辣椒中多種農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證

作者簡(jiǎn)介：楊雅雅（1990—），女，黎族，廣東潮陽(yáng)人，本科，工程師。研究方向：食品安全與檢驗(yàn)檢測(cè)。

通信作者：常虹（1987—），女，陜西西安人，碩士，高級(jí)工程師。研究方向：食品安全與檢驗(yàn)檢測(cè)。E-mail： 375552783

@qq.com。

摘 要：通過(guò)分析辣椒中多種農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證工作過(guò)程及其注意事項(xiàng)，為其他實(shí)驗(yàn)室參與多種農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證提供參考。依據(jù)英國(guó)分析實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證作業(yè)指導(dǎo)書及氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)辣椒中多種農(nóng)藥殘留進(jìn)行篩查，確定目標(biāo)農(nóng)藥，并進(jìn)行3次測(cè)試。7種目標(biāo)物質(zhì)3次測(cè)定結(jié)果相比較，結(jié)果接近，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%，測(cè)定數(shù)值可靠；Z值在0.0～0.6，且3次測(cè)定結(jié)果的|Z|均≤2.0，本次能力驗(yàn)證結(jié)果為滿意。

關(guān)鍵詞：辣椒；農(nóng)藥殘留；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Capability Verification for Screening Multiple Pesticide Residues in Peppers

YANG Yaya1， ZHOU Yingxue1， WANG Qiongmei1， WU Lijiao1， ZHOU Mengli1， CHANG Hong2*

（1.Danzhou Branch of Hainan Academy of Inspection and Testing， Danzhou 571700， China;

2.Institute of Food Testing， Hainan Academy of Inspection and Testing， Haikou 570314， China）

Abstract： By analyzing the process and precautions of the proficiency verification of multiple pesticide residue screening in peppers， a reference is provided for other laboratories to participate in the proficiency verification of multiple pesticide residue screening. According to the operating instructions and gas chromatography-tandem mass spectrometry Food Analysis Performance Assessment Scheme， multiple pesticide residues in peppers were screened， the target pesticides were determined， and three tests were conducted. The three determination results of the seven target substances were compared， and the results were close， and the relative standard deviations were all less than 10%， and the determination values ??were reliable; the Z value was between 0.0 and 0.6， and the |Z| of the three determination results was ≤2.0， and the results of this proficiency verification were satisfactory.

Keywords： pepper; pesticide residues; gas chromatography-tandem mass spectrometry

辣椒是一年生或多年生草本植物，原產(chǎn)于中南美洲，是中國(guó)和世界上消費(fèi)量最大的調(diào)味作物之一，也是餐桌上常見(jiàn)的蔬菜[1-3]。辣椒適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)業(yè)鏈長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)豐富，在世界范圍內(nèi)具有很高的商業(yè)價(jià)值。隨著辣椒病蟲草害日益嚴(yán)重，不規(guī)范使用農(nóng)藥造成的辣椒農(nóng)藥殘留問(wèn)題已成為制約辣椒產(chǎn)業(yè)發(fā)展和辣椒出口的障礙[4]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）[5]對(duì)辣椒中農(nóng)藥殘留限量做了比較細(xì)致的規(guī)定。農(nóng)藥殘留監(jiān)管是保護(hù)公眾生命安全、提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量、提高農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力和增強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品品牌效應(yīng)的有力保障[6]。

能力驗(yàn)證是采取實(shí)驗(yàn)室間的檢測(cè)比較，根據(jù)事先確定的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)估參與者檢測(cè)能力的一種方法[7-9]。

能力驗(yàn)證有利于檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)其測(cè)定數(shù)據(jù)的可靠性與準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)估和驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)本身存在的問(wèn)題，從而提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室管理的水平。中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）規(guī)定了尋找且參與能力驗(yàn)證，是合格評(píng)定機(jī)構(gòu)的責(zé)任和義務(wù)[10]。在食品檢驗(yàn)領(lǐng)域，英國(guó)分析實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證（Food Analysis Performance Assessment Scheme，F(xiàn)APAS）是享譽(yù)世界的國(guó)際型評(píng)價(jià)體系[11]，目前有很多檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)主動(dòng)參與FAPAS能力驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)室參加了FAPAS 19255辣椒農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證，結(jié)合在能力驗(yàn)證中所做的各項(xiàng)工作，為其他實(shí)驗(yàn)室參與多種農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證提供相關(guān)參考。

1 材料及方法

1.1 材料與試劑

19255能力驗(yàn)證樣品（英國(guó)FAPAS提供的辣椒測(cè)試樣品）；19255b辣椒空白基質(zhì)樣品（英國(guó)FAPAS）；乙腈、正己烷（默克，色譜級(jí)）；氯化鈉、甲苯（分析純）；馬拉硫磷、喹氧靈（100 μg·mL-1，壇墨質(zhì)檢）；氟蟲腈砜、b-硫丹、丙環(huán)唑、甲氰菊酯、茚蟲威（100 μg·mL-1，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；Agilent鹽包（Part No：5982-0650）；Agilent凈化管（Part No：5982-5256）；石墨化碳氨基復(fù)合小柱（500 mg/500 mg/ 6mL，Agela）。

1.2 儀器與設(shè)備

GCMS-TQ8040氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（島津）；SiGMA 2-16KL冷凍離心機(jī)（德國(guó)SiGMA公司）；TYXH-I旋渦混合器（上海三儀實(shí)業(yè)有限公司）；HN132樣品濃縮儀（海能品牌）；Sartorious CP225D電子天平（北京賽多利斯）；T25 digital TURRAX勻漿機(jī)（德國(guó)IKA公司）；EV322旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（萊伯泰科）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

混合儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確移取100 μg·mL-1馬拉硫磷、喹氧靈、氟蟲腈砜、b-硫丹、丙環(huán)唑、甲氰菊酯和茚蟲威各800 μL于10 mL容量瓶，40 ℃氮吹儀氮?dú)獯蹈珊?，用正己烷定容?0 mL，得到8 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

混合使用液：準(zhǔn)確吸取8 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 000 μL，用正己烷定容至10 mL，得到0.8 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

基質(zhì)工作溶液：按照樣品前處理方法稱取19255b辣椒空白基質(zhì)樣品提取空白基質(zhì)溶液作為溶劑，分別準(zhǔn)確吸取10 μL、20 μL、40 μL、60 μL、80 μL、160 μL和240 μL混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，用空白基質(zhì)溶液定容至1 mL，得8 ng·mL-1、16 ng·mL-1、

32 ng·mL-1、48 ng·mL-1、64 ng·mL-1、128 ng·mL-1和

192 ng·mL-1基質(zhì)工作溶液。

1.4 樣品前處理

1.4.1 QuEChERS法

稱取10 g辣椒盲樣于50 mL離心管中，加入

10 mL乙腈渦旋混合均勻，于冰柜中冷凍20 min，取出，加入一包Agilent鹽包（Part No：5982-0650），渦旋器上渦旋1 min，10 000 r·min-1、20 ℃離心5 min。

吸取6 mL乙腈層加入15 mL Agilent凈化離心管中（Part No：5982-5256），渦旋器上渦旋1 min，10 000 r·min-1、20 ℃離心5 min，用移液槍準(zhǔn)確移取上層清液2 mL于10 mL離心管中，40 ℃氮吹近干，用1 mL正己烷溶劑復(fù)溶，渦旋器混合，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜于進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

1.4.2 固相萃取小柱法

稱取20 g辣椒盲樣于250 mL高型燒杯中，準(zhǔn)確加入40 mL乙腈，用高速勻漿機(jī)15 000 r·min-1勻漿2 min，濾紙過(guò)濾，收集濾液30 mL以上到裝有

6 g左右NaCl的具塞量筒中，蓋上塞子，渦旋混合30 s，在室溫下靜置分層（靜置時(shí)間為30 min）。

準(zhǔn)確吸取10 mL乙腈層溶液于50 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，40 ℃真空下旋轉(zhuǎn)濃縮近干，取出。加入4 mL乙腈-甲苯（3∶1）淋洗液，渦旋混勻，過(guò)6 mL石墨化碳氨基復(fù)合小柱（先用5 mL淋洗液預(yù)洗柱），下端用新的50 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶接收，用淋洗液淋洗旋轉(zhuǎn)近干的蒸發(fā)瓶2次，每次用4 mL淋洗液，防止樣品損失，最后用15 mL淋洗液淋洗柱子，合并于新的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中。40 ℃真空下旋轉(zhuǎn)濃縮近干，用正己烷溶劑定容到5 mL，渦旋混合均勻，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜于進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

1.5 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

進(jìn)樣口溫度：250 ℃；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1 μL；載氣：高純氦氣；毛細(xì)管柱型號(hào)：Rxi-5Sil" MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫采用梯度升溫模式：起始溫度50 ℃保持1 min，以25 ℃·min-1升溫至125 ℃，保持0 min，再以10 ℃·min-1升溫至300 ℃，

保持15 min。流量控制模式：線速度；柱流量：

1.69 mL·min-1；溶劑延遲時(shí)間：1.5 min；離子源：EI源；離子源溫度：200 ℃；電離能量：70 eV；MS接口溫度：250 ℃。掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple Reaction Monitoring，MRM）掃描[12]。MRM條件見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 目標(biāo)農(nóng)藥的確定

本次FAPAS辣椒測(cè)試樣品涉及的農(nóng)藥及其代謝物共280種，直接購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行篩查，成本高且費(fèi)時(shí)。島津GCMS-TQ8040氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀農(nóng)藥殘留庫(kù)涵蓋了約850種農(nóng)藥及其代謝物，依據(jù)正構(gòu)烷烴C7～C40進(jìn)行定位，分組建立MRM方法，對(duì)測(cè)試盲樣處理上機(jī)后進(jìn)行初篩。對(duì)疑似檢出的農(nóng)藥，再采購(gòu)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定性與定量，最終確定7種目標(biāo)農(nóng)藥，分別是馬拉硫磷、喹氧靈、氟蟲腈砜、b-硫丹、丙環(huán)唑、甲氰菊酯和茚蟲威。

2.2 固相萃取小柱法和QuEChERS法的比較

在確定目標(biāo)農(nóng)藥后，采用固相萃取小柱法和QuEChERS法兩種前處理方法，對(duì)空白基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。兩種方法的檢測(cè)結(jié)果接近，都能得到較滿意的回收效果。但石墨化碳氨基復(fù)合小柱法使用的溶劑較多，一次使用樣品量較大，耗時(shí)較長(zhǎng)；QuEChERS法具有使用溶劑較少、簡(jiǎn)便、高效易操作的特點(diǎn)，故最后采用QuEChERS法進(jìn)行樣品檢測(cè)。

2.3 線性范圍及相關(guān)系數(shù)

用空白基質(zhì)液配制工作曲線，濃度在0.008～

0.192 μg·mL-1時(shí)，7種農(nóng)藥目標(biāo)物均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)＞0.999，可以滿足定量分析要求。

2.4 能力驗(yàn)證樣品檢測(cè)結(jié)果

按1.3、1.4.1和1.5節(jié)進(jìn)行樣品前處理和儀器測(cè)定，一共測(cè)定3次，每次2個(gè)平行，得到的數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。由表2可知，3次檢驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD）＜10%，數(shù)值穩(wěn)定可靠，第3次檢測(cè)結(jié)果回收率整體更接近100%，故選擇第3次的檢驗(yàn)結(jié)果上報(bào)。

2.5 數(shù)值比較

FAPAS公布的能力驗(yàn)證結(jié)果顯示，在樣品19255辣椒多種農(nóng)藥殘留篩查中，馬拉硫磷、氟蟲腈砜、b-硫丹、丙環(huán)唑、喹氧靈、甲氰菊酯和茚蟲威的通過(guò)率分別為72%、74%、79%、78%、68%、86%和73%。如表3所示，上報(bào)的測(cè)定結(jié)果與FAPAS賦值接近，Z值在0.0～0.6，且3次測(cè)定結(jié)果的|Z|均≤2.0，本次能力驗(yàn)證比對(duì)取得滿意結(jié)果。

3 結(jié)論與討論

本次FAPAS能力驗(yàn)證填報(bào)的項(xiàng)目均取得滿意結(jié)果。此次FAPAS能力驗(yàn)證的難點(diǎn)在于農(nóng)藥覆蓋范圍廣，涵蓋280種農(nóng)藥，實(shí)驗(yàn)室一般只儲(chǔ)備日常檢驗(yàn)用到的標(biāo)準(zhǔn)品，不會(huì)儲(chǔ)備這么多種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。雖然通過(guò)儀器農(nóng)藥殘留庫(kù)建立初篩方法能較好地完成篩查，鎖定目標(biāo)物質(zhì)，但也存在個(gè)別農(nóng)藥殘留在氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀上響應(yīng)不好，無(wú)法確定的情況。參加FAPAS的農(nóng)藥篩查能力驗(yàn)證，未要求參加測(cè)試的實(shí)驗(yàn)室把所有農(nóng)藥殘留項(xiàng)目都檢測(cè)出來(lái)，只要求上報(bào)的項(xiàng)目定量準(zhǔn)確。

通過(guò)參加這次能力驗(yàn)證，筆者總結(jié)出一些檢驗(yàn)注意事項(xiàng)：①建議購(gòu)買FAPAS對(duì)應(yīng)能力驗(yàn)證的空白樣品，節(jié)約篩選空白基質(zhì)的時(shí)間；②實(shí)驗(yàn)室收到樣品后要確認(rèn)樣品完整無(wú)損壞，以及樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室是否超過(guò)運(yùn)輸期限；③在正式實(shí)驗(yàn)前先取少量樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定目標(biāo)農(nóng)藥及農(nóng)藥的大概濃度范圍；④采用QuEChERS法進(jìn)行前處理，加入鹽包后會(huì)產(chǎn)熱，因此在加入鹽包前，可先加乙腈混勻后冷凍

20 min，避免目標(biāo)物質(zhì)受熱分解，影響檢測(cè)結(jié)果；⑤安排不同檢驗(yàn)人員進(jìn)行檢測(cè)，避免因人員操作失誤導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果誤差；⑥填報(bào)結(jié)果時(shí)，核對(duì)清楚目標(biāo)物質(zhì)，其他未檢驗(yàn)的農(nóng)藥選擇未測(cè)試，避免填報(bào)錯(cuò)誤造成結(jié)果“不滿意”。

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