Ames試驗與HPRT試驗兩種方法對6種氧化型染發(fā)劑的檢測

陳秀娟，李培寧，江 漪，吳劍輝，黃曉輝，楊 云，吳 謙，劉香梅

(廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院，廣東 廣州 511447)

染發(fā)劑是可以用來改變頭發(fā)顏色以達到美容為目的的化妝品，主要由染料、穩(wěn)定劑、氧化劑等組成[1]。根據(jù)是否發(fā)生氧化反應(yīng)分為氧化型染發(fā)劑和非氧化型染發(fā)劑，氧化型染發(fā)劑具有染色效果好、持色時間長、色調(diào)范圍廣且色澤相對比較自然的優(yōu)點，是當前染發(fā)劑市場的主流產(chǎn)品，但其畢竟是化學(xué)合成的物質(zhì)，而且染發(fā)過程實質(zhì)也是化學(xué)反應(yīng)的過程，有可能會引起皮膚過敏、毛囊損傷等副作用，甚至還有致癌的風(fēng)險[2]，其對健康的影響越來越受到人們的重視。我國的《化妝品監(jiān)督管理條例》中把染發(fā)劑列為特殊化妝品進行管理，而氧化型染發(fā)劑須經(jīng)過致突變性檢驗，包括細菌回復(fù)突變試驗(即Ames試驗)和體外哺乳動物細胞基因突變試驗。本文選用分析HPRT 位點突變方法進行體外哺乳動物細胞基因突變試驗，以下稱HPRT 試驗。通過Ames 試驗和HPRT 試驗兩種方法檢測6 種國內(nèi)外生產(chǎn)的氧化型染發(fā)劑，并對其結(jié)果進行分析比較，探討兩種方法在氧化型染發(fā)劑中致突變性檢測中的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 受試物受試物為6 種氧化型染發(fā)劑，其中1、2、3號樣為廣東某生產(chǎn)企業(yè)送檢產(chǎn)品，4、5、6號樣為某代理商送檢的進口產(chǎn)品。受試物均為A、B 兩劑型的無菌未開封獨立包裝產(chǎn)品，A劑均為膏狀物，B劑均為黏稠乳液。試驗前，在無菌條件下，按產(chǎn)品使用說明書的比例要求，將A、B 兩劑混合均勻后，稱取5.0 g以滅菌水配制成100.0 mg/mL的混懸液，再逐級2 倍稀釋制成一系列的受試物，濃度范圍從3.12~100.0 mg/mL，用于Ames 試驗。另稱取A、B 兩劑混合物5.0 g，以無血清MEM培養(yǎng)基配制成100.0 mg/mL的混懸液，同樣逐級2 倍稀釋制成一系列的受試物，濃度范圍從0.048 8~100.0 mg/mL，用于HPRT試驗。

1.1.2 試驗菌株鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102 和 TA153 菌株，購自美國MOLTOX公司，貯存于4 ℃冰箱。

1.1.3 細胞株中國倉鼠肺細胞株V79，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細胞資源中心，貯存于液氮中。V79細胞培養(yǎng)于37 ℃、CO2體積分數(shù)為5%的二氧化碳培養(yǎng)箱，采用含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素、100 μg/mL鏈霉素的MEM培養(yǎng)液。

1.1.4 主要試劑和陽性對照瓊脂粉購于北京三藥科技開發(fā)公司；營養(yǎng)肉湯購于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；HPRT 試劑盒，購自北京匯智泰康醫(yī)藥有限公司。MEM 培養(yǎng)基和胎牛血清，均購于美國Gibco 公司；大鼠肝勻漿上清液(S9)，購于江蘇齊氏生物科技有限公司。疊氮鈉和2-氨基芴均購于美國Sigma Aldrich公司；敵克松購于美國ChemService公司；1,8-二羥基蒽醌購于阿拉丁試劑有限公司；2-氨基蒽購于日本TCI公司。

1.1.5 主要儀器全自動Ames 實驗儀購于北京慧榮和科技有限公司；生化培養(yǎng)箱及二氧化碳培養(yǎng)箱購于美國SHELLAB 公司；抑菌圈測量及菌落計數(shù)儀購于杭州迅數(shù)科技有限公司的Czone 系列；Scepter 2.0 細胞計數(shù)器購于Millipoer公司；AxioVert A1倒置顯微鏡購于蔡司公司。

1.1.6 代謝活化系統(tǒng)經(jīng)β-萘黃酮和苯巴比妥鈉誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿上清液(S9)，加相應(yīng)的輔助因子(6-磷酸葡萄糖、輔酶Ⅱ)配制成含S9組分10%的S9混合液，作為體外代謝活化系統(tǒng)。

1.2 實驗方法

1.2.1 Ames 試驗[3]將5 種試驗菌株分別接種于8 mL營養(yǎng)肉湯中，于37 ℃培養(yǎng)12 h，菌液劃線接種于預(yù)先制備的相應(yīng)的主平板中，TA97a、TA98 和TA100接種于氨芐-青霉素主平板，TA102接種于四環(huán)素主平板，TA1535接種于組氨酸-生物素主平板。37 ℃培養(yǎng)48 h，待長至典型菌落后置2~8 ℃冰箱保存。試驗前，分別從主平板上選取相應(yīng)單菌落接種于25 mL營養(yǎng)肉湯增菌培養(yǎng)，即置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中振蕩(100次/min)培養(yǎng)10 h，備用。

根據(jù)受試物的毒性和溶解度，在加S9和不加S9代謝物活化系統(tǒng)條件下分別進行試驗，各受試物分別設(shè)4個劑量組，同時設(shè)空白對照組、溶劑(滅菌水)對照組及陽性對照組。在加S9條件下，TA97a、TA98 和TA100 以DMSO 溶解的2-氨基芴為陽性對照，濃度為10.0 μg/皿；TA102以DMSO溶解的1,8-二羥蒽醌為陽性對照，濃度為 50.0 μg/皿；TA1535 以DMSO 溶解的2-氨基蒽為陽性對照，濃度為3.0 μg/皿。在不加S9條件下，TA97a和TA98以50.0 μg/皿的敵克松水溶液為陽性對照；TA100 和 TA1535 以 1.5 μg/皿的疊氮化鈉水溶液為陽性對照；TA102 以4.0 μg/皿的絲裂霉素C水溶液為陽性對照。用全自動Ames 實驗儀按技術(shù)規(guī)范的要求設(shè)置儀器參數(shù)進行試驗，即2.0 mL頂層培養(yǎng)基、0.1 mL 菌液、0.1 mL 相應(yīng)受試物、0.5 mL S9或0.5 mL PBS，待平皿冷凝固化后，倒置于37 ℃生化培養(yǎng)箱里培養(yǎng)48 h，計數(shù)每皿回變菌落數(shù)。計算各菌株各劑量3個平板回變菌落數(shù)的均值和標準差。

受試物誘發(fā) TA97a、TA98、TA100、TA102 回變菌落數(shù)是溶劑對照組的2 倍或2 倍以上，受試物誘發(fā)TA1535 的回變菌落數(shù)是溶劑對照組的3 倍或3 倍以上，并出現(xiàn)以下情形之一，則該受試物判定為致突變陽性：①呈劑量-反應(yīng)關(guān)系；②任何一個劑量條件下，出現(xiàn)陽性反應(yīng)并有可重復(fù)性。受試物經(jīng)上述5 個試驗菌株測定后，只要有1 個試驗菌株，無論在加S9或不加S9條件下為陽性，均可報告該受試物細菌回復(fù)突變試驗為致突變陽性。反之為陰性。

1.2.2 HPRT試驗[4]V79細胞復(fù)蘇后，培養(yǎng)至第2代時，對細胞進行純化處理，即將V79 細胞置于含THMG 的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h，殺滅自發(fā)的突變細胞，然后將細胞再接種于含THG 培養(yǎng)液中培養(yǎng)2 d，減少細胞的自發(fā)突變率，達到純化的目的。試驗前，將純化后生長良好的細胞接種于培養(yǎng)瓶中，放置于37 ℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后備用。

用HPRT試劑盒，根據(jù)受試物的細胞毒性來確定各受試物的劑量，分別設(shè)4個劑量組，在加和不加代謝物活化系統(tǒng)條件下分別進行試驗，試驗同時設(shè)陰性對照組(無血清培養(yǎng)基)及陽性對照組。在加S9條件下以終濃度為40 μg/mL的3-甲基膽蒽為陽性對照，在不加S9條件下以終濃度為0.5 μg/mL的絲裂霉素C為陽性對照。按技術(shù)規(guī)范的方法每皿加入相應(yīng)濃度的受試物、無血清培養(yǎng)液(需要代謝活化時加S9)至總體積為5 mL，染毒時間為4 h，用PBS洗細胞3次，加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)22 h，消化細胞制成懸液，以每皿200個細胞接種于直徑為10 mm的培養(yǎng)皿，每個劑量組5 個，培養(yǎng)7 d，計算相對集落形成率測試細胞毒性，相對無細胞毒性的產(chǎn)品以5 000 μg/mL 為最高劑量，出現(xiàn)細胞毒性的則以相對集落形成率在10%～20%之間為最高劑量。同時另做突變率測定，每組8個皿，每皿接種2×105個細胞，待細胞貼壁后加入5 μg/mL 的6-TG培養(yǎng)9 d，計數(shù)集落數(shù)。同時，每組3個皿，每皿200個細胞，不加6-TG，培養(yǎng)7 d，統(tǒng)計每皿集落數(shù)，并計算突變頻率。計算公式如下：

相對集落形成率=受試物組集落形成率/溶劑對照組集落形成率

集落形成率=實際存活的細胞集落數(shù)/接種細胞數(shù)

突變頻率=(突變集落數(shù)/接種細胞數(shù))×(1/集落形成率)

試驗結(jié)果用卡方檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析，在下列兩種情況下可判定受試物在本試驗系統(tǒng)中為陽性結(jié)果：①受試物引起突變頻率的增加具有統(tǒng)計學(xué)意義，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系。②受試物在任何一個劑量條件下，引起突變頻率具有統(tǒng)計學(xué)意義的增加，并有可重復(fù)性的陽性反應(yīng)。

2 結(jié) 果

2.1 Ames試驗

試驗前，對測試菌株進行生物學(xué)特性鑒定，5 種試驗菌株均為組氨酸缺陷型菌株，其表面一層脂多糖屏障缺損；TA97a、TA98、TA100 和 TA102 均含 R 因子對氨芐青霉素具有抗性；TA97a、TA98、TA100 和TA1535具有ΔuvrB突變，切除修復(fù)酶缺損，對紫外線敏感；TA102 具有pAQI 質(zhì)粒對四環(huán)素有抗性。5 種試驗菌株的生物學(xué)特性符合試驗要求，自發(fā)回變數(shù)均在正常值范圍內(nèi)，符合試驗要求。無論是在加和不加代謝物活化系統(tǒng)條件下，溶劑對照組回變菌落數(shù)均在正常值范圍內(nèi)，陽性對照組回變菌落數(shù)均超過溶劑對照組的2倍(TA1535為3倍)以上，試驗系統(tǒng)符合要求。

加S9條件下，在預(yù)試驗中，6 個受試產(chǎn)品分別配制成10 000 μg/皿時，在頂層培養(yǎng)基中為均勻的混懸液，凝固在底層培養(yǎng)基中可見輕微的細小顆粒但不影響結(jié)果的觀察，也不影響菌落的計數(shù)，瓊脂呈乳白色，背景菌苔生長良好，未見細菌毒性，所以均以10 000 μg/皿為加S9條件下的最高劑量組，以下設(shè)5 000、2 500及1 250 μg/皿共4個劑量組。培養(yǎng)結(jié)束后，觀察受試物各劑量組平皿，瓊脂均呈乳白色，背景菌苔生長良好，均未見細菌毒性。1號和2號產(chǎn)品所測試的4個劑量組均引起TA97a、TA98和TA1535回變菌落數(shù)的明顯增加，超過溶劑對照組的2 倍(其中TA1535 是3 倍)，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系。3 號產(chǎn)品所測試的4 個劑量組均引起TA97a、TA98 和TA100 回變菌落數(shù)的明顯增加，超過溶劑對照組的2倍(其中，引起TA100 回變菌落數(shù)異常增加僅表現(xiàn)在兩個稍高濃度的劑量組中)，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系。4 號、5 號和6 號產(chǎn)品所測試的4個劑量組引起TA98回變菌落數(shù)的明顯增加，超過溶劑對照組的2 倍，并均有劑量-反應(yīng)關(guān)系，受試物誘發(fā)的回變菌落數(shù)見表1。

表1 Ames試驗中加S9條件下6種受試物誘發(fā)的回變菌落數(shù)(，n=3)

表1 Ames試驗中加S9條件下6種受試物誘發(fā)的回變菌落數(shù)(，n=3)

*：回變菌落數(shù)超過溶劑對照的2倍；**：回變菌落數(shù)超過溶劑對照的3倍.

TA1535 19±2 20±1 24±2 1 685±22**118±3**85±5**78±7**61±3**95±5**82±3**79±4**60±3**30±4 35±2 30±6 23±3 18±3 23±2 21±2 20±3 22±2 19±2 19±3 18±1 21±2 19±2 19±1 20±3組別空白對照溶劑對照(滅菌水)溶劑對照(DMSO)陽性對照1號產(chǎn)品2號產(chǎn)品3號產(chǎn)品4號產(chǎn)品5號產(chǎn)品6號產(chǎn)品10 000 5 000 2 500 1 250 10 000 5 000 2 500 1 250 10 000 5 000 2 500 1 250 10 000 5 000 2 500 1 250 10 000 5 000 2 500 1 250 10 000 5 000 2 500 1 250 TA97a 154±4 151±3 158±7 1 587±25*1 146±14*775±9*465±13*352±10*884±19*634±7*455±11*392±10*472±11*449±14*367±6*318±5*296±5 280±8 207±8 183±5 281±3 235±13 215±8 170±5 235±8 181±9 151±9 149±8 TA98 38±2 35±3 40±4 2 166±28*635±10*367±13*256±8*127±9*376±10*232±15*103±11*93±9*362±5*321±17*181±4*126±6*376±8*163±4*123±11*90±4*576±20*263±12*202±17*112±9*276±8*145±5*102±5*81±3*TA100 146±12 146±10 155±8 1 879±11*229±5 211±5 186±5 120±6 215±10 193±6 168±6 140±5 313±8*329±6*219±7 172±6 155±9 154±9 155±11 151±10 160±7 147±9 163±11 154±12 144±6 148±8 155±7 145±4 TA102 304±7 296±9 310±11 1 546±19*307±4 295±11 300±13 281±11 285±6 296±15 287±15 261±10 303±9 296±4 310±8 296±8 307±12 302±18 310±8 313±6 288±8 307±8 307±12 297±12 301±12 308±9 282±4 294±5

不加S9條件下，在預(yù)試驗中1 號、2 號、3 號和6 號產(chǎn)品在 5 000 μg/皿劑量時；4 號和 5 號產(chǎn)品在10 000 μg/皿劑量時，瓊脂清亮透明，背景菌苔生長不良，且存活菌落數(shù)均少于測試菌株的正常值，說明6 種產(chǎn)品均出現(xiàn)不同程度的細菌毒性，所以在不加S9條件下，各產(chǎn)品最高劑量的設(shè)置以細菌毒性為依據(jù)，以下設(shè)4 個劑量組。培養(yǎng)結(jié)束后，觀察受試物各劑量組平皿，瓊脂均呈乳白色，背景菌苔生長良好，均未見細菌毒性。1 號、2 號和3 號產(chǎn)品在312~5 000 μg/皿時，各劑量組均未引起5種試驗菌株回變菌落數(shù)的增加；4號、5號和6號產(chǎn)品均引起TA97a和TA98回變菌落數(shù)的增加；其中4 號和5 號產(chǎn)品在1 250~5 000 μg/皿時，3 個劑量組均引起TA98 回變菌落數(shù)超溶劑對照組的2倍，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系；6號產(chǎn)品在 2 500 μg/皿及 1 250 μg/皿時，引起 TA98 回變菌落數(shù)超溶劑對照組的2倍，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系。受試物誘發(fā)的回變菌落數(shù)見表2。

表2 Ames 試驗中不加S9條件下6 種受試物誘發(fā)的回變菌落數(shù)(，n=3)

表2 Ames 試驗中不加S9條件下6 種受試物誘發(fā)的回變菌落數(shù)(，n=3)

*：回變菌落數(shù)超過溶劑對照的2倍；**：回變菌落數(shù)超過溶劑對照的3倍.

組別空白對照溶劑對照(滅菌水)陽性對照1號產(chǎn)品2號產(chǎn)品3號產(chǎn)品4號產(chǎn)品5號產(chǎn)品6號產(chǎn)品TA1535 19±2 17±1 978±22**18±2 17±1 19±2 21±3 19±3 18±2 18±2 18±3 18±2 17±2 19±2 22±2 18±1 20±3 19±3 21±4 20±3 16±2 20±3 20±2 20±3 22±1 19±2 20±3 2 500 1 250 625 312 2 500 1 250 625 312 2 500 1 250 625 312 5 000 2 500 1 250 625 5 000 2 500 1 250 625 2 500 1 250 625 312 TA97a 133±4 136±3 2 110±34*198±18 193±6 167±5 167±3 196±3 217±4 186±7 186±11 138±4 134±11 132±5 132±6 341±9*281±4*191±7 172±3 389±15*299±9*187±7 156±9 290±5*177±4 168±4 152±5 TA98 34±2 34±2 1 257±21*35±3 33±3 36±3 34±4 35±4 37±3 34±3 32±2 36±3 36±2 31±2 35±5 221±20*146±9*83±3*47±4 357±17*135±10*91±5*48±4 191±4*112±3*65±3 50±2 TA100 129±6 133±8 1 354±20*174±5 171±6 148±9 150±5 184±10 149±3 145±9 153±9 154±7 157±3 153±8 160±8 150±8 146±6 137±10 143±12 148±4 161±7 140±5 150±5 146±4 137±5 135±6 137±10 TA102 257±16 264±4 1 887±19*266±6 259±7 262±10 259±9 269±6 259±2 250±7 260±4 259±7 261±10 252±12 253±8 257±5 253±9 249±3 254±6 256±6 255±10 252±9 258±5 265±7 266±11 252±8 257±4

總結(jié)上述結(jié)果，6種受試物的Ames試驗結(jié)果均為陽性。

2.2 HPRT試驗

加S9條件下，1號、2號和3號產(chǎn)品均顯示有一定的細胞毒性，其中1 號和2 號產(chǎn)品在2 500 μg/mL時，相對集落形成率分別為16.99%及15.30%，3號在625 μg/mL 時，相對集落形成率為15.06%，并以此作為其各自的最高劑量。4號、5號和6號產(chǎn)品為相對無細胞毒性的產(chǎn)品，以5 000 μg/mL 為最高劑量，相對集落形成率分別為91.03%、97.65%和87.39%，相對集落形成率及突變率見表3。

表3 HPRT試驗中加S9條件下6種受試物引起V79細胞的突變率

不加S9條件下，各樣品均存在一定的細胞毒性，其中1 號、2 號和6 號產(chǎn)品在所設(shè)的最高劑量39 μg/mL時，相對集落形成率分別為17.53%、13.11%及14.66%，3 號和4 號產(chǎn)品最高劑量為78 μg/mL 時，相對集落形成率分別為14.63%、16.94%，5 號產(chǎn)品最高劑量為156 μg/mL時，相對集落形成率為11.12%，相對集落形成率及突變率見表4。

表4 HPRT試驗中不加S9條件下6種受試物引起V79細胞的突變率

用卡方檢驗對6 個受試物引起的突變率進行統(tǒng)計學(xué)分析，無論是加與不加S9條件下，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，6種受試物的HPRT試驗結(jié)果均為陰性。

3 討 論

Ames試驗是以營養(yǎng)缺陷型的沙門氏菌為指示生物的回復(fù)突變試驗，HPRT 試驗是利用體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞為指示的正向突變試驗，由于哺乳動物細胞具有較完善的DNA修復(fù)功能，遺傳物質(zhì)突變后極有可能被修復(fù)[5]，導(dǎo)致Ames 試驗的結(jié)果與HPRT 試驗的結(jié)果會有一些差異。在本研究中，Ames試驗檢測6種氧化型染發(fā)劑均為陽性結(jié)果，而HPRT 試驗檢測則均為陰性結(jié)果，也證實了兩項實驗存在一定的差異。Ames試驗以受試物對試驗菌株的最低抑菌濃度為最高劑量，HPRT試驗以受試物出現(xiàn)細胞毒性(10%~20%的細胞存活)為最高劑量，而從氧化型染發(fā)劑的配方組分[6]及大量的研究資料表明，氧化型染發(fā)劑具有明顯的細胞毒性作用[7]。從本研究可見，無論是加與不加代謝活化系統(tǒng)，Ames 試驗的最高劑量普遍高于HPRT 試驗。尤其是在不加代謝活化系統(tǒng)條件下，Ames試驗最高劑量可達到5 000或2 500 μg/皿，而HPRT 試驗最高劑量僅達到156 μg/mL，HPRT 試驗每皿細胞加入含受試物的培養(yǎng)基為5 mL，其最高劑量組加入受試物的量為780 或195 μg/皿，HPRT 試驗無法設(shè)置更高的劑量，這亦是試驗結(jié)果出現(xiàn)差異的原因。由此可見，HPRT 試驗高劑量濃度過低才出現(xiàn)了陰性結(jié)果，但由于氧化型染發(fā)劑普遍存在細胞毒性，導(dǎo)致HPRT 試驗無法設(shè)置更高的濃度劑量，那么氧化型染發(fā)劑是否適合用HPRT 試驗進行測定，尚需要更多的氧化型染發(fā)劑做進一步的試驗研究，做更大范圍的實驗數(shù)據(jù)進行比較。再者，人們在使用氧化型染發(fā)劑進行染發(fā)時，按產(chǎn)品的使用說明書，A 劑和B 劑混合后直接作用于頭發(fā)，使用的是產(chǎn)品的原型。若使用者頭發(fā)長度至肩膀，每人每次使用量為50~60 g；即便是男士的短發(fā)，用量也需要10~20 g 之多。從試驗的最高劑量來看，兩項試驗的劑量設(shè)置均未達到人體接觸量，在這種情況下，需要選擇更高劑量的Ames 試驗，盡量接近于實際使用情況用以反映染發(fā)劑的安全性問題。另外，《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中HPRT試驗的要求以卡方檢驗對突變率進行系統(tǒng)學(xué)分析，而該試驗的突變率通常在萬分之一至萬分之三，在事件發(fā)生率如此低的情況下用卡方檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析值得商榷。其次，從試驗的周期和操作的復(fù)雜程度看，Ames試驗染毒后培養(yǎng)2 d即可進行菌落計數(shù)，用全自動Ames試驗儀器來代替人工加樣，只需要一位實驗員就可以完成整個加樣流程。HPRT 試驗從染毒到細胞的表達，到細胞的克隆，實驗周期為20 d。而且即使是使用了全動細胞計數(shù)儀進行細胞計數(shù)，也需要數(shù)位實驗員來同時參與試驗，包括對細胞進行消化、計數(shù)、稀釋制備適量濃度的細胞懸液，對實驗人員的操作熟練程度要求也比較高，從試驗周期及操作的簡便方面看，Ames試驗明顯具有優(yōu)勢。再看試驗成本，Ames試驗所需的培養(yǎng)基大多是比較易得到的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，而且有眾多的國產(chǎn)品牌可供選擇；HPRT 試驗所需的MEM 或DMEM 等培養(yǎng)基，大多都是進口或進口分裝，價格相對比較昂貴，特別是品質(zhì)比較好的小牛血清，近年的售價只升不降。而且HPRT 試驗周期長，所消耗的培養(yǎng)基、培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿都比較多，HPRT 試驗的成本從各個方面來看均遠遠高于Ames試驗。

綜上所述，雖然Ames試驗和HPRT試驗均可以作為氧化型染發(fā)劑致突變性檢驗的備選項目[8]，但HPRT試驗因細胞毒性的存在無法設(shè)計更高的劑量，從而掩蓋了氧化型染發(fā)劑致突變性的真實水平，從經(jīng)濟角度和檢驗周期來看，HPRT 試驗亦不是最優(yōu)選擇，因此本文建議對氧化型染發(fā)劑進行致突變性檢驗時，應(yīng)以快速、簡便的Ames 試驗在最經(jīng)濟、最短時內(nèi)完成其致突變性檢驗，評價其安全性。