欣樂本草菁萃對胃黏膜損傷和腸道菌群的影響

王磊 崔琴丹 趙宏偉 史建勛 黃先菊

【摘 要】目的：探討欣樂本草菁萃（Xinle herb extract，以下簡稱XL）對無水乙醇所致大鼠胃黏膜損傷的保護作用和小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。方法：①以SD大鼠為實驗對象，隨機分為正常組、模型組，低劑量組（0.033 g/mL）、中劑量組（0.067 g/mL）和高劑量組（0.2 g/mL），各給藥組分別灌胃給予受試物，再用無水乙醇誘導(dǎo)大鼠急性胃黏膜損傷，通過解剖觀察大鼠胃組織形態(tài)學(xué)及病理結(jié)構(gòu)，評價XL對大鼠胃黏膜組織的保護作用；②以健康BALB/C 小鼠為實驗對象，隨機分為對照組、低劑量組（0.033 g/mL）、中劑量組（0.067 g/mL）、高劑量組（0.2 g/mL），各給藥組分別灌胃給予受試物，三周后，分組收集小鼠新鮮糞便，連續(xù)6 d，進行腸道菌群檢測計數(shù)。結(jié)果：在胃黏膜損傷實驗中，與模型組相比，低、中、高劑量給藥組對無水乙醇所致胃黏膜損傷均有明顯的減輕；在腸道菌群實驗中，與正常組相比，各劑量給藥組除腸桿菌數(shù)量無統(tǒng)計學(xué)差異外，益生菌如雙歧桿菌（低、中劑量給藥組）、乳桿菌（高劑量給藥組）及擬桿菌（中、高劑量給藥組）數(shù)量均上升，而非益生菌如腸球菌（中、高劑量給藥組）則出現(xiàn)明顯下降，梭桿菌（低、高劑量給藥組）及梭菌（低劑量給藥組）略有下降。結(jié)論：XL可保護無水乙醇所致大鼠胃黏膜損傷，并調(diào)節(jié)BALB/C 小鼠腸道菌群。

【關(guān)鍵詞】 欣樂本草菁萃；胃黏膜保護；乙醇；腸道菌群

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）16-0016-09

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.16.zgmzmjyyzz202316005

The Influence of Xinle Herb Extract on Gastric Mucosal Lesion and Intestinal Flora

WANG Lei1 CUI Qindan2 ZHAO Hongwei1 SHI Jianxun3 HUANG Xianju2*

1.Infinitus China Co.，Ltd，Guangzhou 510000，China;2.School of Pharmaceutical Sciences，South-Central Minzu University，Wuhan 430074，China；3.Zhejiang Pharmaceutical College，Ningbo 315100，China

Abstract： Objective To clarify the protective effect of Xinle herb extract （XL） on absolute alcohol-induced gastric mucosal lesionin rats as well as the regulation of XL on mice intestinal flora.Methods ①SD rats were randomly divided into normal group，model group，low-dose XL group （0.033 g/mL），middle-dose XL group （0.067 g/mL） and high-dose XL group （0.2 g/mL）.The XL groups were daily intragastrical administered with different doses of XL for four weeks.Afterwards，the ratswere intragastrical administered with absolute alcohol to induce acute gastric mucosainjury.The protective effect of XL on rat gastric mucosa injury was evaluated by the detection of morphological and pathological changes of rat stomach.②The health BALB/C mice were randomly divided into normal group，low-dose XL group （0.033 g/mL），middle-dose XL group （0.067 g/mL） and high-dose XL group （0.2 g/mL）.The XL group mice were dailyintragastrical administered with XL for three weeks.Then the fresh feces of mice in each group were collected for successive 6 days and the intestinal flora were detected and counted.Results Theresults in rats showed that compared with model group，All the XL groups could significantly reduce the gastric mucosal damage caused by absolute alcohol to some extent.In the mice experiment，the results showed that the number of Enterobacteriaceae has no significant difference among all the groups.However，the number of probiotics such as Bifidobacterium （low，middle dose group），lactobacillus （high dose group） and Bacteroides （middle，high dose group） in XL groups increased when compared with control group.Meanwhile，the number of non-probiotics such as Enterococcus （middle，high dose XL group） significantly decreased，and the number of fusobacterium （low，high dose XL group） and clostridium （low dose XL group） decreased slightly.Conclusion XL could protect the gastric mucosal injury in rats and regulate intestinal flora in mice.

Key words： Xinle Herb Extract；Gastric Mucosal Protection；Alcohol；Intestinal Microflora

胃腸道疾病屬于全球衛(wèi)生流行病之一，據(jù)統(tǒng)計，全球有5%～10%的人群患有從胃炎到胃癌等不同程度的疾?。?］。胃病的發(fā)生和發(fā)展在一定程度上均與胃黏膜損傷有關(guān)，胃黏膜損傷是一系列外源性或內(nèi)源性攻擊因子進入胃內(nèi)刺激胃黏膜所導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，胃黏膜屏障功能被攻擊因子侵襲及胃腺體結(jié)構(gòu)受到破壞時可誘發(fā)黏膜損傷［2］。其中飲酒是導(dǎo)致胃黏膜損傷最直接的原因，過量飲酒會明顯增加上消化道大出血的風(fēng)險［3］。酒精所含有的主要成分乙醇對胃黏膜組織具有很強的腐蝕性， 破壞表面黏液層和頸黏液細(xì)胞， 并破壞胃黏膜的正常代謝所需的生理環(huán)境［4］。臨床上用于治療胃黏膜損傷的藥品主要有胃酸中和藥、H2受體拮抗劑、H+泵抑制劑等［5］，然而，服用這些藥物可能存在治療時間長、愈合緩慢、復(fù)發(fā)率高、副作用大等問題［6］。中醫(yī)將中藥的“四性”和“五味”論運用到食物之中，認(rèn)為每種食物也具有“四性”、“五味”。許多食物即藥物。藥食同源類物質(zhì)本身可以作為實用性的中藥材，同時也兼具藥食的功能并作用于醫(yī)療保健領(lǐng)域。

藥食同源物質(zhì)大多性味平和，具有良好的安全性。欣樂本草菁萃（Xinle herb extract， XL）根據(jù)中國傳統(tǒng)中藥復(fù)方參苓白術(shù)散進行組方，在選取7種藥食同源藥材（黨參、山藥、茯苓、白扁豆、陳皮、砂仁、白術(shù)）的基礎(chǔ)上同時提取融合猴頭菇多糖制成。參苓白術(shù)散作為中國傳統(tǒng)中藥復(fù)方，在中醫(yī)中用于脾胃虛弱，食少便溏，氣短咳嗽，肢倦乏力。成份中的人參、山藥等是具有改善胃腸道功能作用的藥食同源物質(zhì)；復(fù)方中人參補氣，健脾養(yǎng)胃；山藥、桔梗宣肺養(yǎng)肺；白術(shù)、茯苓燥濕健脾；薏苡仁、扁豆健脾化濕；砂仁芳香化濕，和胃降逆；甘草調(diào)和諸藥，諸藥合用，共奏健脾益氣、滲濕止瀉之效。猴頭菇［Hericium erinaceus （Bull.） Pers.］是齒菌科、猴頭菇屬真菌，也屬于中國傳統(tǒng)的貴重中藥材，《新華本草綱要》中記載，猴頭菇味甘，性平。有利五臟、助消化、滋補、抗癌等功能［7］?，F(xiàn)代研究表明，其含有的多糖成分，對胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、十二指腸潰瘍、胃炎以及癌癥等都具有一定的療效。楊永剛等［8］通過猴頭菇多糖對乙酸構(gòu)建的SD大鼠潰瘍性結(jié)腸炎治療，發(fā)現(xiàn)猴頭菇多糖能夠顯著提高潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中ATP的含量，并具有提高結(jié)腸組織中線粒體膜電位的作用。周輝等［9］通過對Lewis肺癌荷瘤小鼠灌胃給與猴頭菇多糖，發(fā)現(xiàn)其對小鼠Lewis肺癌具有劑量依賴性的抑瘤作用。

探討XL對胃黏膜損傷的保護作用和腸道菌群的影響，本文基于XL的功效，參考本課題組先前研究［10-11］，首先對XL進行臨床劑量安全性研究，再采用無水乙醇所致胃黏膜損傷模型，對實驗性大小鼠進行給藥，測定XL對胃黏膜損傷大鼠的保護作用及對小鼠腸道菌群的影響，以期對XL的進一步應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)和參考數(shù)據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物、材料與試劑

1.1.1 動物 3～4周齡健康Wistar大鼠80只，雌雄各半［生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2016-0006，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司］。SPF級SD雄性大鼠50只，SPF級雄性BALB/C小鼠40只，來源于湖北省實驗動物中心［動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（鄂）2015-0018］。

1.1.2 材料與試劑 XL來自無限極（中國）有限公司研發(fā)中心，密封，4 ℃保存。蒸餾水（武漢三羊泰科技有限公司）；0.9%氯化鈉注射液（武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：1610200801）；無水乙醇（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，產(chǎn)品批號：20170605）。

1.2 儀器與設(shè)備 XT-2000i型全自動動物血液細(xì)胞分析儀（日本希森美康公司）；AU 680全自動生化分析儀Beckman Coulter K.K.；PB 302 型電子天平（瑞士梅特勒公司）；BS 110S型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；ASP200S 型真空組織脫水機、EG1150 型包埋機、EG1150C 型包埋冷凍臺、RM2265 型全自動切片機、HI1210 攤片機、HI1220 烤片機（Leica Biosystems Nussloch GmbH）；DM2500顯微照相儀（Leica Microsystems）；H-1850R高速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

2 實驗方法

2.1 安全性實驗

2.1.1 動物分組與飼養(yǎng) 80只3～4周齡健康大鼠，在溫度為20～24℃，濕度為40%～70%及12h 光暗周期環(huán)境下進行飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周以后，將大鼠稱重并隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組及陰性對照組，均為雌雄各10只。高、中、低三個劑量組分別灌胃給予5g/kg、2.5g/kg、1.25g/kg三種濃度樣品溶液，陰性對照組灌胃給予純凈水，每天灌胃一次，灌胃體積均為1.0mL/100g體重，分別相當(dāng)于人攝入量（以每日口服3次、體重60kg計，折算劑量則為0.05g/kg）的100倍、50倍、25倍。每天灌胃1次，連續(xù)30d。

2.1.2 大鼠相關(guān)指標(biāo)的測定

2.1.2.1 一般表現(xiàn)及行為學(xué)觀察 每日觀察并記錄所有動物的一般表現(xiàn)、行為、呼吸、中毒表現(xiàn)及死亡情況。每周稱一次體重、兩次食物攝入量。計算每周及總的食物利用率。每周食物利用率（%）=周體重增重/周飼料攝入量×100%，總食物利用率=試驗期間動物體重總增重/飼料總攝入量×100%。

2.1.2.2 血液學(xué)及生化指標(biāo) 灌胃30d后，末次灌胃后大鼠禁食16h，大鼠用戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉，真空采血管腹主動脈取抗凝血（EDTAK2抗凝）及未抗凝血后，腹主動脈放血處死，抗凝血用于檢測血液學(xué)指標(biāo)，未抗凝血分離血清后用于檢測血液生化指標(biāo)。血液學(xué)指標(biāo)檢測如下數(shù)據(jù)：測定血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞計數(shù)及分類（WBC&DC）；血液生化指標(biāo)檢測如下數(shù)據(jù)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血糖（GLU）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、總膽固醇（TCHO）、甘油三酯（TFG），計算白蛋白/球蛋白比值（ALB/GIO）。

2.1.2.3 大體解剖及病理觀察 試驗結(jié)束時，對所有大鼠進行大體檢查，肉眼觀察各組大鼠的器官和組織生理病理狀況。HE染色法對陰性對照組及高劑量組大鼠的主要臟器進行組織病理學(xué)檢查，包括肝、腎、脾、胃腸、卵巢（雌性）、睪丸（雄性）等。

2.1.2.4 臟器重量和臟/體比值 摘取各組大鼠肝、腎、脾、胃腸、卵巢（雌性）、睪丸（雄性），濾紙吸干表面水分，稱量上述臟器的絕對重量，臟/體（%）=臟器絕對重量/動物體重×100%（動物體重為禁食后的體重）。

2.2 對胃黏膜損傷的保護作用及腸道菌群影響

2.2.1 對胃黏膜損傷的保護

2.2.1.1 實驗動物分組及給藥 雄性SD大鼠50只，體重160～180g，隨機分為正常組、模型組、低劑量組（0.033g/mL）、中劑量組（0.067g/mL）及高劑量組（0.2g/mL）。適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后，每天1次灌胃給藥，連續(xù)4周，對照組和模型組給予等體積的生理鹽水。

2.2.1.2 胃黏膜損傷觀察 4周后全部動物嚴(yán)格禁食24h（不禁水），此期間亦禁止給予受試物。除空白對照組外，所有試驗動物給予無水乙醇1mL/只，1 h后處死動物，暴露完整胃，結(jié)扎幽門，灌注適量10%甲醛，固定20min，然后沿胃大彎剪開，洗凈胃內(nèi)容物，展開胃黏膜，用游標(biāo)卡尺測量出血點或出血帶長度和寬度，評分標(biāo)準(zhǔn)詳見表1。

觀察指標(biāo)：各實驗組胃黏膜損傷程度及損傷發(fā)生率（%）、損傷積分指數(shù)和損傷抑制率。損傷發(fā)生率（%）=某組出現(xiàn)出血或潰瘍的大鼠數(shù)量/該組大鼠數(shù)量×100%；損傷積分指數(shù)=組損傷評分總和/組動物數(shù)量；損傷抑制率（%）=（A-B）/A×100%（A、B分別為模型組與試驗組的損傷積分）。

病理組織學(xué)觀察及評分：大體檢查完畢，將每只動物胃黏膜損傷最嚴(yán)重的部位切下，固定于10%甲醛溶液，常規(guī)切片，HE染色，鏡下觀察。注意選擇胃黏膜正橫切面，包括黏膜全層的區(qū)域觀察。評分方法：以充血、出血、黏膜細(xì)胞變性壞死在整個黏膜上皮層的累計程度分為5級。充血權(quán)重為1，出血權(quán)重為2，上皮細(xì)胞變性壞死權(quán)重為3，評分標(biāo)準(zhǔn)及病變總積分公式詳見表2。

2.2.2 對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

2.2.2.1 實驗動物分組及給藥 雄性BALB/C小鼠40只，體重18～22g，隨機分為對照組、低劑量組（0.033g/mL）、中劑量組（0.067g/mL）及高劑量組（0.2g/mL）。每天灌胃給藥一次，連續(xù)4周，對照組給予等體積的生理鹽水。

2.2.2.2 小鼠腸道菌群的檢測 給藥前，將小鼠稱重后隨機分組，給藥后每周固定時間稱重一次，實驗結(jié)束后繪制體重變化曲線。三周后全部動物分組收集新鮮糞便，每天固定時間收集一次，連續(xù)6 d，稀釋糞便后涂布平板，進行腸道菌群檢測計數(shù)。

雙歧桿菌：采用TPY瓊脂培養(yǎng)基，是GB標(biāo)準(zhǔn)中分離培養(yǎng)雙歧桿菌的方法，厭氧培養(yǎng)，菌落小，扁平，呈乳脂色至白色。乳桿菌：采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基，菌落大飽滿，突出，凸起，全緣和無色。腸球菌：采用腸球菌瓊脂，該培養(yǎng)基用于腸球菌的快速選擇性的分離培養(yǎng)的計數(shù)，形成表面圓整、黑色并產(chǎn)生黑色素至培養(yǎng)基中的菌落。腸桿菌：采用腸道菌計數(shù)瓊脂（VRBDA），該培養(yǎng)基可用于腸道菌計數(shù)和腸桿菌科的鑒別，形成菌落呈紫色和棕色。擬桿菌：采用BDS培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基用于擬桿菌的分離培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)，形成的菌落表面圓整，全緣和無色。梭桿菌：采用SPS培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基可用于梭桿菌的分離培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)，菌落小，表面圓整，全緣和無色。梭菌：采用強化梭菌瓊脂，強化梭菌瓊脂用于梭菌的培養(yǎng)和計數(shù)，厭氧培養(yǎng)，菌落小，表面圓整，全緣和無色。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有計量資料均以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差表述，采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析。兩組間差異顯著性檢驗采用兩獨立樣本的t檢驗，多組均數(shù)間顯著性比較用單因素方差分析（one-way AVONA），以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 安全性實驗

3.1.1 一般表現(xiàn)及行為學(xué)觀察 實驗過程中，各組動物外觀、行為、毛發(fā)等一般表現(xiàn)正常，無死亡情況發(fā)生。各組大鼠體重正常增長，受試物各劑量組與陰性對照組相比均無顯著性差異（P＞0.05）。每周攝食量、每周食物利用率、體重總增重、總攝食量及總食物利用率等與陰性對照組比較，均無顯著性差異（P＞0.05）。

3.1.2 血液學(xué)指標(biāo) 受試物各劑量組與陰性對照組相比，雌性大鼠高劑量組的嗜酸性粒細(xì)胞比例略低于對照組；雄性大鼠中劑量組白細(xì)胞數(shù)量略高于對照組；雄性大鼠低劑量組單核細(xì)胞比例略高于對照組；雄性大鼠高劑量組和中劑量組紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度略高于對照組；這些差異均很小且劑量效應(yīng)關(guān)系不明顯，屬于正常生理范圍內(nèi)的波動［12-14］，無毒理學(xué)意義。其余指標(biāo)的差異均無顯著性意義（P＞0.05）。結(jié)果詳見表3。

3.1.3 血液生化指標(biāo) 受試物各劑量組與陰性對照組相比，雌性大鼠低劑量組的白蛋白含量、中劑量組的肌酐含量、中劑量和低劑量組的白蛋白/球蛋白比值均略高于對照組；雄性大鼠中劑量組甘油三酯、高劑量組的血糖值也略高于對照組。結(jié)果詳見表4。

3.1.4 臟器重量及臟/體比值 受試物各劑量組與陰性對照組相比，僅雄性大鼠的低劑量組腎臟重量高于對照組，但無劑量效應(yīng)關(guān)系，屬于正常范圍內(nèi)的波動［12-14］，無毒理學(xué)意義。各項指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）。

3.1.5 大體解剖及組織病理學(xué) 檢查各組動物，大體解剖心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃腸等主要臟器，未見肉眼可見的毒性病理性改變，與陰性對照組比較其外觀、顏色和臟器大小正常，均未出現(xiàn)明顯滲出、增生、水腫、萎縮等病變。陰性組動物病理學(xué)檢查結(jié)果表明，5只大鼠肝臟出現(xiàn)局灶性、輕微肝細(xì)胞脂肪變性，其他大鼠肝結(jié)構(gòu)清晰，各種細(xì)胞未見明顯病理變化；所有大鼠脾臟被膜及小梁形態(tài)完整，紅、白髓分界清晰，脾小體形態(tài)、體積、數(shù)量正常，未見明顯病理變化；所有大鼠腎結(jié)構(gòu)正常，腎小球、腎小管及間質(zhì)均未見明顯病理變化；所有大鼠卵巢組織結(jié)構(gòu)正常，卵巢中可見不同發(fā)育階段的卵泡及黃體，未見明顯病理變化；所有大鼠睪丸內(nèi)有大量緊密排列的曲細(xì)精管，管內(nèi)的各級生殖細(xì)胞發(fā)育正常，管腔內(nèi)可見精子，未見明顯病理變化；7 只大鼠胃黏膜出現(xiàn)輕微的局灶性上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，黏膜下層水腫。其他動物胃黏膜表面結(jié)構(gòu)清晰，黏膜下層、肌層及漿膜層未見病理改變，部分可見胃內(nèi)容物及少量脫落的黏膜上皮，未見明顯病理變化；4 只大鼠的腸黏膜上皮細(xì)胞變性壞死脫落，腸絨毛斷裂脫落。其他動物腸黏膜表面有許多葉狀絨毛突起于腸腔，絨毛可見豐富的吸收細(xì)胞及少量的杯狀細(xì)胞。部分腸黏膜上皮細(xì)胞脫落，與腸內(nèi)容物混合，附著于腸黏膜表面，未見炎性細(xì)胞浸潤，未見其它明顯病理變化。

而受試物高劑量組病理學(xué)檢查結(jié)果表明，5只大鼠肝臟出現(xiàn)局灶性、輕微肝細(xì)胞脂肪變性。其他大鼠肝結(jié)構(gòu)清晰，各種細(xì)胞未見明顯病理變化；所有大鼠脾臟被膜及小梁形態(tài)完整，紅、白髓分界清晰，脾小體形態(tài)、體積、數(shù)量正常，未見明顯病理變化；腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球、腎小管及間質(zhì)均未見明顯病理變化；卵巢組織結(jié)構(gòu)正常，卵巢中可見不同發(fā)育階段的卵泡及黃體，未見明顯病理變化；睪丸內(nèi)有大量緊密排列的曲細(xì)精管，管內(nèi)各級生殖細(xì)胞發(fā)育正常，管腔內(nèi)可見精子，未見明顯病理變化；7 只大鼠胃黏膜出現(xiàn)輕微的局灶性上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，黏膜下層水腫，1只大鼠胃黏膜壞死并伴有出血，其他動物胃黏膜表面結(jié)構(gòu)清晰，黏膜下層、肌層及漿膜層未見病理改變，部分可見胃內(nèi)容物及少量脫落的黏膜上皮，未見明顯病理變化；2 只大鼠的腸黏膜上皮細(xì)胞變性壞死脫落，腸絨毛斷裂脫落，1只大鼠的腸黏膜壞死并伴有出血，1只大鼠的腸黏膜壞死并伴有淋巴組織增生，其他動物腸黏膜表面有許多葉狀絨毛突起于腸腔，絨毛可見豐富的吸收細(xì)胞及少量的杯狀細(xì)胞。部分腸黏膜上皮細(xì)胞脫落，與腸內(nèi)容物混合，附著于腸黏膜表面，未見炎性細(xì)胞浸潤，未見其它明顯病理變化。

3.2 對胃黏膜損傷的保護作用及腸道菌群影響

3.2.1 對胃黏膜損傷的保護

3.2.1.1 急性胃黏膜損傷情況分析 圖1結(jié)果顯示，除空白組外，其余大鼠均出現(xiàn)了黏膜出血，組織壞死（如圖1黑色箭頭所示）。模型組動物損傷最嚴(yán)重，表現(xiàn)為大塊的瘀血，呈鮮紅色。高、中、低劑量給藥組則表現(xiàn)為點狀或條狀出血，出血面積明顯縮小。根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)計算各組動物損傷評分如表所示，XL可劑量依賴性的保護無水乙醇所致胃黏膜損傷。

3.2.1.2 病理學(xué)組織結(jié)果 病理學(xué)檢查結(jié)果與肉眼大體觀察一致，正常組大鼠胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜上皮無明顯壞死，黏膜層無明顯出血及炎癥，血管無明顯充血。模型組大鼠胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)異常，部分胃小凹結(jié)構(gòu)不清，黏膜層可見出血伴大量炎癥細(xì)胞浸潤，如虛線粗箭頭所示；黏膜層小血管可見充血，如虛線細(xì)箭頭所示，部分黏膜上皮糜爛，部分上皮細(xì)胞壞死脫落，如實線箭頭所示。低劑量動物胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)異常，黏膜層可見出血，如虛線粗箭頭所示;部分小血管充盈少量紅細(xì)胞，如虛線細(xì)箭頭所示；黏膜層可見部分壞死，如實線箭頭所示。中劑量動物胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)輕度異常，黏膜層可見輕度出血及小血管充血，如虛線粗箭頭所示；部分黏膜層糜爛，上皮細(xì)胞壞死變性，如實線箭頭所示。高劑量動物胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)輕度異常，黏膜層可見部分細(xì)胞壞死，腺體結(jié)構(gòu)破壞，如虛線粗箭頭所示：組織無明顯出血，小血管無明顯充血。說明XL可劑量依賴性保護胃黏膜損傷（見圖2及表5）。

3.2.2 對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用 給藥3周以后，XL空白組及各劑量組小鼠體重均增加，各組間不具有統(tǒng)計學(xué)差異。各組間除腸桿菌數(shù)量無統(tǒng)計學(xué)差異外，其他菌種均出現(xiàn)了上升或下降。除與對照組相比，益生菌雙歧桿菌（低、中劑量給藥組）、乳桿菌（高劑量給藥組）及擬桿菌（中、高劑量給藥組）數(shù)量均上升。而非益生菌如腸球菌（中、高劑量給藥組）則出現(xiàn)明顯下降，梭桿菌（低、高劑量給藥組）及梭菌（低劑量給藥組）略有下降（對照組各批次小鼠腸道菌群計數(shù)情況詳見表6，XL對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用分析結(jié)果如圖3所示）。上述結(jié)果說明本產(chǎn)品對腸道菌群具有良好的調(diào)節(jié)作用。

4 討論

XL是在傳統(tǒng)中藥復(fù)方參苓白術(shù)散的基礎(chǔ)上，融合了猴頭菇多糖，復(fù)方中含有的所有中藥材均屬于藥食同源類藥材。參苓白術(shù)散作為由藥食同源類藥材組成的傳統(tǒng)中藥復(fù)方，在使用上就相比于其它中藥或化學(xué)藥更具有安全性。已有研究［13-15］表明，參苓白術(shù)散具有調(diào)節(jié)胃腸運動、促進機體代謝和提高免疫力，改善由葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘發(fā)的潰瘍性結(jié)腸炎（UC）炎癥反應(yīng)，改善腸道損傷情況，對哺乳期母鼠腸道菌群紊亂導(dǎo)致的仔鼠腸道穩(wěn)態(tài)失衡以及減輕仔鼠斷奶應(yīng)激也具有調(diào)節(jié)作用。猴頭菇在生活中和臨床上常用作于“養(yǎng)胃”食品，研究［16］發(fā)現(xiàn)，猴頭菇多糖能促進胃黏膜血流量增加，催化多種胃黏膜因子保護作用，起到抗?jié)?、保護胃黏膜及治療應(yīng)激性胃黏膜損傷的效果。猴頭菇多糖還可通過調(diào)節(jié)超氧化物歧化酶的活性，對慢性胃損傷型大鼠有保護作用［17］。XL與傳統(tǒng)中藥復(fù)方參苓白術(shù)散相比，由于其組方中含有的猴頭菇多糖，使其具有調(diào)節(jié)胃腸運動，改善腸道菌群功效的同時，還具有胃黏膜保護作用。本研究以鼠類為研究對象，對XL進行安全性評價。使用不同劑量的XL灌胃給予到大鼠中，30 d后觀察其對大鼠的行為學(xué)、血液生化、臟器重量及組織病理的影響。結(jié)果表明，不同劑量的XL（5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg）對大鼠外觀、行為、毛發(fā)均無影響，無死亡情況，大鼠體重正常生長；對大鼠血液學(xué)及血液生化指標(biāo)均無毒理學(xué)意義；所有大鼠的臟/體比值均無顯著性差異；組織病理學(xué)結(jié)果顯示，除了高劑量XL組大鼠出現(xiàn)了部分胃、肝臟和腸道的輕微損傷外，其余大鼠均無明顯的組織病理學(xué)病變。無水乙醇所致大鼠的急性胃黏膜損傷模型，會出現(xiàn)胃黏膜出血、充血、糜爛、潰瘍等病理，常用于研究藥物的胃黏膜保護作用，目前普遍認(rèn)為其發(fā)病原因和機制是由多種因素共同作用，其發(fā)生與致潰瘍因子（胃酸、胃蛋白酶分泌、幽門螺桿菌感染、迷走神經(jīng)亢進等）和防御因子（黏液分泌、黏膜抵抗等）之間的平衡被打破有關(guān)［18］。在動物模型中，胃黏膜損傷指數(shù)和組織形態(tài)病理學(xué)是觀察胃黏膜損傷程度的最直觀指標(biāo)［19］。因此，課題組檢測了不同劑量XL對無水乙醇所致大鼠胃黏膜損傷的影響，發(fā)現(xiàn)XL可以明顯減輕無水乙醇所致的胃黏膜損傷，模型組動物胃黏膜表現(xiàn)為大塊的瘀血，呈鮮紅色；病理學(xué)結(jié)果顯示，模型組大鼠黏膜層出血伴隨大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分黏膜上皮糜爛，部分上皮細(xì)胞脫落壞死。模型組動物黏膜組織整體結(jié)構(gòu)異常。而XL各劑量給藥組則明顯改善上述現(xiàn)象，黏膜表現(xiàn)為點狀或條狀出血，出血性損傷明顯較少。上述結(jié)果表明，XL可劑量依賴性地保護無水乙醇所致的大鼠胃黏膜損傷。

人體胃腸道內(nèi)分布著大量的菌群，龐大的微生物體系是機體趨于健康態(tài)的“橋梁”，它們不但控制著物質(zhì)的消化吸收和機體免疫，而且具有預(yù)防和治療代謝性疾病等作用［20］。中藥中豐富的化學(xué)成分往往對腸道菌群具有調(diào)節(jié)作用，可維持菌群的相對平衡，一些活性成分可以直接被腸道菌群吸收利用，直接起到增加特定腸道菌群豐度的作用［21］。研究［22］表明，參苓白術(shù)散在治療危重病患者腸道菌群失調(diào)效果顯著，可改善患者腸黏膜通透性，降低腸道菌群失調(diào)嚴(yán)重程度，改善患者腸道菌群失調(diào)伴隨癥狀與體征。因此在以上相關(guān)研究基礎(chǔ)上，本研究旨在探索XL對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用，挖掘腸道菌群與胃黏膜保護作用的關(guān)系，進一步探究XL是否具有胃黏膜保護和調(diào)節(jié)腸道菌群的雙重作用。本實驗結(jié)果表明，XL長期給藥可以明顯增加小鼠腸道益生菌雙歧桿菌、乳桿菌及擬桿菌的數(shù)量，略降低非益生菌腸球菌、梭桿菌及梭菌的數(shù)量。腸道菌群作為保護腸道健康的重要部分，腸道菌群紊亂與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，研究［23］表明，腸道菌群的紊亂與胃黏膜損傷的發(fā)生也密切相關(guān)。XL能夠通過上調(diào)小鼠腸道內(nèi)益生菌的數(shù)量，略降低非益生菌的數(shù)量來達(dá)到調(diào)節(jié)腸道菌群的目的，這可能是其發(fā)揮保護胃黏膜損傷的機制之一。結(jié)合上述XL可保護無水乙醇所致大鼠胃黏膜損傷，我們有理由相信，XL作為一種藥食同源的保健食品，在保護胃腸道方面具有相當(dāng)大的潛力。本研究雖證明XL在治療無水乙醇所致的胃黏膜損傷以及調(diào)節(jié)腸道菌群方面有顯著療效，但未從其具體物質(zhì)基礎(chǔ)開展具體研究，XL治療胃黏膜損傷和調(diào)節(jié)腸道菌群的具體機理研究有待進一步開展。

綜上所述，XL臨床劑量范圍內(nèi)無明顯毒副作用，具有明顯的胃黏膜保護和調(diào)節(jié)腸道菌群雙重作用，且由于其藥食同源的屬性，本方在“藥食同補”理論方面具有積極的貢獻(xiàn)意義。

6 結(jié)論

通過上述研究，XL在實驗過程中未出現(xiàn)明顯的毒副作用，同時其可以保護胃黏膜損傷，優(yōu)化調(diào)整腸道菌群，對胃腸道功能具有正向調(diào)節(jié)作用。但其多成分、多途徑、多靶點共同調(diào)控的機制有待進一步挖掘。

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