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    高鉛血癥兒童腸道菌群構(gòu)成變化研究

    2017-02-06 15:14:32李樹然李秋燕彭鎮(zhèn)委
    中國醫(yī)藥科學(xué) 2016年14期
    關(guān)鍵詞:腸道菌群構(gòu)成變化

    李樹然 李秋燕 彭鎮(zhèn)委

    [摘要]目的探討高鉛血癥兒童腸道菌群構(gòu)成的變化。方法選取2013~2014年海華社康中心兒保門診兒童,高鉛血癥患兒29例,1:1配對健康對照兒童29例,檢測兩組兒童腸道菌群中雙歧桿菌、大腸桿菌、乳酸桿菌和腸球菌的數(shù)量以及腸道內(nèi)雙歧桿菌與大腸桿菌數(shù)量對數(shù)值的比值f即B/E值)。結(jié)果與對照組相比,高鉛血癥患者糞便中的乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量顯著下降(兩組P值均是0.000),大腸桿菌數(shù)量明顯升高(f=11.1,P=0.000),腸球菌在兩組中無統(tǒng)計學(xué)差異(t=0.497,P=0.623),高鉛血癥患兒B/E值為(0.75±0.34),顯著低于健康對照組(1.21±0.36)(t=-7.5,P=0.000)。結(jié)論高鉛血癥患兒體內(nèi)存在腸道菌群紊亂。

    [關(guān)鍵詞]兒童;高鉛血癥;腸道菌群;構(gòu)成;變化

    健康人的腸道棲息著1014個細(xì)菌,其中絕大多數(shù)為厭氧菌,主要有擬桿菌屬、梭菌、乳桿菌、大腸埃希菌屬和雙歧桿菌屬,大部分腸道細(xì)菌主要位于結(jié)腸、遠(yuǎn)端小腸,胃、十二指腸和空、回腸中也有菌群存在,腸道菌群構(gòu)成了人體胃腸道的生物學(xué)屏障,在維持腸道的正常結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)揮著重要作用。兒童腸道菌群處于生理性演替過程中,年齡越小,其腸道的微生態(tài)平衡穩(wěn)定性越差,易于發(fā)生腸道微生態(tài)紊亂。鉛是一種不可降解的環(huán)境污染物。由于兒童代謝和發(fā)育的特點,在同等環(huán)境的人群中,鉛對其的毒性作用更明顯,尤其是對智力與行為能力的發(fā)育有重要影響。兒童通過鉛污染食物及消化道接觸鉛,占總接觸量的80%~90%以上。鉛在消化道的吸收部位主要在小腸,但大腸對鉛也有吸收。在吸收和排泄的過程中,鉛不可避免地會與腸道菌群接觸,但這二者之間的相互性未見報道。本研究通過分析高鉛血癥患兒的糞便中腸道菌群主要成分的菌落數(shù)變化和腸道內(nèi)雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)量對數(shù)值的比值(即B/E值),以對高鉛血癥與腸道菌群構(gòu)成的關(guān)系進(jìn)行了探討。現(xiàn)報道如下。

    1.資料與方法

    1.1一般資料

    選擇2013~2014年寶安區(qū)海華社康中心兒保門診,近期未患感染性疾病或其他疾病的兒童,年齡2~6歲。采集靜脈血樣,送南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院專用實驗室統(tǒng)一用博暉BH-2100鎢舟原子吸收光譜儀檢測。按1991年美國國家疾病預(yù)防控制中心制定的兒童高鉛血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn),將血鉛值≥100ug/L(0.483umol/L)(無論是否有相應(yīng)臨床體征或其他血液、生化改變)兒童,納入高鉛血癥組:共29例,平均年齡(3.2±0.5)歲,男19例,女10例。為消除混雜因素的影響,采取1:1配對,選取同期參加體檢的,與病例組同年齡、同性別的29例健康兒童(血鉛值<100ug/L的兒童做為對照組。以上入選患兒均征得監(jiān)護人同意后簽訂知情同意書。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。

    1.2腸道菌群檢測

    (1)無菌方法采集受試兒童新鮮糞便(1h內(nèi)),80℃保存。(2)定量稱取標(biāo)本0.1g,予10倍系列稀釋至10-1~10-9,連同原液一共10個稀釋度;(3)用微量移液器抽取10uL,分別接種于MRSA、TPY、EMB、Pz選擇性培養(yǎng)基上,用L棒涂抹均勻,用于培養(yǎng)乳酸桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌以及腸球菌,計數(shù)時取菌落平均數(shù)。(4)將MRSA、TPY培養(yǎng)基放入?yún)捬豕拗校糜趨捬醍a(chǎn)氣袋封閉,再放入37℃的孵育箱中培養(yǎng)48h;同時將EMB、PZ培養(yǎng)基直接放人37℃的孵育箱中培養(yǎng)24h;(5)培養(yǎng)結(jié)束后選取特征性的菌落進(jìn)行菌落圖片染色及鏡檢,根據(jù)革蘭染色以及細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特征判斷目的菌。在確定目的菌后,根據(jù)計算平板上的活菌計數(shù)以及稀釋度,用活菌計數(shù)公式計數(shù),結(jié)果用每克糞便濕質(zhì)量中的菌落形成單位的對數(shù)值表示(即log CFU/g)。每毫升標(biāo)本中活菌集落單位(即CFU/mL)=(標(biāo)本質(zhì)量+稀釋量)/標(biāo)本質(zhì)量×稀釋度×菌落個數(shù)(或×10)(稀釋度即為稀釋倍數(shù))。

    1.3B/E值計算

    B/E值為腸道內(nèi)雙歧桿菌與大腸桿菌數(shù)量對數(shù)值的比值,用來表示兒童腸道菌群構(gòu)成,可以反映腸道的功能狀況:B/E值<1表示腸道定植抗力降低,菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂;≥1則表示正常。

    1.4統(tǒng)計學(xué)方法

    使用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計。實驗中的計量資料均符合正態(tài)分布,用(x±s)表示。組問菌落數(shù)和B/E值比較使用t檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2.結(jié)果

    2.1高鉛血癥組與對照組腸道茵群數(shù)量比較

    高鉛血癥患兒與對照組兒童的腸道菌群數(shù)量比較顯示,除腸球菌外,雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌組P=0.000,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

    2.2高鉛血癥組與健康對照組腸道菌群B/E值比較

    高鉛血癥患兒的腸道菌群B/E值為(0.785±0.34),<1。健康對照組的B/E值為(1.2132±0.36),>1。健康對照組的B/E值高于高鉛血癥組(t=7.6,P=0.00)

    3.討論

    研究顯示,大腸與小腸一樣,對鉛也有吸收,而且大腸是腸道菌群寄居的主要部位,腸道菌群為宿主提供能量底物,腸道菌群紊亂可導(dǎo)致體內(nèi)代謝混亂,從而可能影響腸道對鉛的吸收。國內(nèi)外對腸道菌群與人體內(nèi)鉛的吸收、排泄關(guān)系研究,主要如下:(1)腸道菌群發(fā)育不良動物的腸黏膜薄而干燥,腸道通透性較高,使一些原來不易進(jìn)入人體循環(huán)的大分子抗原等物質(zhì)能通過主動轉(zhuǎn)運和被動擴散等形式穿透腸道上皮。(2)腸道菌群的穩(wěn)定對維持人體正常排便機制具有重要作用,腸道菌群失調(diào)參與了便秘的產(chǎn)生與加重,從而引起鉛的吸收增加。(3)微量元素鈣、銅、鐵、鎂、鋅等在腸道吸收時與鉛共用同一部位的轉(zhuǎn)運蛋白,鉛一鈣、鉛一鐵、鉛鋅等之間均有拮抗作用,補充鈣、鋅劑等能降低血鉛。而腸道正常菌群如雙歧桿菌可通過對碳水化合物的發(fā)酵,使短鏈脂肪酸產(chǎn)物增多,降低腸道PH值,能促進(jìn)對鈣、鐵、鎂等離子的吸收。(4)一些益生菌具有驅(qū)鉛能力。芬蘭學(xué)者發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌、雙歧桿菌菌株具有快速清除被污染水中的重金屬鉛和鎘的能力。

    在本研究中,高鉛血癥組患兒的雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌分別為(6.59±0.56)lg(CFU/g)、(6.73±1.05)1g(CFU/g)和(8.44±1.21)1g(CFU/g),與對照組兒童的腸道菌群數(shù)量比較顯示,高鉛血癥組患兒的雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量明顯減少,大腸桿菌明顯上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。這說明乳酸桿菌、雙歧桿菌菌株可能具有清除被污染水中的重金屬鉛和鎘的能力,這與芬蘭學(xué)者發(fā)現(xiàn)一致。同時,根據(jù)學(xué)者Teemu等發(fā)現(xiàn),乳酸桿菌ME3和雙歧桿菌L46在人體外可通過可逆性的表面結(jié)合的方式,達(dá)到清除水溶液中的鉛和鎘??紤]體內(nèi)的這些腸道益生菌具有和鉛結(jié)合的能力,這些益生菌數(shù)量的增加能直接降低鉛吸收。當(dāng)然,這有待更直接的實驗證據(jù)證實。

    高鉛血癥患兒的腸道菌群B/E值<1,健康對照組的B/E值>1,結(jié)果顯示高鉛血癥患兒B/E值顯著低于健康對照組。這提示高鉛血癥患兒腸道定植抗力降低,腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。

    另一方面,本實驗發(fā)現(xiàn)高鉛血癥組患兒的腸球菌為(6.16±0.92)lg(CFU/g),與對照組兒童的腸球菌比較顯示,數(shù)量無明顯差異。這說明高鉛血癥患兒存在的腸道菌群紊亂主要體現(xiàn)在雙歧桿菌、乳酸桿菌等益生菌的影響上,而益生菌的減少易導(dǎo)致兒童消化不良,導(dǎo)致了便秘的產(chǎn)生與加重。這一研究結(jié)果與高鉛血癥患兒往往存在便秘、不規(guī)則腹痛、輕度消化不良的臨床表現(xiàn)現(xiàn)象一致。同時,便秘等導(dǎo)致鉛在消化道停留時間延長,引起鉛的吸收增加,這與Parslow的發(fā)現(xiàn)一致。

    綜上所述,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)高鉛血癥患兒存在腸道菌群紊亂,且從現(xiàn)有線索可以推測腸道菌群影響著鉛的吸收與排泄,特別是消化道雙歧桿菌、乳酸桿菌的數(shù)量直接影響到消化道對鉛的吸收,這提示我們可以通過增加雙歧桿菌、乳酸桿菌的攝入,改善腸道菌群結(jié)構(gòu),從而治療與防止高鉛血癥。

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