慢性心力衰竭病人血清單核細(xì)胞表達(dá)與腎功能及疾病進(jìn)展的關(guān)系

摘要 目的：探討慢性心力衰竭病人血清單核細(xì)胞表達(dá)與腎功能及疾病進(jìn)展的關(guān)系。方法：選取2022年1月—12月于石家莊市第三醫(yī)院住院治療的慢性心力衰竭，并在腎內(nèi)科診斷為慢性腎臟疾?。–KD）的病人44例作為CKD組，根據(jù)估算腎小球?yàn)V過(guò)率（eGFR）將病人分為CKD 2～3期組［eGFR 30～90 mL/（min·1.73 m²），22例］和CKD 4～5期組［eGFR＜30 mL/（min·1.73 m²），22例］。另選取20例未合并腎功能不全的慢性心力衰竭病人作為對(duì)照組。流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同單核細(xì)胞亞群的單核細(xì)胞-血小板計(jì)數(shù)聚集物（MPAs）的比例，包括經(jīng)典CD₁₄^＋＋CD₁₆^－（CM）、中間CD₁₄^＋＋CD₁₆^＋（IM）和非經(jīng)典CD₁₄^＋CD₁₆^＋＋（NCM）單核細(xì)胞。收集病人的臨床資料，采用Pearson法分析MPAs與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性。生成受試者工作特征（ROC）曲線分析各指標(biāo)的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果：與對(duì)照組比較，CKD 2～3期組和CKD 4～5期組IM較高（P＜0.05）；與CKD 2～3期組比較，CKD 4～5期組IM較高（P＜0.05）。3組CM、NCM比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。CKD 4～5期中合并CM的MPAs比例高于CKD 2～3期組和對(duì)照組（P＝0.007）。CKD 2～3期組中合并NCM的MPAs比例高于CKD 4～5期組和對(duì)照組（P＜0.05）。CKD 4～5期組中合并IM的MPAs比例高于CKD 2～3期組和對(duì)照組（，P＜0.05），CKD 2～3期組中合并IM的MPAs比例高于對(duì)照組（P＜0.05）。隨著CKD病情的加重，合并IM的MPAs比例明顯增加。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MPAs與血清肌酐呈正相關(guān)（r＝0.449，P＜0.05），與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.757，P＜0.05）；合并IM的MPAs與血清肌酐呈正相關(guān)（r＝0.519，P＜0.05），與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.659，P＜0.05）。MPAs預(yù)測(cè)CKD嚴(yán)重程度的ROC曲線下面積（AUC）為0.839［95%CI（0.739，0.938），P＜0.05］；合并IM的MPAs預(yù)測(cè)CKD嚴(yán)重程度的AUC為0.931［95%CI（0.873，0.990），P＜0.05］。結(jié)論：MPAs可能在CKD的發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可作為監(jiān)測(cè)疾病嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)標(biāo)志。

關(guān)鍵詞 慢性心力衰竭；慢性腎臟疾??；單核細(xì)胞；腎功能；單核細(xì)胞-血小板計(jì)數(shù)聚集物

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.21.021

基金項(xiàng)目 2022年度河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究課題計(jì)劃（No.20220199）

作者單位 1.石家莊市第三醫(yī)院（石家莊 050000），E-mail：fhcf7574@163.com；2.河北省胸科醫(yī)院

引用信息 安然，韓建妙，師志芳，等.慢性心力衰竭病人血清單核細(xì)胞表達(dá)與腎功能及疾病進(jìn)展的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（21）：3969-3973.

慢性腎臟疾?。╟hronic kidney disease，CKD）的患病率在世界范圍內(nèi)不斷增加^［1］。在CKD病人中，大多數(shù)死于心血管事件^［2］。研究表明，與非腎病病人相比，腎病病人動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的演變和組成不同^［3］。單核細(xì)胞在T淋巴細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的動(dòng)態(tài)作用中發(fā)揮核心作用^［4］。通過(guò)脂多糖受體CD₁₄和Fcγ受體CD₁₆的存在或缺失，單核細(xì)胞可以分化為表型和功能不同的細(xì)胞類型，包括經(jīng)典CD₁₄^＋＋CD₁₆^－（CM）、中間CD₁₄^＋＋CD₁₆^＋（IM）和非經(jīng)典CD₁₄^＋CD₁₆^＋＋（NCM）單核細(xì)胞^［5］。這些亞群為單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞發(fā)展的經(jīng)典步驟，因?yàn)槠湫纬伞芭菽?xì)胞”的典型外觀，并通過(guò)生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和酶（即金屬蛋白酶、組織因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子和血小板計(jì)數(shù)黏附因子）維持炎癥過(guò)程^［6］。本研究探討合并和不合并腎功能不全的慢性心力衰竭病人血清單核細(xì)胞亞群的變化，并分析其分布改變與CKD的不同階段和嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2022年1月—12月于石家莊市第三醫(yī)院住院治療的慢性心力衰竭、并在腎內(nèi)科診斷為CKD的病人44例作為CKD組，并根據(jù)《2012慢性腎臟病評(píng)估和管理臨床實(shí)踐指南》^［7］，通過(guò)血清肌酐和估算腎小球?yàn)V過(guò)率（eGFR）評(píng)估腎功能，其中，納入病人的血清肌酐水平和eGFR水平穩(wěn)定，未出現(xiàn)急性腎損傷。根據(jù)eGFR將病人分為CKD 2～3期組［eGFR 30～90 mL/（min·1.73 m²），22例］和CKD 4～5期組［eGFR＜30 mL/（min·1.73 m²），22例］，CKD5期病人尚未接受腎臟替代治療。另選取20例未合并CKD的慢性心力衰竭病人作為對(duì)照組。人口統(tǒng)計(jì)和病史通過(guò)直接訪談和電子病歷數(shù)據(jù)庫(kù)獲得。排除：1）年齡＜18歲的病人；2）處于感染急性期的病人；3）患有癌癥、肝硬化、自身免疫系統(tǒng)疾病和嚴(yán)重過(guò)敏性疾病的病人；4）合并深靜脈血栓形成的病人；5）不穩(wěn)定型心絞痛、非ST段抬高型心肌梗死、ST段抬高型心肌梗死和除慢性冠心病以外的嚴(yán)重疾病病人。所有病人均知情同意。本研究經(jīng)本院研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)［（2021）倫理審批第019號(hào)］。

1.2 方法

1.2.1 一般資料的收集

收集病人年齡、性別、清蛋白、三酰甘油、膽固醇、血清尿素、血清肌酐、血清尿酸、血清葡萄糖、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白和血小板計(jì)數(shù)等臨床資料。

1.2.2 單核細(xì)胞-血小板計(jì)數(shù)聚集物（monocyte-platelet aggregates，MPAs）檢測(cè)

通過(guò)直接靜脈穿刺將外周靜脈血采樣到含有3.2%檸檬酸鈉的試管中。在室溫下，將50 μL檸檬酸化全血與單克隆抗體一起孵育30 min。溶解紅細(xì)胞后，洗滌單核細(xì)胞，重懸，然后用等體積的0.5%多聚甲醛固定。采用CD_41a-PE（美國(guó)BD Biosciences公司）染色檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)，CD₁₄-FITC（美國(guó)BD Biosciences公司）和CD16-PEcy7（美國(guó)BD Biosciences公司）染色檢測(cè)單核細(xì)胞和單核細(xì)胞亞群。MPAs被鑒定為CD₁₄和CD_41a雙陽(yáng)性。單核細(xì)胞根據(jù)其在外周血單核細(xì)胞中的特征性前向散射光（FSC）/側(cè)向散射光（SSC）譜進(jìn)行門控，然后根據(jù)其CD₁₄表面表達(dá)在單核細(xì)胞門控中進(jìn)行鑒定。MPAs由CD_41a陽(yáng)性單核細(xì)胞代表。結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞的百分比表示。計(jì)算單核細(xì)胞中MPAs的百分比、單核細(xì)胞中MPAs與CM的百分比、單核細(xì)胞中MPAs與IM的百分比以及單核細(xì)胞中MPAs與NCM的百分比。采用流式細(xì)胞儀（美國(guó)BECKMAN COULTER公司）獲得數(shù)據(jù)，并使用自帶的FlowJo軟件進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。使用Kolmogorov-Smirnov擬合優(yōu)度測(cè)試對(duì)連續(xù)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布測(cè)試。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果報(bào)告為正態(tài)分布數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，通過(guò)ANOVA檢驗(yàn)對(duì)兩組以上的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。定性資料以例數(shù)、百分比（%）表示，采用χ²檢驗(yàn)。采用Pearson法分析MPAs與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性。生成受試者工作特征曲線（ROC）曲線分析各指標(biāo)的預(yù)測(cè)價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料比較

3組清蛋白、血清尿素、血清肌酐、血清尿酸、eGFR、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)、高血壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

2.2 單核細(xì)胞亞群比較

與對(duì)照組比較，CKD 2～3期組和CKD 4～5期組IM較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與CKD 2～3期組比較，CKD 4～5期組IM較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3組CM、NCM比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)圖1。

2.3 MPAs比較

CKD 4～5期組合并CM的MPAs比例［（1.02±0.52）%］高于CKD 2～3期組［（0.47±0.15）%］和對(duì)照組［（0.58±0.25）%］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝4.87，P＝0.007）。CKD 2～3期組合并NCM的MPAs比例［（4.41±2.51）%］高于CKD 4～5期組［（2.21±1.15）%］和對(duì)照組［（0.26±0.04）%］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝6.24，P＜0.05）。CKD 4～5期組合并IM的MPAs比例［（81.86±7.72）%］高于CKD 2～3期組［（65.37±11.00）%］和對(duì)照組［（28.84±6.73）%］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝6.02，P＜0.05），CKD 2～3期組合并IM的MPAs比例高于對(duì)照組（P＜0.05）。隨著CKD病情的加重，合并IM的MPAs比例明顯增加。詳見(jiàn)圖2、圖3。

2.4 MPAs與eGFR和血清肌酐的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MPAs與血清肌酐呈正相關(guān)（r＝0.449，P＜0.05），與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.757，P＜0.05）。不同單核細(xì)胞亞群MPAs與eGFR和血清肌酐的相關(guān)性結(jié)果顯示，合并IM的MPAs與血清肌酐呈正相關(guān)（r＝0.519，P＜0.05），與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.659，P＜0.05）。詳見(jiàn)圖4。

2.5 MPAs與CM、IM和NCM對(duì)慢性心力衰竭病人CKD嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值

MPAs預(yù)測(cè)CKD嚴(yán)重程度的曲線下面積（AUC）為0.839［95%CI（0.739，0.938），P＜0.05］；合并IM的MPAs預(yù)測(cè)CKD嚴(yán)重程度的AUC為0.931［95%CI（0.873，0.990），P＜0.05］。詳見(jiàn)圖5。

3 討 論

單核細(xì)胞在疾病的免疫炎癥中發(fā)揮重要作用，是腎臟疾病炎癥和纖維化過(guò)程的主要驅(qū)動(dòng)因素^［8］。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，CKD組的IM百分比更高，IM和CKD疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。隨著CKD的發(fā)展，IM的比例逐漸升高，表明單核細(xì)胞，尤其是IM對(duì)慢性心力衰竭病人CKD的發(fā)展可能具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

血小板不僅在致病性血栓形成中發(fā)揮重要作用，而且通過(guò)與單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用在免疫炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮重要作用^［9］。MPAs是單核細(xì)胞和血小板活化的敏感標(biāo)志，導(dǎo)致細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞黏附分子表達(dá)增加^［10］。研究表明，MPAs有助于疾病發(fā)展過(guò)程中炎癥損傷的傳播^［9］。本研究結(jié)果顯示，在慢性心力衰竭合并CKD病人中，循環(huán)MPAs的比例明顯高于不合并CKD的對(duì)照組。此外，在CKD病人中，MPAs的比例在CKD 4～5期病人中更高。CKD病人中MPAs的比例與疾病嚴(yán)重程度顯著相關(guān)。研究表明，在心血管疾病、炎癥性腸病、腦卒中、糖尿病、哮喘和人類免疫缺陷病毒疾病等高度免疫炎癥和易于形成血栓的疾病中，MPAs升高^［11-12］。MPAs有可能成為預(yù)測(cè)膿毒癥病人死亡率的生物標(biāo)志物^［13］。在CKD病人中發(fā)現(xiàn)的加速動(dòng)脈粥樣硬化與炎癥、血小板和單核細(xì)胞活化及內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)。此外，持續(xù)性炎癥反應(yīng)在CKD病人中非常普遍，并與并發(fā)癥和疾病惡化相關(guān)^［6］。因此，CKD病人MPAs升高不僅突出了免疫性炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化之間的整體重疊，還與CKD的發(fā)展相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，MPAs在CKD中的比例不同于先前文獻(xiàn)中報(bào)道的其他疾病^［11-13］，可能的原因與不同的疾病有關(guān)。本研究結(jié)果表明，CKD病人血小板和單核細(xì)胞之間的串?dāng)_增加，并為慢性心力衰竭合并CKD病人動(dòng)脈粥樣硬化和CVD的高風(fēng)險(xiǎn)提供了新的見(jiàn)解。

為了研究MPAs在CKD中的病理作用，本研究分析了MPAs形成中不同單核細(xì)胞亞群的分布，其中，CKD 4～5期組中合并CM的MPAs比例顯著升高，而CKD病人，尤其是CKD 2～3期病人中合并NCM的MPAs比例顯著升高。NCM被認(rèn)為比CM和IM更成熟，與組織巨噬細(xì)胞有許多相似之處^［14］。推測(cè)具有NCM的MPAs可以促進(jìn)CKD進(jìn)展中的炎癥反應(yīng)，特別是在CKD的早期階段，是CKD炎癥反應(yīng)的早期標(biāo)志。CM的特征是與血管生成、傷口愈合和凝血相關(guān)的基因的高表達(dá)，提示其在組織修復(fù)中有重要作用^［14］。

合并IM的MPAs與疾病嚴(yán)重程度顯著相關(guān)。在MPAs中，合并IM的MPAs顯著增加是CKD疾病嚴(yán)重程度的主要標(biāo)志，IM表達(dá)是對(duì)內(nèi)皮黏附性、抗原呈遞、血管生成和活性氧產(chǎn)生具有優(yōu)勢(shì)的標(biāo)記物^［15］。因此，IM被認(rèn)為是炎癥的積極參與者，而與IM形成的MPAs可能反映了其促炎活性的標(biāo)記物。MPAs的功能與其單核細(xì)胞亞型密切相關(guān)。研究表明，MPAs的形成導(dǎo)致單核細(xì)胞中CD₁₆表達(dá)的顯著上調(diào)，與CD₁₆陰性細(xì)胞比較，單核細(xì)胞具有更高的促炎活性^［10］。此外，CD₁₆陽(yáng)性單核細(xì)胞比CD₁₆陰性細(xì)胞更容易黏附到內(nèi)皮細(xì)胞上，從而產(chǎn)生了MPAs與CD₁₆陽(yáng)性單核細(xì)胞遷移到炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化部位的潛在機(jī)制^［16］。在彌漫性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化疾病病人中，合并IM的MPAs增加，并通過(guò)涉及微血管內(nèi)皮功能障礙而成為加速冠狀動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的重要因素^［17］。合并IM的循環(huán)MPAs增加可能有利于急性事件的發(fā)展，并與病人冠狀動(dòng)脈疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)^［18］。因此，合并IM的循環(huán)MPAs增加表明潛在的心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)更高。在本研究中，合并IM的MPAs對(duì)疾病嚴(yán)重程度有更好的預(yù)測(cè)價(jià)值，是CKD疾病嚴(yán)重程度的可靠指標(biāo)。

綜上所述，本研究結(jié)果強(qiáng)調(diào)了慢性心力衰竭合并CKD病人血小板和炎性單核細(xì)胞之間的相互作用，并證明了MPAs可能在CKD的發(fā)展中起重要作用，可作為監(jiān)測(cè)疾病嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)標(biāo)志。CKD狀態(tài)改變的相關(guān)性可在未來(lái)的研究中進(jìn)一步探討。

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（收稿日期：2023-05-29）

（本文編輯 鄒麗）