖維細(xì)胞-巨噬細(xì)胞以及ANNEXIN介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞-中性粒細(xì)胞之間的信號通路表現(xiàn)出復(fù)雜的傳出和傳入動力學(xué)(見圖28)。成纖維細(xì)胞是MIF信號的主要來源,而巨噬細(xì)胞是主要受體(見圖29)。巨噬細(xì)胞是ANNEXIN信號的主要生產(chǎn)者,而中性粒細(xì)胞充當(dāng)巨噬細(xì)胞釋放ANNEXIN信號的靶細(xì)胞(見圖30)。進一步鑒定了信號通路中的配體-受體對,其中MIF信號傳導(dǎo)由MIF-(CD74+CXCR4)和MIF-(CD74+CD44)配體-受體介導(dǎo),而ANNEXIN信號傳導(dǎo)主要由ANXA1-FPR1和ANXA1-FPR2配體-受體介導(dǎo)(見圖31)。上述通路中配體和受體的表達水平見圖32。

    3 討論

    心力衰竭是一種并發(fā)癥發(fā)生率高、預(yù)后差的心血管臨床綜合征17。心力衰竭病人心臟重塑的發(fā)展伴隨著更高的炎癥狀態(tài),伴有纖維化、心肌細(xì)胞凋亡以及心功能的改變18。隨著單細(xì)胞技術(shù)發(fā)展,這為剖析存在于健康和患病組織中的細(xì)胞類型提供了新工具。最近,這些方法被用來更深入地破譯心臟的細(xì)胞和轉(zhuǎn)錄景觀如何受到疾病的影響19。在本研究中,通過scRNA-seq聯(lián)合BulkRNA-seq測序數(shù)據(jù)揭示了心力衰竭病人基因表達水平與免疫細(xì)胞浸潤和免疫相關(guān)功能有關(guān)。首先,通過AUCell包對每個細(xì)胞中免疫基因集進行評分,發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞得分最高,說明巨噬細(xì)胞是心力衰竭病人中與免疫功能最相關(guān)的細(xì)胞類型。其次,使用4種機器學(xué)習(xí)算法,建立了一個對心力衰竭具有出色的診斷性能的診斷模型,ROC曲線證明了模型的診斷性能。最后,細(xì)胞間通訊揭示了成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在心肌重塑中的串?dāng)_作用。

    研究表明,炎癥反應(yīng)是心力衰竭發(fā)展的重要因素20。細(xì)胞通過分泌一些趨化因子和細(xì)胞因子調(diào)節(jié)心力衰竭中的免疫細(xì)胞趨化性,這在心肌重塑中起著至關(guān)重要的作用。心臟巨噬細(xì)胞是具有高可塑性和適應(yīng)性的異質(zhì)性群體,在組織纖維化反應(yīng)中也起著關(guān)鍵作用21。已知常駐巨噬細(xì)胞通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和生長因子的合成來響應(yīng)免疫微環(huán)境,并產(chǎn)生大量促纖維化生長因子調(diào)節(jié)纖維化的過程22。本研究中,單細(xì)胞譜系中巨噬細(xì)胞的百分比在心力衰竭的進展中顯著增加。因此,巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物可能是心力衰竭診療更有效的手段。基于上述結(jié)論,本研究進一步利用機器學(xué)習(xí)算法來確定心力衰竭的巨噬細(xì)胞相關(guān)基因診斷特征。特征選擇是一種機器學(xué)習(xí)算法,該算法最大的優(yōu)點是可以去除冗余和不相關(guān)的特征,從而降低輸入維度,提高模型的準(zhǔn)確性,并降低模型的復(fù)雜性23。同樣,在本研究中,結(jié)合了4種機器學(xué)習(xí)算法,包括LightGBM、XGBoost、RF、SVM。4種算法的特征交叉顯示,SERPINA3、GPAT3、ANPEP和FCGBP是潛在的心力衰竭診斷標(biāo)記物。此外,多變量邏輯回歸分析顯示,4個基因的診斷特征在預(yù)測心力衰竭方面表現(xiàn)出高度的鑒別力。外部數(shù)據(jù)集ROC曲線的AUC值也證實了結(jié)果的可靠性。

    現(xiàn)有研究表明,SERPINA3與免疫反應(yīng)密切相關(guān)24。SERPINA3通過抑制IκB激酶(IKK)復(fù)合物的形成和NF-κB活化來抑制巨噬細(xì)胞中的細(xì)胞因子活性25。SERPINA3的高表達會對心臟功能產(chǎn)生不利影響,并增加死亡率或心臟事故26。SERPINA3可以作為具有巨大潛力的心力衰竭預(yù)測生物標(biāo)志物。GPAT3是與脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因,越來越多的報道表明,活化的巨噬細(xì)胞改變脂質(zhì)組成,脂肪酸合成的靶向調(diào)節(jié)可能會影響巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)27-28。因此,GPAT3水平升高可能影響巨噬細(xì)胞脂質(zhì)代謝紊亂驅(qū)動心力衰竭中巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。ANPEP是一種廣泛表達的外酶,在各種炎癥性疾病中起重要作用29。作為一種酶,ANPEP通過切割其N端來調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的活性,并通過減少與MHCⅡ結(jié)合的參與抗原加工的多肽,從而調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的發(fā)育和活性30。本研究中,抗原的加工與呈遞的過程顯著富集。FCGBP是黏膜免疫防御的重要組成部分,參與保護性免疫31。此外,F(xiàn)CGBP也可作為一種抗原發(fā)揮作用,其被巨噬細(xì)胞識別并呈現(xiàn)給T細(xì)胞,激活了主要的防御機制32。除了在黏膜上皮的先天免疫防御中的作用外,F(xiàn)CGBP也可能起結(jié)構(gòu)性作用。據(jù)報道,F(xiàn)CGBP在主動脈中表達,其是腹主動脈瘤破裂病人中下調(diào)最嚴(yán)重的基因33。對于FCGBP的研究主要聚焦于黏膜和腫瘤等疾病,在心力衰竭中的作用鮮有報道。因此,F(xiàn)CGBP轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)可能成為潛在的治療靶點。為了破譯不同細(xì)胞間的配體-受體相互作用,本研究使用CellChat分析了9個細(xì)胞簇之間的通信。成纖維細(xì)胞-巨噬細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞-中性粒細(xì)胞在心力衰竭中表現(xiàn)出更強的相互作用,這表明細(xì)胞相互作用本質(zhì)上影響心力衰竭的進展。有趣的是,本課題組發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞出現(xiàn)高水平的巨噬細(xì)胞遷移抑制因子的表達。MIF相關(guān)的配體-受體相互作用在心力衰竭中被高度激活。MIF對脂肪變性具有保護作用,導(dǎo)致巨噬細(xì)胞數(shù)量減少34。此外,CXCR4、CD74和MIF的共表達可以增強細(xì)胞的存活和遷移能力。無論是單獨還是組合,都會促進細(xì)胞死亡,并導(dǎo)致MIF驅(qū)動的遷移反應(yīng)消除35。ANNEXIN信號傳導(dǎo)主要由ANXA1-FPR1和ANXA1-FPR2配體-受體介導(dǎo)。研究表明,配體ANXA1和受體FPRs可以促進中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的成熟,并將它們遷移到受損的肺部組織中36。心肌缺血再灌注過程中,ANXA1的下調(diào)加劇了炎癥反應(yīng),同時心臟收縮功能減弱37??傊?,推測這些配體、受體的結(jié)合傳遞促炎或抗炎信號,從而介導(dǎo)心力衰竭過程免疫反應(yīng)。

    綜上所述,本研究選定的4個關(guān)鍵基因作為生物標(biāo)志物具有良好的診斷價值,為心力衰竭的診療提供了一定的參考。同時,我們也破譯了不同細(xì)胞間的配體-受體相互作用在心力衰竭的免疫微環(huán)境中的關(guān)鍵作用。然而,本研究也存在不足之處,單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)納入樣本較少,且結(jié)果未進行后續(xù)實驗驗證。此外,理論結(jié)果到臨床實踐中的轉(zhuǎn)化仍有很長的路要走。

    參考文獻:

    [1] PONIKOWSKI P,VOORS A A,ANKER S D,et al.2016 ESC guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure:the task force for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure of the European Society of Cardiology(ESC)"developed with the special contribution of the Heart Failure Association(HFA)"of the ESC[J].European Heart Journal,2016,37(27):2129-2200.

    [2] YANCY C W,JESSUP M,BOZKURT B,et al.2017 ACC/AHA/HFSA focused update of the 2013 ACCF/AHA guideline for the management of heart failure:a report of the American College of Cardiology/American Heart Association task force on clinical practice guidelines and the Heart Failure Society of America[J].Journal of the American College of Cardiology,2017,70(6):776-803.

    [3] MURPHY S P,KAKKAR R,MCCARTHY C P,et al.Inflammation in heart failure:JACC state-of-the-art review[J].Journal of the American College of Cardiology,2020,75(11):1324-1340.

    [4] SWIRSKI F K,NAHRENDORF M.Cardioimmunology:the immune system in cardiac homeostasis and disease[J].Nature Reviews Immunology,2018,18(12):733-744.

    [5] SCHULTHEISS H P,F(xiàn)AIRWEATHER D,CAFORIO A L P,et al.Dilated cardiomyopathy[J].Nature Reviews Disease Primers,2019,5:32.

    [6] ARTS R J W,NETEA M G.Adaptive characteristics of innate immune responses in macrophages[J].Microbiology Spectrum, 2016,4(4).DOI:10.1128/microbiolspec.MCHD-0023-2015.

    [7] HULSMANS M,SAGER H B,ROH J D,et al.Cardiac macrophages promote diastolic dysfunction[J].Journal of Experimental Medicine,2018,215(2):423-440.

    [8] SMART C D,F(xiàn)EHRENBACH D J,WASSENAAR J W,et al.Immune profiling of murine cardiac leukocytes identifies triggering receptor expressed on myeloid cells 2 as a novel mediator of hypertensive heart failure[J].Cardiovascular Research,2023,119(13):2312-2328.

    [9] DU L P,SUN X T,GONG H,et al.Single cell and lineage tracing studies reveal the impact of CD34"cells on myocardial fibrosis during heart failure[J].Stem Cell Research amp; Therapy,2023,14(1):33.

    [10] LIU Y C,MORLEY M,BRANDIMARTO J,et al.RNA-Seq identifies novel myocardial gene expression signatures of heart failure[J].Genomics,2015,105(2):83-89.

    [11] GRECO S,F(xiàn)ASANARO P,CASTELVECCHIO S,et al.microRNA dysregulation in diabetic ischemic heart failure patients[J].Diabetes,2012,61(6):1633-1641.

    [12] HAO Y H,HAO S,ANDERSEN-NISSEN E,et al.Integrated analysis of multimodal single-cell data[J].Cell,2021,184(13):3573-3587.e29.

    [13] KORSUNSKY I,MILLARD N,F(xiàn)AN J,et al.Fast sensitive and accurate integration of single-cell data with Harmony[J].Nature Methods,2019,16(12):1289-1296.

    [14] HU C X,LI T Y,XU Y Q,et al.CellMarker 2.0: an updated database of manually curated cell markers in human/mouse and web tools based on scRNA-seq data[J].Nucleic Acids Research,2023,51(D1):D870-D876.

    [15] AIBAR S,GONZáLEZ-BLAS C B,MOERMAN T,et al.SCENIC: single-cell regulatory network inference and clustering[J].Nature Methods, 2017,14(11):1083-1086.

    [16] JIN S Q,GUERRERO-JUAREZ C F,ZHANG L H,et al.Inference and analysis of cell-cell communication using CellChat[J].Nature Communications,2021,12(1):1088.

    [17] MOSTERD A,HOES A W.Clinical epidemiology of heart failure[J]. Heart,2007,93(9):1137-1146.

    [18] TANAI E,F(xiàn)RANTZ S.Pathophysiology of heart failure[J].Comprehensive Physiology,2015,6(1):187-214.

    [19] LITVI?UKOVá M,TALAVERA-LóPEZ C,MAATZ H,et al.Cells of the adult human heart[J].Nature,2020,588(7838):466-472.

    [20] MARTINI E,KUNDERFRANCO P,PEANO C,et al.Single-cell sequencing of mouse heart immune infiltrate in pressure overload-driven heart failure reveals extent of immune activation[J].Circulation,2019,140(25):2089-2107.

    [21] MA Y G,MOUTON A J,LINDSEY M L.Cardiac macrophage biology in the steady-state heart,the aging heart,and following myocardial infarction[J].Translational Research,2018,191:15-28.

    [22] FRANGOGIANNIS N G.Cardiac fibrosis:cell biological mechanisms, molecular pathways and therapeutic opportunities[J].Molecular Aspects of Medicine,2019,65:70-99.

    [23] LIANG S,MA A J,YANG S,et al.A review of matched-pairs feature selection methods for gene expression data analysis[J].Computational and Structural Biotechnology Journal,2018,16:88-97.

    [24] SáNCHEZ-NAVARRO A,GONZáLEZ-SORIA I,CALDI?O-BOHN R,et al.An integrative view of serpins in health and disease:the contribution of SerpinA3[J].American Journal of Physiology Cell Physiology,2021,320(1):C106-C118.

    [25] WANG X,DING Y,LI R,et al.N(6)-methyladenosine of Spi2a attenuates inflammation and sepsis-associated myocardial dysfunction in mice [J].Nat Commun,2023,14(1):1185.

    [26] DELRUE L,VANDERHEYDEN M,BELES M,et al.Circulating SERPINA3 improves prognostic stratification in patients with a de novo"or worsened heart failure[J].ESC Heart Failure,2021,8(6):4780-4790.

    [27] HSIEH W Y,ZHOU Q D,YORK A G,et al.Toll-like receptors induce signal-specific reprogramming of the macrophage lipidome[J].Cell Metabolism,2020,32(1):128-143.e5.

    [28] YAN J W,HORNG T.Lipid metabolism in regulation of macrophage functions[J].Trends in Cell Biology,2020,30(12):979-989.

    [29] GLYN-JONES S,PALMER A J R,AGRICOLA R,et al. Osteoarthritis[J].The Lancet,2015,386(9991):376-387.

    [30] LU C Y,AMIN M A,F(xiàn)OX D A.CD13/aminopeptidase N is a potential therapeutic target for inflammatory disorders[J].Journal of Immunology,2020,204(1):3-11.

    [31] KOBAYASHI K,BLASER M J,BROWN W R.Identification of a unique IgG Fc binding site in human intestinal epithelium[J].Journal of Immunology,1989,143(8):2567-2574.

    [32] KOBAYASHI K,YAGASAKI M,HARADA N,et al.Detection of Fcgamma binding protein antigen in human sera and its relation with autoimmune diseases[J].Immunology Letters,2001,79(3):229-235.

    [33] G?BEL G,NORTHOFF B H,WEINZIERL I,et al. Molecular fingerprint for terminal abdominal aortic aneurysm disease[J].Journal of the American Heart Association,2017,6(12):e006798.

    [34] HEINRICHS D,BERRES M L,COEURU M,et al.Protective role of macrophage migration inhibitory factor in nonalcoholic steatohepatitis[J]. FASEB Journal,2014,28(12):5136-5147.

    [35] THAVAYOGARAJAH T,SINITSKI D,EL BOUNKARI O,et al. CXCR4 and CD74 together enhance cell survival in response to macrophage migration-inhibitory factor in chronic lymphocytic leukemia[J].Experimental Hematology,2022,115:30-43.

    [36] LESLIE J,MILLAR B J,DEL CARPIO PONS A,et al.FPR-1 is an important regulator of neutrophil recruitment and a tissue-specific driver of pulmonary fibrosis[J].JCI Insight,2020,5(4):e125937.

    [37] QIN C X,BUXTON K D,PEPE S,et al.Reperfusion-induced myocardial dysfunction is prevented by endogenous annexin-A1 and its N-terminal-derived peptide Ac-ANX-A1(2-26)[J].British Journal of Pharmacology, 2013,168(1):238-252.

    (收稿日期:2023-06-21)

    (本文編輯"王麗)

    猜你喜歡
    診斷模型機器學(xué)習(xí)心力衰竭
    中樞性性早熟女童的診斷模型建立與驗證
    CD4細(xì)胞計數(shù)聯(lián)合IGRA預(yù)測AIDS/Ⅲ型TB影像診斷模型分析
    甘肅科技(2020年20期)2020-04-13 00:30:56
    一種電網(wǎng)通信網(wǎng)絡(luò)的故障檢測方法及系統(tǒng)
    基于機器學(xué)習(xí)的圖像特征提取技術(shù)在圖像版權(quán)保護中的應(yīng)用
    慢性心衰患者血尿酸和腦鈉肽水平檢測的臨床意義
    基于網(wǎng)絡(luò)搜索數(shù)據(jù)的平遙旅游客流量預(yù)測分析
    時代金融(2016年27期)2016-11-25 17:51:36
    前綴字母為特征在維吾爾語文本情感分類中的研究
    中藥湯劑聯(lián)合中藥足浴及耳穴壓豆治療慢性心力衰竭的臨床觀察
    冠心病心力衰竭應(yīng)用美托洛爾聯(lián)合曲美他嗪治療的療效分析
    基于支持向量機的金融數(shù)據(jù)分析研究
    啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲精品乱久久久久久| 久久久久视频综合| 91麻豆av在线| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久久久久免费视频了| 黄片播放在线免费| 美女高潮到喷水免费观看| 久久中文看片网| 国产xxxxx性猛交| 亚洲av美国av| 性色av乱码一区二区三区2| av网站免费在线观看视频| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产精品 国内视频| 18禁美女被吸乳视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 欧美国产精品一级二级三级| 日本vs欧美在线观看视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 视频区图区小说| 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品久久久久久久久久免费视频 | x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品国产一区二区精华液| 在线国产一区二区在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 热99国产精品久久久久久7| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产99白浆流出| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 999精品在线视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品久久电影中文字幕 | 亚洲色图av天堂| 国产色视频综合| 国产淫语在线视频| 91大片在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人系列免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品电影一区二区在线| 国产一区在线观看成人免费| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 免费人成视频x8x8入口观看| svipshipincom国产片| 精品国产国语对白av| 亚洲精品中文字幕在线视频| 免费在线观看完整版高清| 一夜夜www| 99热国产这里只有精品6| 久久午夜综合久久蜜桃| 在线十欧美十亚洲十日本专区| www.自偷自拍.com| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美日韩黄片免| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久久精品免费免费高清| 亚洲九九香蕉| bbb黄色大片| 精品久久久久久久久久免费视频 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 午夜福利一区二区在线看| av有码第一页| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久精品国产a三级三级三级| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲精品自拍成人| 最近最新中文字幕大全电影3 | 丁香六月欧美| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久午夜亚洲精品久久| 99国产精品一区二区三区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 午夜视频精品福利| 久久久久久久久免费视频了| 午夜91福利影院| 国产精品久久久久久精品古装| 18禁国产床啪视频网站| 香蕉国产在线看| 高清在线国产一区| 妹子高潮喷水视频| 国产午夜精品久久久久久| 午夜精品在线福利| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 在线观看免费高清a一片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲男人天堂网一区| 丝袜人妻中文字幕| 黄色怎么调成土黄色| 老司机亚洲免费影院| 精品亚洲成国产av| 精品福利永久在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产成人精品在线电影| 首页视频小说图片口味搜索| 国产精品98久久久久久宅男小说| 宅男免费午夜| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美国产精品一级二级三级| 久久久精品区二区三区| videosex国产| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲七黄色美女视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 1024香蕉在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 久久国产精品人妻蜜桃| 999精品在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 国产精品偷伦视频观看了| 人成视频在线观看免费观看| 1024香蕉在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 一级毛片精品| 老鸭窝网址在线观看| 国产不卡av网站在线观看| ponron亚洲| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品久久久精品久久久| 少妇 在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 十八禁人妻一区二区| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av熟女| 色尼玛亚洲综合影院| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 男女午夜视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品偷伦视频观看了| 免费在线观看日本一区| 午夜影院日韩av| 一级片免费观看大全| av一本久久久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产三级黄色录像| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品国产高清国产av | 国产激情欧美一区二区| 精品久久久久久,| 视频在线观看一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av中文乱码字幕在线| 满18在线观看网站| 99精品在免费线老司机午夜| 久久亚洲精品不卡| 免费在线观看亚洲国产| 一本大道久久a久久精品| 午夜福利乱码中文字幕| 99热国产这里只有精品6| 超碰成人久久| 欧美黑人欧美精品刺激| 操美女的视频在线观看| 在线观看www视频免费| 亚洲精品国产精品久久久不卡| aaaaa片日本免费| 国产精品国产高清国产av | 咕卡用的链子| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av片东京热男人的天堂| 国产99白浆流出| 极品教师在线免费播放| 人人澡人人妻人| 天堂俺去俺来也www色官网| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费在线观看日本一区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 美国免费a级毛片| 久久久精品免费免费高清| 在线观看日韩欧美| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 男女床上黄色一级片免费看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美成人午夜精品| 18禁美女被吸乳视频| 成人影院久久| tube8黄色片| 91国产中文字幕| 美国免费a级毛片| 宅男免费午夜| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲全国av大片| 高清黄色对白视频在线免费看| 淫妇啪啪啪对白视频| 日本五十路高清| 亚洲国产欧美一区二区综合| 9191精品国产免费久久| 99精品欧美一区二区三区四区| aaaaa片日本免费| 又紧又爽又黄一区二区| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲av成人av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 欧美日本中文国产一区发布| 中文欧美无线码| 很黄的视频免费| 最近最新免费中文字幕在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 大香蕉久久成人网| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美黑人精品巨大| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久亚洲真实| 操美女的视频在线观看| 窝窝影院91人妻| 在线观看免费视频日本深夜| 一边摸一边做爽爽视频免费| 丝瓜视频免费看黄片| 精品久久久久久,| 国产一卡二卡三卡精品| 国产免费现黄频在线看| 午夜亚洲福利在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 日本vs欧美在线观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费观看精品视频网站| 看黄色毛片网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美黑人欧美精品刺激| 男女下面插进去视频免费观看| 午夜福利在线观看吧| 久久久国产成人精品二区 | 大片电影免费在线观看免费| 伦理电影免费视频| 91老司机精品| 在线观看舔阴道视频| 9热在线视频观看99| 三上悠亚av全集在线观看| 精品人妻在线不人妻| 国产精品一区二区在线观看99| 天堂√8在线中文| 国产免费现黄频在线看| 国产亚洲精品久久久久5区| 夜夜爽天天搞| 欧美日韩成人在线一区二区| 在线观看日韩欧美| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久人妻av系列| 国产激情欧美一区二区| 在线观看66精品国产| 国产深夜福利视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 超碰97精品在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲男人天堂网一区| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美日韩一级在线毛片| 最近最新中文字幕大全电影3 | xxxhd国产人妻xxx| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日韩欧美三级三区| 中国美女看黄片| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品乱码一区二三区的特点 | av网站在线播放免费| 91在线观看av| 丝瓜视频免费看黄片| 捣出白浆h1v1| 一级作爱视频免费观看| 免费在线观看日本一区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产一卡二卡三卡精品| 日韩大码丰满熟妇| 国产人伦9x9x在线观看| 成年版毛片免费区| 国产高清激情床上av| 日韩人妻精品一区2区三区| 午夜免费鲁丝| 一二三四在线观看免费中文在| 国产免费av片在线观看野外av| 久久亚洲真实| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久国产精品影院| 人妻 亚洲 视频| 亚洲五月天丁香| av天堂久久9| 一级黄色大片毛片| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 欧美黄色淫秽网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产av又大| 国产在线精品亚洲第一网站| 丰满饥渴人妻一区二区三| 午夜免费观看网址| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品国产一区二区三区四区第35| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品福利观看| 国产不卡一卡二| 男女之事视频高清在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 成人永久免费在线观看视频| 丰满的人妻完整版| av超薄肉色丝袜交足视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久国产精品影院| 亚洲视频免费观看视频| 日韩欧美免费精品| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| www.自偷自拍.com| 女性生殖器流出的白浆| 男人的好看免费观看在线视频 | av在线播放免费不卡| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 中文欧美无线码| 最近最新中文字幕大全电影3 | 色老头精品视频在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 人人妻人人澡人人看| 欧美日韩av久久| 美女高潮到喷水免费观看| 成人三级做爰电影| 久久久久久久国产电影| 老司机影院毛片| 欧美国产精品一级二级三级| 好男人电影高清在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 99国产精品99久久久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美色视频一区免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲熟妇熟女久久| 校园春色视频在线观看| 男人舔女人的私密视频| 麻豆av在线久日| 无限看片的www在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99久久综合精品五月天人人| 三上悠亚av全集在线观看| 免费看十八禁软件| 热re99久久国产66热| 亚洲精品一二三| 热99久久久久精品小说推荐| 三级毛片av免费| 一级黄色大片毛片| 99精国产麻豆久久婷婷| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| videos熟女内射| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲avbb在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久中文字幕一级| 精品久久久久久久久久免费视频 | 午夜免费鲁丝| 国产不卡一卡二| bbb黄色大片| av免费在线观看网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 校园春色视频在线观看| 男人舔女人的私密视频| 日韩大码丰满熟妇| 欧美乱色亚洲激情| 深夜精品福利| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩欧美免费精品| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美在线黄色| 99riav亚洲国产免费| 怎么达到女性高潮| 日本五十路高清| 两性夫妻黄色片| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 女人久久www免费人成看片| 日韩欧美在线二视频 | 很黄的视频免费| 免费在线观看影片大全网站| 久久亚洲真实| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 黄片小视频在线播放| 91麻豆av在线| 国产精品综合久久久久久久免费 | 一级作爱视频免费观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | av欧美777| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美乱码精品一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 黑人猛操日本美女一级片| 精品亚洲成a人片在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 高清欧美精品videossex| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产97色在线日韩免费| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久精品91无色码中文字幕| 高清欧美精品videossex| av有码第一页| 搡老乐熟女国产| 午夜福利欧美成人| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美日韩av久久| 黑丝袜美女国产一区| 日日爽夜夜爽网站| 午夜免费观看网址| 欧美另类亚洲清纯唯美| 91字幕亚洲| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一级片免费观看大全| 高清av免费在线| 亚洲精品在线观看二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 日韩视频一区二区在线观看| 国产1区2区3区精品| 日韩欧美三级三区| 黑人猛操日本美女一级片| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产成人精品久久二区二区91| 老司机深夜福利视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 午夜91福利影院| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产99久久九九免费精品| 亚洲久久久国产精品| 欧美中文综合在线视频| tube8黄色片| 99香蕉大伊视频| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久精品国产综合久久久| 一二三四社区在线视频社区8| 中文字幕最新亚洲高清| 两个人免费观看高清视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 中文字幕制服av| 后天国语完整版免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 男女免费视频国产| 亚洲欧美一区二区三区久久| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 黄色丝袜av网址大全| 精品久久久久久,| 国产亚洲欧美98| videos熟女内射| 久99久视频精品免费| 中文字幕制服av| 69精品国产乱码久久久| 亚洲精品在线美女| 亚洲人成电影观看| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99国产精品一区二区蜜桃av | videosex国产| 91精品国产国语对白视频| 久久久水蜜桃国产精品网| av国产精品久久久久影院| 国产一区二区三区综合在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 久久精品国产清高在天天线| svipshipincom国产片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 涩涩av久久男人的天堂| 操美女的视频在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲少妇的诱惑av| e午夜精品久久久久久久| 飞空精品影院首页| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 超碰97精品在线观看| 香蕉国产在线看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久性视频一级片| 婷婷成人精品国产| 一区在线观看完整版| 少妇粗大呻吟视频| 成人黄色视频免费在线看| 婷婷成人精品国产| 久久久国产成人免费| 亚洲全国av大片| 黄色片一级片一级黄色片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线观看免费午夜福利视频| www.自偷自拍.com| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产在线一区二区三区精| 人人妻人人澡人人看| av线在线观看网站| 美女 人体艺术 gogo| 日韩人妻精品一区2区三区| 午夜91福利影院| 亚洲九九香蕉| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲熟女毛片儿| 成人手机av| 午夜精品国产一区二区电影| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| tube8黄色片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 宅男免费午夜| 精品国内亚洲2022精品成人 | 在线观看免费午夜福利视频| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 99热网站在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看 | 亚洲人成电影免费在线| 精品电影一区二区在线| 日本wwww免费看| 村上凉子中文字幕在线| 欧美一级毛片孕妇| 在线观看免费视频网站a站| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 国产xxxxx性猛交| √禁漫天堂资源中文www| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲在线自拍视频| 亚洲熟妇熟女久久| 热re99久久国产66热| 国产精品av久久久久免费| 日韩免费高清中文字幕av| 满18在线观看网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久久久国内视频| 妹子高潮喷水视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久久久久久国产电影| 操美女的视频在线观看| 日本欧美视频一区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产不卡av网站在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 90打野战视频偷拍视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 久久香蕉激情| 国产日韩欧美亚洲二区| 校园春色视频在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 在线观看免费高清a一片| 中文字幕人妻丝袜制服| 一级黄色大片毛片| 免费观看a级毛片全部| 久久久久久人人人人人| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品二区激情视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久中文字幕人妻熟女| 九色亚洲精品在线播放| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲精品在线美女| 日本一区二区免费在线视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 在线免费观看的www视频| 日日爽夜夜爽网站| 天堂中文最新版在线下载| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 中文欧美无线码| 极品少妇高潮喷水抽搐| 伦理电影免费视频| 国产精品九九99| 757午夜福利合集在线观看| 国产成人影院久久av| 三上悠亚av全集在线观看| 久久久久视频综合| 宅男免费午夜|