金錢菇中降血壓肽的純化和磁性脂質(zhì)體分離鑒定

陸苑 陸玉婷 楊思敏 馮學(xué)珍 伍善廣

摘 要：為了從金錢菇中快速分離出降血壓肽，利用超聲細胞破碎法提取金錢菇蛋白，采用透析、超濾的方法對提取物進行純化，以固定化金屬親和磁性脂質(zhì)體（metal affinity-immobilied magnetic liposome，MA-IML）作為吸附介質(zhì)，以金錢菇提取物為吸附對象，吸附分離其中的降血壓肽，并解析其結(jié)構(gòu)，利用分子對接分析其結(jié)合血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶（angiotensin-I converting enzyme， ACE）的能力。結(jié)果表明：對金錢菇提取液用透析、超濾的方法進行純化后，蛋白含量由37.67%提高至51.18%，多糖含量由26.80%降低至6.90%，ACE抑制率由61.83%提高至79.77%，純化后更有利于分離降血壓肽；用MA-IML粒子吸附分離出金錢菇純化液中的降血壓活性組分，經(jīng)反相高效液相色譜法分析其為單一組分，該組分為五肽，其氨基酸序列為苯丙氨酸-丙氨酸-色氨酸-丙氨酸-酪氨酸（Phe-Ala-Trp-Ala-Tyr，F(xiàn)AWAY），IC50為179 μmol/L。分子對接模擬表明，F(xiàn)AWAY能與ACE自發(fā)發(fā)生結(jié)合并形成穩(wěn)定的構(gòu)象。該研究制備的MA-IML可作為從金錢菇中分離降血壓肽的有效工具。

關(guān)鍵詞：磁性脂質(zhì)體；金錢菇；降血壓肽；血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶（ACE）；分離鑒定；分子對接

中圖分類號：R284.2 DOI：10.16375/j.cnki.cn45-1395/t.2023.03.016

0 引言

高血壓是最常見的慢性疾病，是心血管疾病的主要危險因素，也是世界范圍內(nèi)患者死亡的主要原因[1-2]。血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶（angiotensin-I converting enzyme， ACE）通過將血管緊張素I轉(zhuǎn)化為血管緊張素II，并催化血管舒張劑——緩激肽的降解，在血壓調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[2]。換言之，ACE抑制劑可抑制ACE，降低血壓。

從天然產(chǎn)物蛋白質(zhì)中提取的ACE抑制劑比合成藥物更安全。許多研究報道了從牛奶、豆類、蛋、魚和乳制品等天然產(chǎn)物中提取、分離和純化得到ACE抑制劑[3-4]。由于蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物很復(fù)雜，ACE抑制劑的純化和鑒定的步驟存在一定困難[5]。親和層析法是對多肽和蛋白質(zhì)進行分離純化的有效方法[6]。1992年，Winzerling等[7]首次報道了固定化金屬親和色譜法（immobilized metal affinity chromatography， IMAC），IMAC在純化工藝中具有效率高、純度高、成本低的優(yōu)點。近年來有報道，利用IMAC對ACE抑制肽進行純化[8-12]。2014年，Nagami等[13]開發(fā)了一種新的色譜技術(shù)——金屬親和固定化脂質(zhì)體色譜（metal affinity-immobilized liposome chromatography， MA-ILC），同時具有IMAC和固定化脂質(zhì)體色譜ILC的特性。在IMAC中，蛋白質(zhì)或多肽的分離取決于與金屬離子的親和性差異，而在ILC中脂質(zhì)體通過疏水相互作用與多種蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合。然而，MA-ILC的預(yù)處理步驟和操作過程比較復(fù)雜。有研究報道磁性固定化金屬親和分離介質(zhì)能顯著提高分離效率[14]。

為了簡化分離操作，本課題組結(jié)合磁性技術(shù)和MA-ILC的分離特性，制備了一種新的固定化金屬親和磁性脂質(zhì)體（metal affinity-immobilized magnetic liposome， MA-IML）[15]，并成功地將其應(yīng)用于從長蛇鯔蛋白水解產(chǎn)物中分離出ACE抑制肽[16]。用這種磁性脂質(zhì)體粒子吸附蛋白質(zhì)或多肽后，可簡單地用磁鐵快速分離吸附介質(zhì)和溶液。

食用菌是健康研究的熱門領(lǐng)域，具有極高的保健和藥用價值，從食用菌（如松茸、姬菇、巨大口蘑、多脂鱗傘、雙孢蘑菇等）中分離出的生物活性肽被發(fā)現(xiàn)有降血壓的功效[17-18]。金錢菇（Lentinus edodes）是一種幼小型、未開傘的香菇，呈小圓形，因像銅板般形狀而得名。目前尚未見從金錢菇中提取分離降血壓活性肽的相關(guān)報道，故本研究選取金錢菇為研究對象，通過超聲破碎提取后對蛋白進行純化，以前期研究制備的MA-IML粒子為吸附介質(zhì)，分離金錢菇中的降血壓肽，為從其他食用菌中快速篩選降血壓肽提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

金錢菇，廣西平南縣紅心食品有限公司；葡萄糖標(biāo)準液，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；BCA蛋白濃度測定試劑盒，碧云天生物技術(shù)有限公司；馬尿酰組胺酰亮氨酸（HHL）、血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶（ACE），北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司；卵磷脂，上海太偉藥業(yè)股份有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，無水乙醇、氨水、硫酸鎳等其他試劑均為分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀UltiMate3000，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；紫外可見分光光度計UV-1900，島津儀器（蘇州）有限公司；酶標(biāo)儀1510，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜儀AXIMA Performance，島津（中國）有限公司；依利特色譜柱Hypersil ODS，大連依利特分析儀器有限公司；超聲波細胞破碎儀JY98-III，寧波新芝生物有限公司；真空冷凍干燥機LGJ-10，北京松源華興科技發(fā)展有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，東京理化器械株式會社（中國）；恒溫水浴搖床，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；恒溫水浴鍋，常州蒙特儀器制造有限公司；數(shù)顯電動攪拌器，常州普天儀器制造有限公司；電子天平，德國塞利多斯集團（中國）等。

1.3 方法

1.3.1 原材料處理

金錢菇粉碎、過篩，利用超聲細胞破碎儀，以水為溶劑、按料液比1∶10，在一定pH條件下進行超聲提取，離心，2%活性炭脫色，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，真空干燥，得到金錢菇浸膏，待用。

1.3.2 多糖和蛋白濃度的測定

1.3.2.1 葡萄糖標(biāo)準曲線的制定

由于沒有市售的香菇多糖標(biāo)準品，類似實驗都用葡萄糖標(biāo)準品來測定多糖濃度[19]。根據(jù)文獻[20]，采用苯酚硫酸法測定多糖的濃度。將葡萄糖標(biāo)準液稀釋至0.1 mg/mL，分別移取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL葡萄糖標(biāo)準液于10 mL離心管中，加純化水使總體積為2 mL。將5%苯酚溶液1 mL依次加到各離心管中，再加入5 mL濃硫酸，混勻，置于沸水浴15 min，冷卻后用紫外分光光度計在490 nm處測定吸光度。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖的標(biāo)準曲線。

1.3.2.2 蛋白標(biāo)準曲線的制定

根據(jù)文獻[21]，用BCA法測定蛋白濃度。配制500 μg/mL 的蛋白標(biāo)準溶液。將500 μg/mL 蛋白標(biāo)準溶液按0、4、8、12、16、20 μL分別加入到6支1.5 mL離心管里，然后加入純化水使其總體積為20 μL，依次向各管加入BCA工作液200 μL，混勻后在37 ℃的水浴中孵育30 min，用酶標(biāo)儀在562 nm處測定吸光度。以蛋白濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制蛋白標(biāo)準曲線。

1.3.3 ACE抑制率的測定

根據(jù)文獻[22]，采用高效液相色譜法測定吸附蛋白的ACE抑制率。色譜柱：依利特Hypersil ODS，4.6 mm×150.0 mm，5 μm；流動相：A相，甲醇；B相，水（含0.1%三氟乙酸）；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL；檢測波長：228 nm。

樣品處理：配制0.1 mol/L硼酸緩沖液，將待測樣品經(jīng)BCA法測定蛋白濃度后，加入ACE溶液，在37 ℃水浴中恒溫振蕩10 min，然后加入5 mmol/L的HHL溶液，在37 ℃水浴中恒溫振搖30 min，最后加入2 mol/L的HCl使反應(yīng)終止。按上述色譜條件進樣分析，樣品中蛋白對ACE的抑制率按式（1）進行計算。

IP = [1 ? （Atest/Acontrol）] × 100%. ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（1）

式中：IP表示抑制率，Atest表示待測樣品的峰面積，Acontrol表示對照組的峰面積。

1.3.4 金錢菇溶液的純化

取適量金錢菇浸膏用純化水溶解得到金錢菇粗溶液。采用透析和超濾的方法對金錢菇粗溶液進行純化。取金錢菇粗溶液放在扎好一端口的3KD透析袋中，扎緊另一端口，置錐形瓶中，加200 mL純化水，37 ℃恒溫振蕩搖床2 h，倒出洗脫液，重復(fù)透析一次，合并洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到金錢菇穿透液。將金錢菇穿透液置于3KD超濾管中，14 000g（g為重力加速度）離心15 min，將超濾管內(nèi)未濾下的金錢菇穿透液取出，濾液為金錢菇純化液。為確定透析和超濾后金錢菇溶液純化的效果，根據(jù)1.3.2和1.3.3的方法測定并比較金錢菇粗溶液、金錢菇穿透液和金錢菇純化液的多糖含量、蛋白含量和ACE抑制率。

1.3.5 固定化金屬磁性脂質(zhì)體的制備

按照文獻[15]的方法制備MA-IML粒子。首先，采用化學(xué)共沉淀法，以FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O為原料，制備磁性Fe3O4粒子。其次采用薄膜分散法，以N-十六烷基亞氨基二乙酸和卵磷脂為原料、無水乙醇為溶劑，旋蒸得到脂質(zhì)體薄膜。將Fe3O4粒子用少量純化水混勻后倒入上述薄膜中蕩洗，使脂質(zhì)體充分包裹住磁性Fe3O4粒子，磁棒吸附粒子，棄去上清，加入純化水多次洗滌粒子直至上清液澄明。最后將磁性粒子置于0.05 mol/L的硫酸鎳溶液中浸泡過夜，使鎳離子連接到磁性脂質(zhì)體粒子上，即得MA-IML。

1.3.6 金錢菇降血壓活性組分的分離與分析

以MA-IML粒子為吸附介質(zhì)，參照文獻[9]的方法進行吸附反應(yīng)。取適量金錢菇溶液和粒子置于10 mL離心管中，在30 °C恒溫搖床進行吸附反應(yīng)30 min，磁性吸附分離粒子，用純化水反復(fù)多次洗滌粒子，直到上清液檢測不到蛋白（紫外檢測280 nm處吸光度為0），保證粒子中無游離蛋白。然后往粒子中加入0.05 mol/L稀鹽酸25 mL，在30 °C恒溫搖床中反應(yīng)2 h，以洗脫吸附在粒子上的蛋白，磁性吸附分離粒子，收集洗脫液，調(diào)pH至中性，旋蒸濃縮，微孔濾膜過濾，得到蛋白溶液。重復(fù)多次吸附實驗，收集金錢菇蛋白。采用BCA法測定蛋白濃度，根據(jù)1.3.3的方法測定蛋白的ACE抑制率，用線性回歸分析計算半數(shù)抑制濃度（median inhibitory concentration， IC50），即ACE抑制率為50%時的蛋白濃度。蛋白的IC50越小，ACE抑制活性（即降血壓活性）越高。

采用反相高效液相色譜法（reverse phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC）[10]分析收集金錢菇蛋白，即降血壓活性組分。色譜柱：依利特Hypersil ODS，4.6 mm×150.0 mm，5 μm；流動相：A相，水（含1%三氟乙酸）；B相，乙腈；梯度：0～60 min，0～50% B；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL；檢測波長：220 nm。

1.3.7 金錢菇降血壓肽的序列鑒定與驗證

將收集到的金錢菇降血壓活性組分用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry， MALDI-TOF）質(zhì)譜儀對降血壓肽進行分析，獲得一級、二級質(zhì)譜圖，解析降血壓肽的氨基酸序列。由吉爾生化（上海）有限公司合成解析出的降血壓肽。根據(jù)1.3.3的方法測定降血壓肽的ACE抑制率，計算IC50，驗證其ACE抑制活性。

1.3.8 分子對接

將鑒定得到的降血壓肽與ACE進行分子對接模擬，以進一步確認降血壓肽和酶之間的相互作用。將核心蛋白名稱（ACE）輸入 PDB 數(shù)據(jù)庫，在“Scientific Name of Source Organism”中設(shè)置篩選條件為“Homo sapien & X-RAY Diffraction”，獲取“Summary Reports”，選中“l(fā)igand”并按“Resolution： Best to Worst”排序，得到最適合的PDB ID：1O86。運用薛定諤軟件對蛋白受體和配體進行分子對接，驗證蛋白與配體之間的互作關(guān)系。一般認為，對接得分小于0，提示配體分子與受體蛋白能自發(fā)結(jié)合；對接得分小于-5，提示結(jié)合具有顯著性，且分值越小，表示配體與受體的結(jié)合能力越強，結(jié)合構(gòu)象越穩(wěn)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 多糖和蛋白質(zhì)量濃度的測定

2.1.1 多糖質(zhì)量濃度的測定

葡萄糖的標(biāo)準曲線如圖1所示，通過線性回歸得到吸光度（y）和葡萄糖質(zhì)量濃度（x）關(guān)系的方程：y =10.62x+0.005 6（相關(guān)系數(shù)R2=0.996 0），線性范圍為0.01～0.05 mg/mL，在此范圍內(nèi)吸光度和葡萄糖質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好。采用苯酚硫酸法建立的葡萄糖標(biāo)準曲線可用于測定金錢菇溶液中的多糖質(zhì)量濃度及多糖含量。

2.1.2 蛋白質(zhì)量濃度的測定

蛋白的標(biāo)準曲線如圖2所示，通過線性回歸得到吸光度（y）和蛋白質(zhì)量濃度（x）關(guān)系的方程：y =0.001 1x+0.023 1（R2=0.990 8），線性范圍為200～1 000 μg/mL，在此范圍內(nèi)吸光度和蛋白質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好。采用BCA法建立的蛋白標(biāo)準曲線可用于測定后續(xù)金錢菇溶液中的蛋白質(zhì)量濃度及蛋白含量。

2.2 金錢菇溶液的純化結(jié)果

根據(jù)葡萄糖和蛋白的標(biāo)準曲線、樣品體積和金錢菇浸膏的初始質(zhì)量，可以計算得到金錢菇溶液樣品中的多糖含量和蛋白含量。從表1的對比結(jié)果可知，經(jīng)過透析和超濾，金錢菇純化液與未經(jīng)純化的金錢菇粗溶液相比，多糖質(zhì)量分數(shù)由26.80%降低至6.90%，蛋白質(zhì)量分數(shù)由37.67%增加至51.18%，ACE抑制率由61.83%增加至79.77%，說明透析和超濾的方法能有效提高金錢菇溶液中的活性蛋白質(zhì)量分數(shù)，除去大部分會影響活性蛋白分離的糖類，從而有利于后續(xù)實驗從金錢菇溶液中分離出活性蛋白。故后續(xù)實驗以金錢菇純化液為分離降血壓活性蛋白的實驗對象。

2.3 金錢菇降血壓活性組分的分析結(jié)果

以MA-IML粒子為吸附介質(zhì)，金錢菇純化液為吸附對象，進行多次吸附實驗收集蛋白，測得金錢菇蛋白的IC50為0.118 mg/mL。這表明金錢菇蛋白的ACE抑制活性較高，也證明利用MA-IML粒子可以有效吸附分離得到金錢菇溶液中的降血壓活性組分。

利用RP-HPLC對吸附分離出的金錢菇降血壓活性組分進行分析，結(jié)果如圖3所示，色譜圖中有一個明顯的單峰。這說明從金錢菇溶液中分離得到的降血壓活性組分為單一組分，后續(xù)實驗可以直接以濃縮后的金錢菇蛋白吸附液為對象進行MALDI-TOF質(zhì)譜分析。

2.4 金錢菇降血壓肽的氨基酸序列分析與驗證結(jié)果

對金錢菇降血壓活性組分進行質(zhì)譜分析和鑒定，得到的一級質(zhì)譜圖如圖4所示，圖中有1個豐度最高的母離子質(zhì)荷比（m/z）為656，可推測為分子量656的多肽。選擇這個m/z為656的母離子進行二級質(zhì)譜分析，得到如圖5所示的二級質(zhì)譜圖（肽圖），結(jié)合二級質(zhì)譜圖中的碎片離子峰對這一降血壓肽進行氨基酸序列分析，推測得到的氨基酸結(jié)構(gòu)信息如表2所示。

根據(jù)所用質(zhì)譜儀的碎片斷裂模式及18種基本氨基酸的分子量，從二級質(zhì)譜圖中可以找到部分b離子和y離子的碎片離子峰，推測從金錢菇溶液中吸附分離出來的降血壓肽為表2所示的氨基酸序列：苯丙氨酸-丙氨酸-色氨酸-丙氨酸-酪氨酸（Phe-Ala-Trp-Ala-Tyr，F(xiàn)AWAY）。將這個序列的五肽合成出來之后，測定其ACE抑制率，計算得到其IC50值為179 μmol/L，與上述初步測定的金錢菇蛋白IC50值非常接近，故可確定從純化后的金錢菇溶液中吸附分離出來的活性組分是序列為FAWAY的五肽。

2.5 分子對接結(jié)果

降血壓肽與ACE結(jié)合才能發(fā)揮抑制ACE的作用。二者之間的結(jié)合能力，可以利用薛定諤軟件對分離得到的降血壓肽FAWAY和ACE進行分子對接模擬，對接模型如圖6所示，F(xiàn)AWAY與ACE之間可以形成6個氫鍵、1個鹽橋和2個π鍵。模擬得到的對接得分為-6.592，表明FAWAY與ACE可以自發(fā)發(fā)生結(jié)合，且具有較強的結(jié)合能力，結(jié)合構(gòu)象較穩(wěn)定。分子對接結(jié)果預(yù)測了從金錢菇中分離出來的降血壓肽FAWAY能夠與ACE發(fā)生相互作用，從而發(fā)揮其對ACE的抑制作用。

3 討論

3.1 金錢菇溶液的純化

降血壓肽通常是由2～12個氨基酸組成的短肽[23]。由于實驗以金錢菇提取物為分離降血壓肽的對象，溶液中除了不同分子量大小的蛋白質(zhì)和多肽外，可能還含有較多的香菇多糖，會影響小分子活性蛋白的分離，因此，考慮用常見的透析和超濾的方法來除去多糖和大分子蛋白，提高金錢菇溶液中活性蛋白的純度。此外，金錢菇穿透液中也檢測到少量蛋白，說明可能有部分疏水性較強的降血壓肽與超濾膜發(fā)生了相互作用而吸附在膜上[23]，未進入濾液中。有文獻報道用大孔吸附樹脂來純化燕麥肽[24]，使多糖質(zhì)量分數(shù)由66.76%降低至36.61%，蛋白質(zhì)量分數(shù)由28.38%增加至62.93%，ACE抑制率由65.76%增加至78.56%，本研究的純化效果與文獻報道相當(dāng)，說明透析、超濾的純化方法可行。

3.2 金錢菇降血壓活性組分的分離

很多文獻報道了從食用菌中分離、純化降血壓肽的方法，最常用的包括超濾法、排阻色譜法、離子交換色譜法和一維或二維反相高效液相色譜法[25]。Kaprasob等[26]采用多個步驟從一種牛肝菌中分離降血壓肽，首先用不同規(guī)格的超濾膜對牛肝菌蛋白水解物進行超濾，篩選出ACE抑制活性最高的餾分，對其進行離子交換色譜分離，其中蛋白含量最高、活性最好的組分再用反相高效液相色譜法進行分離，最后獲得純度較高的組分，用于氨基酸序列分析。類似地，Zhang等[27]利用超濾、醇沉、離子交換和凝膠過濾等多步方法，從5種食用菌中分別純化得到降血壓活性組分，進行氨基酸序列鑒定。超濾法利用蛋白分子量的差異進行分離，但能否有效分離還取決于蛋白和超濾膜的相互作用。排阻色譜法（或稱為凝膠色譜法）和離子交換色譜法對混合物的分離能力較差，反相高效液相色譜法對低豐度蛋白的檢測能力有限。因此這些方法常常聯(lián)合使用，從而實現(xiàn)對復(fù)雜蛋白體系的有效分離。但這些方法聯(lián)用的最大缺點是，每一步都需對各個組分逐一進行活性驗證，樣品或材料預(yù)處理的步驟較多，實驗耗費的時間較長，分離過程繁雜。

本實驗利用磁性親和吸附介質(zhì)，可以直接對超濾過的金錢菇提取液中的多肽進行吸附分離并得到了單一組分，省去了復(fù)雜的前處理操作，還可以利用外部磁場迅速進行分離，磁性粒子可以回收循環(huán)再利用，大大節(jié)省了實驗時間和成本。實驗結(jié)果表明，本研究所采用的磁性脂質(zhì)體吸附分離方法，其效果與文獻報道相當(dāng)。

3.3 金錢菇降血壓肽的活性與結(jié)合機制

本研究分離鑒定出的金錢菇降血壓肽FAWAY鮮有文獻報道。最近的一篇綜述[28]總結(jié)了從多種食用菌中分離鑒定得到的降血壓肽，其IC50值范圍為3.2 ～ 1 079.0 μmol/L，平均值為240.0 μmol/L。本研究發(fā)現(xiàn)的金錢菇降血壓肽FAWAY活性與其他食用菌中的降血壓肽活性相近。此外，本研究的分子對接模擬與文獻報道的結(jié)果[25-26]相似，食用菌降血壓肽與ACE結(jié)合的作用力中以氫鍵為主，其他分子間作用力對二者的穩(wěn)定結(jié)合也起到了不可忽視的作用。

4 結(jié)論

MA-IML作為一種新型吸附介質(zhì)，分離出了金錢菇中的一種活性較好的降血壓肽FAWAY，證明MA-IML可作為從金錢菇中分離ACE抑制肽的有效工具。但作為一次以食用菌為研究對象的新嘗試，本研究尚存在一些值得進一步研究的問題。首先，金錢菇蛋白的提取方法需要進行優(yōu)化，例如，以蛋白含量、ACE抑制率等為指標(biāo)，通過單因素或正交試驗研究pH值、溫度、超聲功率、超聲時間等因素對提取的影響；其次，在利用MA-IML吸附金錢菇活性組分時，還可以對粒子與吸附溶液的固液比、吸附溶液pH值、吸附溫度、吸附時間、洗脫液濃度等因素進行優(yōu)化，從而提高吸附分離降血壓肽的效率；此外，在分子對接預(yù)測結(jié)果的基礎(chǔ)上，可以通過動力學(xué)實驗進一步分析金錢菇降血壓肽對ACE的抑制作用機制，明確其抑制類型。天然產(chǎn)物提取物仍是一個復(fù)雜的體系，開發(fā)一種快速篩選天然產(chǎn)物中降血壓肽的新方法將為食品科學(xué)、保健品開發(fā)等領(lǐng)域的研究提供高效的途徑。本研究利用磁性脂質(zhì)體分離金錢菇中的降血壓肽，可作為從食用菌中分離活性肽的參考依據(jù)。

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Purification of anti-hypertensive peptide and separation identification of magnetic liposome from Lentinus edodes

LU Yuan， LU Yuting， YANG Simin， FENG Xuezhen， WU Shanguang*

（Medical School， Guangxi University of Science and Technology， Liuzhou 545005， China）

Abstract：To separate anti-hypertensive peptide from Lentinus edodes， the Lentinus edodes proteins were extracted by using an ultrasonic cell disrupter and purified by dialysis and ultra-filtration. The metal affinity-immobilized magnetic liposome（MA-IML）particles were prepared and used as absorption medium to separate anti-hypertensive peptide from Lentinus edodes. The amino acid