PKC-α介導(dǎo)的線粒體功能障礙在妊娠糖尿病致胚胎神經(jīng)管缺陷中的機制研究

摘要 目的：探討蛋白激酶C-α（PKC-α）介導(dǎo)的線粒體功能障礙在妊娠糖尿病致胚胎神經(jīng)管缺陷（NTD）中的作用。方法：將雌性C57BL/6J小鼠隨機分為對照組、NTD組、NTD＋sh-PKC-α組，每組6只。除對照組外，NTD組、NTD＋sh-PKC-α組建立糖尿病胚胎病小鼠模型。NTD＋sh-PKC-α組分別在胚胎第1天（E1）、第4天（E4）和第8天（E8）時，經(jīng)尾靜脈向小鼠注射100 μL攜帶sh-PKC-α的慢病毒（1×10⁸ TU/mL）。在第11.5天（E11.5）時，從子宮中解剖出胚胎進(jìn)行分析。采用透射電子顯微鏡觀察神經(jīng)管中線粒體。采用蛋白免疫印跡法（Western Blot）分析胚胎神經(jīng)管中PKC-α、抗微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）和抗溶酶體相關(guān)膜蛋白2（LAMP2）蛋白表達(dá)。體外構(gòu)建PKC-α敲低C17.2小鼠神經(jīng)干細(xì)胞，并在低（5 mmol/L）或高（25 mmol/L）葡萄糖條件下培養(yǎng)，采用免疫熒光染色檢測細(xì)胞自噬體變化情況。結(jié)果：在NTD組中，胚胎神經(jīng)管中線粒體腫脹，嵴消失。與對照組相比，NTD組胚胎神經(jīng)管中LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），PKC-α蛋白表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）。通過沉默小鼠胚胎神經(jīng)管中PKC-α表達(dá)，胚胎中LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)增加（P＜0.05）。此外，NTD＋sh-PKC-α組小鼠胚胎中的NTD發(fā)生率低于NTD組（P＜0.01）。在高糖條件下，C17.2神經(jīng)干細(xì)胞中LC3Ⅱ、LAMP2蛋白表達(dá)水平和Cyto-ID染色點的數(shù)量均低于正常葡萄糖條件下水平（P＜0.05）。PKC-α蛋白敲低增加了高糖條件下的LC3Ⅱ、LAMP2蛋白表達(dá)水平和Cyto-ID染色點的數(shù)量（P＜0.05）。結(jié)論：PKC-α介導(dǎo)的線粒體功能障礙與母體糖尿病誘導(dǎo)的NTD胚胎相關(guān)，通過沉默母體PKC-α減弱了神經(jīng)管自噬抑制導(dǎo)致的NTD形成。

關(guān)鍵詞 妊娠糖尿病；蛋白激酶C-α；線粒體；神經(jīng)管缺陷；自噬；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.21.011

Mechanism of PKC-α Mediated Mitochondrial Dysfunction in Fetal Neural Tube Defects Caused by Gestational Diabetes Mellitus

PEI Qiaoli， ZHU Lihong， XU Shan， WANG Min， LI Wenting， CUI Zhangxia， DU Dongqing， ZHANG Xiaocai

Second Affiliated Hospital of Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine， Xianyang 712000， Shaanxi， China

Corresponding Author ZHANG Xiaocai， E-mail： skyjkl998@163.com

Abstract Objective：To explore the effect of protein kinase C-α（PKC-α） mediated mitochondrial dysfunction on fetal neural tube defects（NTD） caused by gestational diabetes.Methods：Female C57BL/6J mice were randomly divided into control group，NTD group and NTD＋sh-PKC-α group，with 6 mice in each group.In addition to control group，in NTD group and NTD＋sh-PKC-α group，diabetic embryonism mouse model were established.Mice in the NTD＋sh-PKC-α group were injected with 100 μL carrying sh-PKC-α lentvirus（1×10⁸ TU /mL） through the tail vein at embryonic day 1（E1），day 4（E4），and day 8（E8），respectively.At day 11.5（E11.5），the embryos were dissected from the uterus for analysis.Mitochondria in neural tube were observed by transmission electron microscope.The expression of PKC-α，anti-microtubule-associated protein 1 light chain 3（LC3） and anti-lysosomal associated membrane protein 2（LAMP2） in embryonic neural tubes were analyzed by Western Blot.PKC-α knockdown C17.2 mouse neural stem cells were constructed in vitro and cultured under low（5 mmol/L） or high（25 mmol/L） glucose conditions.The changes of autophagosomes were detected by immunofluorescence staining.Results：In the NTD group，the mitochondria in the embryonic neural tube swelled and the ridge disappeared.Compared with the control group，the expressions of LC3Ⅱ and LAMP2 proteins in the fetal neural tube of NTD group decreased（P＜0.05），and PKC-α protein up-regulated（P＜0.01）.By silencing the expression of PKC-α in the neural tube of mouse embryos，the expression of LC3Ⅱ and LAMP2 proteins in the embryos increased（P＜0.05）.In addition，the incidence of NTD in NTD＋sh-PKC-α group was lower than that in NTD group（P＜0.01）.The expression levels of LC3Ⅱ and LAMP2 protein and the number of Cyto-ID staining points in C17.2 neural stem cells were lower than those in normal glucose conditions（P＜0.05）.PKC-α protein knockdown increased the expression levels of LC3Ⅱ and LAMP2 protein and the number of Cyto-ID staining spots under high glucose condition（P＜0.05）.Conclusion：PKC-α mediated mitochondrial dysfunction is associated with maternal diabetes induced NTD embryos，and by silencing maternal PKC-α，it attenuates the formation of NTD resulting from neural tube autophagy inhibition.

Keywords gestational diabetes; protein kinase C-α; mitochondria; neural tube defects; autophagy; experimental study

基金項目 陜西省衛(wèi)生健康科研基金項目（No.2018D085）

作者單位 陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院（陜西咸陽 712000）

通訊作者 張小菜，E-mail：skyjkl998@163.com

引用信息 裴巧麗，朱麗紅，徐珊，等.PKC-α介導(dǎo)的線粒體功能障礙在妊娠糖尿病致胚胎神經(jīng)管缺陷中的機制研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（21）：3919-3925.

神經(jīng)管缺陷（neural tube defects，NTD）是導(dǎo)致嬰兒死亡和嚴(yán)重殘疾的中樞神經(jīng)系統(tǒng)先天性畸形，給患兒及其家庭和社會帶來沉重負(fù)擔(dān)^［1］。目前，對NTD的發(fā)病機制尚未明確^［2］。因此，深入研究NTD的發(fā)病機制，對于制定科學(xué)的防治方法，降低畸形率和致殘率具有重要意義。線粒體是為細(xì)胞提供能量和緩沖細(xì)胞質(zhì)鈣的重要細(xì)胞器。研究表明，神經(jīng)發(fā)育需要結(jié)構(gòu)良好的線粒體來維持神經(jīng)系統(tǒng)功能^［3］。且已有研究表明，線粒體損傷與NTD相關(guān)^［4］。自噬是一種通過溶酶體機制促進(jìn)有毒蛋白質(zhì)和受損細(xì)胞器消除的主要細(xì)胞途徑^［5］。自噬功能障礙與NTD之間有關(guān)聯(lián)^［6］。線粒體自噬是一種選擇性形式的自噬，可介導(dǎo)有缺陷的線粒體的消除，并且是選擇性去除整個線粒體和控制線粒體質(zhì)量的唯一已知方法^［7］。促進(jìn)線粒體自噬可以緩解小鼠外傷性腦損傷引起的神經(jīng)功能缺損的發(fā)展^［8］。蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）家族包含一組在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用的多功能絲氨酸/蘇氨酸激酶，調(diào)控不同的生理和病理功能，包括細(xì)胞增殖、分化和凋亡^［9］。PKC-α是PKC家族中研究最深入的成員，是自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。研究發(fā)現(xiàn)，PKC-α對于通過線粒體自噬處理有缺陷的線粒體至關(guān)重要^［10］。此外，一項微陣列研究表明，在丙戊酸誘導(dǎo)的NTD小鼠模型中PKC-α上調(diào)^［11］。因此，本研究使用糖尿病胚胎病小鼠模型探討胚胎線粒體自噬和PGC-1α表達(dá)，并通過神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)一步驗證PGC-1α對線粒體自噬的調(diào)節(jié)作用，旨在為NTD的發(fā)病機制提供新的見解。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審批通過，編號：LLZM-08201。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

18只雌性C57BL/6J小鼠（6～8周齡）購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。小鼠在標(biāo)準(zhǔn)條件［溫度（22±1）℃；濕度55%～60%；12 h明暗循環(huán)］下飼養(yǎng)，可自由獲取水和食物。適應(yīng)1周后，將小鼠隨機分為對照組、NTD組、NTD＋Lenti-sh-PKC-α（sh-PKC-α）組，每組6只。除對照組外，其余兩組參照文獻(xiàn)［12］方法建立糖尿病胚胎病小鼠模型。具體操作方法：雌性小鼠靜脈注射75 mg/kg鏈脲佐菌素（STZ），持續(xù)2 d，以誘發(fā)妊娠糖尿病。糖尿病定義為12h空腹血糖水平≥13.9 mmol/L。將這些雌性糖尿病小鼠與非糖尿病雄性小鼠交配。在對照組中，雌性小鼠注射等量的溶媒治療。NTD＋sh-PKC-α組分別在胚胎第1天（E1）、第4天（E4）和第8天（E8）時，經(jīng)尾靜脈注射100 μL攜帶sh-PKC-α的慢病毒（1×10⁸ TU/mL）。在第11.5天（E11.5）時，將小鼠安樂死，并從子宮中解剖出胚胎進(jìn)行分析。

1.2 透射電子顯微鏡（TEM）

通過透射電鏡觀察線粒體結(jié)構(gòu)。收集E11.5時的胚胎神經(jīng)管，立即用2.5%戊二醛固定，然后用1%四氧化鋨固定。在80 kV下操作H-7650透射電子顯微鏡（日本Hitachi公司）觀察神經(jīng)上皮線粒體。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

C17.2小鼠神經(jīng)干細(xì)胞購自美國ATCC，接種在含有10%胎牛血清（FBS）、100 U/mL青霉素和100 mg/mL鏈霉素的Dulbecco改良培養(yǎng)基（DMEM）（5 mmol/L葡萄糖）中培養(yǎng)。為了敲除PKC-α，用慢病毒攜帶靶向小鼠PKC-α的shRNA［GGACCAAGTTAGGTTCCAGCTAA，漢恒生物科技（上海）有限公司，Lenti-sh-PKC-α］或?qū)φ眨↙enti-sh-NC）轉(zhuǎn)染細(xì)胞12 h。然后將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在低濃度葡萄糖（5mmol/L）或高濃度葡萄糖（25 mmol/L）條件下培養(yǎng)，48 h后收集細(xì)胞用于分析。

1.4 免疫熒光染色

收集上述處理的細(xì)胞。將Cyto-ID綠色檢測試劑1 μL添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中。Cyto-ID染色后，將細(xì)胞與4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）孵育10 min以進(jìn)行細(xì)胞核染色。使用熒光倒置顯微鏡捕獲熒光信號，并使用Image J進(jìn)行量化。

1.5 蛋白免疫印跡法（Western Blot）分析

使用放射免疫沉淀（RIPA）緩沖液（北京Solarbio公司）從小鼠胚胎神經(jīng)管或C17.2細(xì)胞中提取總蛋白。通過二辛可寧酸測定法測定蛋白質(zhì)濃度。蛋白質(zhì)通過8%～12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并電泳轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。用5%脫脂牛奶溶液封閉后，將膜與一抗在4 ℃下孵育過夜。在實驗中應(yīng)用了以下一抗：抗微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）（美國Abcam公司；1∶1 000）、抗溶酶體相關(guān)膜蛋白2（LAMP2）（美國ProteinTech公司；1∶1 000）、抗PKC-α（美國Signaling Technology公司；1∶1 000）和抗甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）（ProteinTech；1∶5 000）。第2天，洗滌膜，并與相應(yīng)的二抗（ProteinTech；1∶5 000）在室溫下孵育1.5 h。應(yīng)用增強型化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑（美國Millipore公司）檢測蛋白質(zhì)-抗體相互作用，使用C300化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)（美國Azure Biosystems公司）對其進(jìn)行可視化。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，采用t檢驗，通過單因素方差分析檢驗得出不同治療組之間PKC-α表達(dá)差異。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組NTD小鼠神經(jīng)管中的線粒體自噬比較

透射電鏡檢測E11.5小鼠胚胎神經(jīng)管線粒體形態(tài)。對照組胚胎神經(jīng)元核膜清晰完整，核周線粒體嵴結(jié)構(gòu)清晰可見。在NTD組中，線粒體腫脹，嵴消失。通過蛋白質(zhì)印跡法進(jìn)一步分析了自噬標(biāo)志物L(fēng)C3和溶酶體特異性標(biāo)志物L(fēng)AMP2的表達(dá)。與對照組相比，NTD組胚胎神經(jīng)管細(xì)胞中LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)均顯著降低（P＜0.05）。詳見圖1～圖5。

2.2 兩組小鼠神經(jīng)管中PKC-α表達(dá)比較

與對照組相比，NTD組小鼠胚胎神經(jīng)管細(xì)胞中PKC-α蛋白顯著上調(diào)（P＜0.01），表明PKC-α可能參與NTD的形成。詳見圖6、圖7。

2.3 PKC-α基因敲除對NTD的改善作用

為了確定PKC-α是否在糖尿病妊娠引起的NTD中起作用，通過尾靜脈注射sh-PKC-α來抑制PKC-α表達(dá)。通過蛋白質(zhì)印跡檢測證實在NTD組小鼠神經(jīng)管中出現(xiàn)PKC-α抑制。與NTD組相比，NTD＋sh-PKC-α組的LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜0.05）?；赑KC-α基因敲除恢復(fù)NTD小鼠神經(jīng)管中的自噬，研究進(jìn)一步探討了PKC-α基因敲除是否可以預(yù)防母體糖尿病條件下的胚胎畸形。結(jié)果顯示，與對照組相比，NTD組母體胚胎中NTD的發(fā)生率顯著增加（P＜0.001），而PKC-α基因敲除顯著降低了糖尿病妊娠小鼠胚胎中的NTD發(fā)生率（P＜0.01）。表明PKC-α基因敲除可改善母體糖尿病引起的NTD。詳見圖8～圖13、表1。

2.4 PKC-α敲低對高糖抑制的自噬影響

為了研究PKC-α抑制是否會恢復(fù)高葡萄糖條件下正常的自噬，使用特定的shRNA來抑制PKC-α的表達(dá)。免疫印跡顯示，sh-PKC-α降低了C17.2神經(jīng)干細(xì)胞中PKC-α蛋白水平（P＜0.05）。在正常葡萄糖條件下，C17.2神經(jīng)干細(xì)胞中LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)水平不受PKC-α蛋白敲低的影響。在高糖條件下，C17.2神經(jīng)干細(xì)胞中LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)水平顯著低于正常葡萄糖條件下水平（P＜0.05）。PKC-α蛋白敲低顯著增加了高糖條件下的LC3Ⅱ和LAMP2蛋白表達(dá)水平（P＜0.05）。使用Cyto-ID染色方法檢測自噬體，結(jié)果顯示，在正常葡萄糖條件下，Cyto-ID染色點的數(shù)量在sh-NC轉(zhuǎn)染組和sh-PKC-α轉(zhuǎn)染組之間沒有差異。然而，在高葡萄糖條件下，sh-NC轉(zhuǎn)染組Cyto-ID染色點的數(shù)量顯著減少（P＜0.05），并且PKC-α敲低逆轉(zhuǎn)了Cyto-ID染色點減少（P＜0.05）。詳見圖14～圖17。

3 討 論

盡管在闡明NTD發(fā)病機制和治療方面取得了進(jìn)展，但目前NTD的治療方法有限。本研究有兩個主要發(fā)現(xiàn)。首先，在母體糖尿病引起的NTD胚胎中觀察到線粒體功能受損，并且自噬受到明顯抑制。第二，在NTD胚胎中觀察到PKC-α蛋白顯著上調(diào)，沉默PKC-α可以減弱母體糖尿病引起的自噬抑制并降低NTD胚胎發(fā)生率。

在胚胎發(fā)育過程中，維持健康和功能正常的線粒體網(wǎng)絡(luò)至關(guān)重要^［13］。線粒體是一種復(fù)雜的細(xì)胞器，并作為細(xì)胞動力來源參與調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，包括氧化還原信號、代謝穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞存活和細(xì)胞死亡^［7］。研究表明，無論是在最初的神經(jīng)發(fā)育過程中還是在成人神經(jīng)發(fā)生過程中，線粒體是決定神經(jīng)干細(xì)胞命運的關(guān)鍵細(xì)胞器^［14］。研究表明，母體糖尿病誘導(dǎo)的NTD胚胎中線粒體呼吸效率、三磷酸腺苷含量以及抗氧化酶活性降低，這可能導(dǎo)致高ROS水平和線粒體功能障礙^［15］。在本研究中，通過透射電鏡觀察到NTD胚胎的線粒體嵴模糊和線粒體腫脹，表明受損的線粒體可能無法有效消除。

自噬是一種溶酶體依賴性途徑，其在胚胎發(fā)育期間維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定并促進(jìn)細(xì)胞存活^［16］。在組織水平上，自噬參與細(xì)胞分化和組織形成^［16］。妊娠期母體糖尿病抑制神經(jīng)管的自噬，可能是糖尿病誘導(dǎo)NTD的主要原因^［17］。本研究闡明了母體糖尿病抑制神經(jīng)管自噬導(dǎo)致NTD形成的機制。LC3是一種廣泛分布于哺乳動物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中的可溶性蛋白質(zhì)。其中，LC3Ⅰ通過與磷脂酰乙醇胺結(jié)合形成LC3Ⅱ，其可作為自噬體的標(biāo)志物^［4］。在本研究中，與對照組胚胎相比，觀察到母體糖尿病誘導(dǎo)的NTD胚胎中LC3Ⅱ表達(dá)和溶酶體特異性標(biāo)志物L(fēng)AMP2下調(diào)，表明自噬受到抑制。

PKCα調(diào)節(jié)重要的生物過程，包括蛋白質(zhì)合成、維持細(xì)胞能量狀態(tài)、細(xì)胞生長、增殖和存活^［10］。研究表明，PKC抑制劑觸發(fā)自噬，而PKC激活劑抑制饑餓或雷帕霉素誘導(dǎo)的自噬^［18］。與PKC對自噬的抑制作用一致，本研究中體內(nèi)和體外證據(jù)支持PKC-α是自噬的負(fù)調(diào)節(jié)因子并介導(dǎo)母體糖尿病對自噬的抑制作用的假設(shè)。體內(nèi)研究結(jié)果表明，沉默PKC-α可恢復(fù)LC3Ⅱ和LAMP2表達(dá)，改善了母體糖尿病誘導(dǎo)的NTD形成。此外，體外結(jié)果顯示，采用特異性shRNA敲除C17.2細(xì)胞中PKC-α可增加LC3Ⅱ的豐度，并恢復(fù)高糖抑制的自噬體形成。神經(jīng)管中較高的基礎(chǔ)自噬活性可能是細(xì)胞存活所必需的，因為自噬損傷可誘導(dǎo)發(fā)育中神經(jīng)管細(xì)胞凋亡^［19］。本研究采用的C17.2細(xì)胞系可能無法真實反映胚胎神經(jīng)上皮的細(xì)胞生物學(xué)。該細(xì)胞系來源于新生兒小腦，其發(fā)育分化程度高于胚胎神經(jīng)形成期的神經(jīng)上皮。由于神經(jīng)上皮細(xì)胞的體積非常小，無法使用原代神經(jīng)管上皮細(xì)胞在體外進(jìn)行實驗。先前的研究已經(jīng)報道，高糖模擬母體糖尿病的體內(nèi)條件，觸發(fā)細(xì)胞應(yīng)激，抑制自噬，并誘導(dǎo)C17.2細(xì)胞凋亡^［20］。因此，C17.2細(xì)胞系適合當(dāng)前的研究。

綜上所述，本研究提供了母體糖尿病誘導(dǎo)NTD胚胎中自噬抑制和差異性PKC-α表達(dá)的證據(jù)，并發(fā)現(xiàn)沉默母體PKC-α減弱了神經(jīng)管自噬抑制導(dǎo)致的NTD形成。這些發(fā)現(xiàn)為NTD的發(fā)病機制提供了新的見解，并可能為NTD的潛在治療靶點提供理論支持。

參考文獻(xiàn)：

［1］STEELE J W，KIM S E，F(xiàn)INNELL R H.One-carbon metabolism and folate transporter genes：do they factor prominently in the genetic etiology of neural tube defects？［J］.Biochimie，2020，173：27-32.

［2］FACCHINETTI F，CAVALLI P，COPP A J，et al.An update on the use of inositols in preventing gestational diabetes mellitus（GDM） and neural tube defects（NTDs）［J］.Expert Opinion on Drug Metabolism amp; Toxicology，2020，16（12）：1187-1198.

［3］歐陽夢琪，王慶松.線粒體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)偶聯(lián)在認(rèn)知障礙相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用及研究進(jìn)展［J］.國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志，2019，46（2）：190-194.

［4］ZHANG L，DONG Y T，WANG W Z，et al.Ethionine suppresses mitochondria autophagy and induces apoptosis via activation of reactive oxygen species in neural tube defects［J］.Frontiers in Neurology，2020，11：242.

［5］徐靜尊，魯敏.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬及其交互作用影響內(nèi)皮細(xì)胞凋亡［J］.中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報，2019，35（3）：240-250.

［6］YE J H，TONG Y L，LV J S，et al.Rare mutations in the autophagy-regulating gene AMBRA1 contribute to human neural tube defects［J］.Human Mutation，2020，41（8）：1383-1393.

［7］LOU G F，PALIKARAS K，LAUTRUP S，et al.Mitophagy and neuroprotection［J］.Trends in Molecular Medicine，2020，26（1）：8-20.

［8］LIN C，LI N，CHANG H X，et al.Dual effects of thyroid hormone on neurons and neurogenesis in traumatic brain injury［J］.Cell Death amp; Disease，2020，11（8）：671.

［9］王文博，羅燦，吳志皎，等.青藤堿對PKC-α/NF-κB-p65通路的抑制作用及機制［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2020，40（11）：1583-1589;1602.

［10］WANG T Y，LIU C H，JIA L L.The roles of PKCs in regulating autophagy［J］.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology，2018，144（12）：2303-2311.

［11］YU J，MU J B，GUO Q，et al.Transcriptomic profile analysis of mouse neural tube development by RNA-Seq［J］.IUBMB Life，2017，69（9）：706-719.

［12］YANG P X，LI X Z，XU C，et al.Maternal hyperglycemia activates an ASK1-FoxO3a-caspase 8 pathway that leads to embryonic neural tube defects［J］.Science Signaling，2013，6（290）：ra74.

［13］PICKLES S，VIGIé P，YOULE R J.Mitophagy and quality control mechanisms inMitochondrial maintenance［J］.Current Biology，2018，28（4）：R170-R185.

［14］KURODA R，TOMINAGA K，KASASHIMA K，et al.Loss of mitochondrial transcription factor A in neural stem cells leads to immature brain development and triggers the activation of the integral stress response in vivo［J］.PLoS One，2021，16（7）：e0255355.

［15］DU Y，HUO Q，LI T，et al.Construction of a Mex3c gene-deficient mouse model to study C-FOS expression in hypothalamic nuclei and observe morphological differences in embryonic neural tube development［J］.Medical Science Monitor，2020，26：e927334.

［16］PAN Y Y，WANG M，WANG L B，et al.Interleukin-1 beta induces autophagy of mouse preimplantation embryos and improves blastocyst quality［J］.Journal of Cellular Biochemistry，2020，121（2）：1087-1100.

［17］CAO S Y，REECE E A，SHEN W B，et al.Restoring BMP4 expression in vascular endothelial progenitors ameliorates maternal diabetes-induced apoptosis and neural tube defects［J］.Cell Death amp; Disease，2020，11（10）：859.

［18］DENG Q，JIANG L，MAO L，et al.The role of protein kinase C alpha in tri-ortho-cresyl phosphate-induced autophagy in human neuroblastoma SK-N-SH cells［J］.Journal of Applied Toxicology，2020，40（11）：1480-1490.

［19］ZHU J H，CHEN Y，JI Y，et al.Gemcitabine induces apoptosis and autophagy via the AMPK/mTOR signaling pathway in pancreatic cancer cells［J］.Biotechnology and Applied Biochemistry，2018，65（5）：665-671.

［20］XU C，CHEN X，SHENG W B，et al.Trehalose restores functional autophagy suppressed by high glucose［J］.Reproductive Toxicology，2019，85：51-58.

（收稿日期：2023-02-02）

（本文編輯 鄒麗）