菠菜粉中農(nóng)藥殘留能力驗證結(jié)果分析及檢測質(zhì)量控制探討

關(guān)鍵詞

能力驗證 菠菜粉 噻蟲嗪 噻蟲胺 結(jié)果評價 質(zhì)量控制

0 引言

能力驗證作為實驗室質(zhì)量保證的基本元素之一，是判斷和監(jiān)控實驗室能力的有效手段，是通過外部措施對實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制程序的補充。能力驗證計劃的主要用途之一是評價實驗室進行檢測的能力[1]。能力驗證樣品的均勻性和穩(wěn)定性是保證計劃有效實施的前提。在樣品發(fā)放前，組織機構(gòu)必須對樣品進行均勻性檢驗和穩(wěn)定性評價，確保用于能力驗證的樣品都是均勻一致且穩(wěn)定可靠的，更真實地反應(yīng)各參加機構(gòu)的檢測能力[2-6]。

此次能力驗證的測試項目為菠菜粉中噻蟲嗪和噻蟲胺。噻蟲嗪和噻蟲胺都屬于新煙堿類藥物，是一類高效安全、高選擇性的新型殺蟲劑，既可用于莖葉處理和土壤處理，又可用于種子處理，具有殺蟲譜廣、活性高、作用速度快、持效期長等特點[7，8]。盡管噻蟲嗪、噻蟲胺屬于低毒農(nóng)藥，易光解，在土壤中殘留時間較短， 但是目前還存在著許多農(nóng)民在使用農(nóng)藥的過程中不注意科學(xué)合理用藥，為達(dá)到短期效果盲目加大使用劑量，施藥后馬上采收等問題，這是導(dǎo)致噻蟲嗪、噻蟲胺在農(nóng)產(chǎn)品中含量超標(biāo)的一個重要原因[9]。

GB 2763—2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中規(guī)定，噻蟲胺在食品中最大殘留限量為0.01 mg/kg～10 mg/kg，其中葉菜類蔬菜為2mg/kg；噻蟲嗪在食品中最大殘留限量為0.01mg/kg～10mg/kg，其中菠菜為5 mg/kg[10]。同時，在2021年～2023年國家食品安全監(jiān)督抽檢細(xì)則中，蔬菜水果類中噻蟲嗪、噻蟲胺也是必檢項目。因此在具有檢測能力的實驗室中開展“菠菜粉中噻蟲嗪、噻蟲胺測定”的能力驗證非常必要。

我中心組織的“菠菜粉中噻蟲嗪、噻蟲胺的測定”項目中，全國共有28家機構(gòu)參加，本文對此次能力驗證活動的檢測結(jié)果進行了統(tǒng)計分析，并對機構(gòu)中存在的一些問題提出建議，對部分技術(shù)問題進行了討論，可以促進實驗室保持和提升相應(yīng)的檢測能力，更好地提升食品檢測過程中質(zhì)量控制水平。

1 材料與方法

1.1 能力驗證樣品

本次能力驗證方案的設(shè)計遵循GB/T 27043—2012《合格評定 能力驗證的通用要求》。采用A、B兩組濃度水平的樣品設(shè)計，每個實驗室將隨機獲得A、B兩組樣品。在陰性菠菜糊中添加配制好預(yù)定濃度的噻蟲嗪、噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，A樣品設(shè)計濃度特性值區(qū)間范圍為0.08 mg/kg～0.25mg/kg，B樣品設(shè)計濃度特性值區(qū)間范圍為0.14mg/kg～0.45mg/kg，利用攪拌機充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅捎谜婵绽鋬龈稍锕に噧龈芍苽錁悠?，使用鋁箔袋包裝樣品，每袋約10 g，共獲得A樣品101袋，B樣品93袋。于常溫保存。

1.2樣品均勻性考察

根據(jù)CNAS-GL 003：2018《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》[11]中的要求，對樣品的均勻性和穩(wěn)定性進行檢驗。試驗采用檢測方法為GB 23200.39—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中噻蟲嗪及其代謝物噻蟲胺殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》[12]，儀器為液質(zhì)聯(lián)用儀。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品制備工藝

能力驗證樣品必須保證其均勻性和穩(wěn)定性。在以往的樣品制備過程中，我們發(fā)現(xiàn)，農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液加入蔬菜糊中，機械攪拌均勻后分裝入塑料離心管中，后期蔬菜糊樣品容易分層，影響樣品中農(nóng)藥的穩(wěn)定性。同時有文獻顯示，噻蟲嗪、噻蟲胺穩(wěn)定性與溶液的pH、溫度以及光照因素有關(guān)[13-16] 。因此，本次能力驗證，樣品制備采用菠菜凍干粉，鋁箔袋包裝模式，既避光，又可以保證樣品穩(wěn)定性，同時也便于快遞運輸。

2.2 樣品均勻性和穩(wěn)定性考察

（1）均勻性分析。樣品均勻性檢測采用單因子方差分析法，通過F檢驗對樣品進行均勻性檢驗。當(dāng)測定結(jié)果的F值小于臨界值時， 認(rèn)為樣品是充分均勻的。當(dāng)參加機構(gòu)檢測數(shù)據(jù)回收后，采用不均勻偏差S_s≤0.3σ進行均勻性驗證。若S_s≤0.3σ，則表明樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。每個濃度的樣品隨機抽取10個樣品，每個樣品平行測定2次。樣品均勻性檢測結(jié)果見表1。

由表1可見，均勻性檢測中，噻蟲嗪、噻蟲胺F值均小于F臨界值，表明0.05顯著性水平時，樣品是均勻的。同時不均勻性偏差S_s驗證，S_s均小于0.3σ，表明此次能力驗證計劃樣品中噻蟲嗪、噻蟲胺是均勻的。

（2）穩(wěn)定性分析。采用t檢驗法，每個濃度抽取3個樣本，平行測定2次，考察樣品與樣品制備當(dāng)天均勻性檢測數(shù)值的一致性。當(dāng)t值小于95%置信區(qū)間查表值時，表明樣品是穩(wěn)定的。本文中穩(wěn)定性實驗既有模擬運輸?shù)亩唐诜€(wěn)定性試驗也有常溫條件下長期穩(wěn)定性試驗，涵蓋了發(fā)樣前，結(jié)果回收后階段，保證能力驗證計劃運行期間（共計78天），樣品中被測物質(zhì)是穩(wěn)定的。同時，當(dāng)各機構(gòu)數(shù)據(jù)回收后，將統(tǒng)計分析得出的標(biāo)準(zhǔn)偏差σ，對每次穩(wěn)定性（運輸穩(wěn)定性和長期穩(wěn)定性）檢測數(shù)據(jù)進行驗證。穩(wěn)定性檢測獲得均值??，與均勻性檢驗的均值 ?的差值的絕對值除以參加實驗室檢測數(shù)據(jù)匯總統(tǒng)計得出的標(biāo)準(zhǔn)偏差σ，以比值小于0.3為原則驗證樣品的穩(wěn)定性。若|????|≤0.3σ則表明樣品在各種穩(wěn)定性考察中是穩(wěn)定的。噻蟲嗪、噻蟲胺樣品穩(wěn)定性檢測結(jié)果見表2、表3。

表2與表3表明，穩(wěn)定性檢測中，噻蟲嗪、噻蟲胺各濃度樣品，t值均小于t_0.05（24）= 2.064；同時，使用|???|≤0.3σ進行樣品穩(wěn)定性驗證，各階段差值的絕對值均小于0.3σ。說明樣品中的噻蟲嗪、噻蟲胺在此次能力驗證周期內(nèi)是穩(wěn)定的。

3 結(jié)論與討論

3.1 存在的問題

從此次能力驗證回收的圖譜和方法信息單顯示，有些機構(gòu)檢測過程中還存在一些問題。

（1）忽視基質(zhì)效應(yīng)，未進行相應(yīng)校正

此次能力驗證77.8%的機構(gòu)選擇檢測方法為GB 23200.121—2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中331中農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用》[19]；18.5%的機構(gòu)選擇檢測方法為GB 23200.39—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中噻蟲嗪及其代謝物噻蟲胺殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜》；3.7%的機構(gòu)選擇檢測方法為GB/T 20769—2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及其相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[20]。這三種方法使用的定量方法均為空白基質(zhì)液配制的校正曲線，外標(biāo)法定量。蔬菜中存在各種有機的、無機的雜質(zhì)以及一些色素，以上三種方法均為幾百種農(nóng)殘的通用方法，其前處理較為簡單，針對性不強，并且，質(zhì)譜作為最終的檢測儀器，其基質(zhì)效應(yīng)受溶劑影響較大，因此在檢測噻蟲嗪和噻蟲胺過程中，其基質(zhì)效應(yīng)不可避免，但部分機構(gòu)使用的是溶劑配制曲線，忽視了基質(zhì)效應(yīng)，最終可能影響定量結(jié)果。

（2）定量校正曲線存在問題

有些機構(gòu)選用的基質(zhì)空白不合適，干擾嚴(yán)重，校正曲線低濃度點響應(yīng)存在干擾，而考核樣品的濃度處于低濃度點位置，可能會導(dǎo)致定量結(jié)果不準(zhǔn)確。還有些機構(gòu)采用單點校正方式，該點的濃度水平與考核樣品濃度有較大差距，可能會導(dǎo)致定量結(jié)果不準(zhǔn)確。

（3）加標(biāo)回收率不符合要求

所有機構(gòu)質(zhì)控方式均采用了加標(biāo)回收，但有些機構(gòu)的加標(biāo)樣品響應(yīng)超過校正曲線的線性范圍；有些機構(gòu)的加標(biāo)回收率不符合GB/T 27404—2008[21]中F.1回收率范圍要求（占比為37.0%）；有些機構(gòu)的添加量不合適，沒有根據(jù)考核樣品數(shù)值及時調(diào)整添加回收量，要么依據(jù)日常檢測，添加低濃度水平，要么添加超高濃度水平，不能很好地利用添加回收率來校準(zhǔn)考核樣品數(shù)值。這些問題表明過程中的添加回收沒有起到很好的質(zhì)量控制的效果，表明檢測人員不清楚質(zhì)量控制規(guī)范的要求。

（4）色譜柱維護不到位

有些機構(gòu)的色譜峰拖尾嚴(yán)重，峰寬大于1.5 min（占比25.9%），影響積分計算結(jié)果。說明在日常檢測中，檢驗員對于色譜柱柱效下降敏感度不夠，可能會導(dǎo)致色譜積分存在問題。

（5）記錄信息問題

有些機構(gòu)提供的方法信息單中，信息缺漏嚴(yán)重（檢測標(biāo)準(zhǔn)編號、稱樣量、定性定量離子對信息……）；還有些機構(gòu)提供的原始圖譜中缺少校正曲線；有的機構(gòu)原始圖譜與方法信息單中信息不一致（稱樣量、色譜柱信息、流動相流速……）， 這些問題雖不會對機構(gòu)的最終結(jié)果造成影響，但表明檢驗員對于記錄信息的完整性認(rèn)識不夠，缺乏嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度。

3.2 技術(shù)建議

（1）加強人員培訓(xùn)人員是檢測過程的第一主體， 檢測人員的能力直接關(guān)系到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和可靠性[22，23]。各機構(gòu)應(yīng)加強人員培訓(xùn)，并加強檢測各環(huán)節(jié)中的人員監(jiān)督，確保檢測人員熟悉實驗室體系文件，檢測方法標(biāo)準(zhǔn)原理和操作步驟，并且不能隨意更改檢測標(biāo)準(zhǔn)。同時，對于能力驗證中的作業(yè)指導(dǎo)書，也需要仔細(xì)學(xué)習(xí)，數(shù)據(jù)上報過程中應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)填寫各表格。

（2）檢測儀器和色譜柱的維護實驗室的檢測設(shè)備必須處于有效的檢定/校準(zhǔn)周期內(nèi)，并處于正常工作狀態(tài)中，及時發(fā)現(xiàn)儀器和色譜柱的異樣，做好日常維護，以免影響檢測結(jié)果。

（3）選擇合適的質(zhì)控方式農(nóng)藥殘留檢測存在著樣品基質(zhì)復(fù)雜，檢測參數(shù)繁多等問題，日常檢測過程中，面臨著基質(zhì)干擾等因素影響檢測最終結(jié)果。很多機構(gòu)會選擇使用加標(biāo)回收或購買質(zhì)控樣方式作為內(nèi)部控制檢測質(zhì)量的手段。但需要注意建立基質(zhì)校正曲線時的基質(zhì)選取需合適，本底干擾不能太多；加標(biāo)樣品的回收率應(yīng)遵循檢測標(biāo)準(zhǔn)要求，過高過低都不利于校正檢測結(jié)果；質(zhì)控樣需選取同種類別基質(zhì)中的相應(yīng)參數(shù)，并且需嚴(yán)格按其證書要求對樣品進行保存，防止樣品變質(zhì)而影響檢測結(jié)果。