靛玉紅可減輕骨關(guān)節(jié)炎大鼠的軟骨細(xì)胞炎癥和損傷

骨關(guān)節(jié)炎（OA）是一種常見慢性關(guān)節(jié)退行性疾病，病理改變以關(guān)節(jié)軟骨退變、損傷為特征。隨著年齡的增長，骨關(guān)節(jié)炎的患病率升高，嚴(yán)重影響中老年患者的生命健康及生活質(zhì)量。軟骨細(xì)胞炎癥和細(xì)胞基質(zhì)丟失一直被認(rèn)為是導(dǎo)致加重骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)程的重要病因之一。新的有效的骨關(guān)節(jié)炎治療方法對(duì)醫(yī)療衛(wèi)生健康系統(tǒng)具有重要意義，多項(xiàng)研究表明多種中藥有效成分對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的治療起積極作用，如黃芪甲苷、槲皮素、牛膝皂苷及龍膽苦苷等。

中藥青黛的提取物之一靛玉紅是一種雙吲哚類藥物，有抗癌作用，臨床用于治療慢性粒細(xì)胞白血病。靛玉紅在許多慢性疾病的治療中起著重要的作用，并表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抗炎活性。靛玉紅通過NF-κB 和MAPK信號(hào)通路抑制脂多糖誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞炎癥。另外，靛玉紅還可抑制延遲型超敏反應(yīng)的炎癥反應(yīng)。然而，截至目前，還沒有靛玉紅對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞炎癥及損傷作用的相關(guān)報(bào)道。本文首次探究靛玉紅是否對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞炎癥和損傷具有保護(hù)作用。神經(jīng)細(xì)胞PAS結(jié)構(gòu)域蛋白2（NPAS2）是核心生物節(jié)律基因中的一個(gè)重要成員，它參與調(diào)控包括DNA損傷修復(fù)、炎癥反應(yīng)、激素分泌等過程。有文獻(xiàn)表明NPAS2表達(dá)量上調(diào)有利于減緩創(chuàng)傷后骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)程。NPAS2對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞炎癥及損傷的作用研究極為有限。吲哚類激素褪黑素可促進(jìn)紋狀體神經(jīng)元中NPAS2的表達(dá)。我們假設(shè)靛玉紅（吲哚類）通過調(diào)節(jié)NPAS2表達(dá)來減少大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的損傷。目前為止，還沒有研究表明靛玉紅是否可通過NPAS2調(diào)控骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞損傷。因此，本文通過IL-1β構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎體外細(xì)胞模型和建立骨關(guān)節(jié)炎小鼠模型，首次探究靛玉紅對(duì)骨關(guān)節(jié)炎癥引起的細(xì)胞損傷的作用及機(jī)制。

朱熹曾說過：“無一事而不學(xué)，無一時(shí)而不學(xué)，無一處而不學(xué)?！苯K身學(xué)習(xí)是每一個(gè)人基本生存素質(zhì)，“嚴(yán)謹(jǐn)篤學(xué)，與時(shí)俱進(jìn)?！笔切率兰o(jì)教師應(yīng)有的終身學(xué)習(xí)觀。數(shù)學(xué)是一門不斷在前進(jìn)與發(fā)展的科學(xué)，教師只有樹立終身學(xué)習(xí)觀念，不斷地學(xué)習(xí)與進(jìn)步，才能提高自身的數(shù)學(xué)和數(shù)學(xué)史素養(yǎng)，并能更好地在數(shù)學(xué)課堂中，潛移默化地讓學(xué)生理解、領(lǐng)悟數(shù)學(xué)史并合理利用數(shù)學(xué)史，從而發(fā)揮數(shù)學(xué)史真正的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

靛玉紅（北京索萊寶科技有限公司）；ACAN兔單抗、COL2A1兔單抗、MMP-13單抗、caspase-3兔單抗、BAX兔單抗、Bcl-2兔單抗、NPAS2兔單抗和GAPDH兔多抗和辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗（Abcam）；BCA 試劑盒（Pierce）；Annexin-V FITC/PI 試劑盒（PharMingen）；ThermoScript RT-PCR 試劑盒（Invitrogen）；siRNA（吉瑪制藥）；MTT試劑盒（Sigma）；引物（北京擎科生物）。

雙肺上葉可出現(xiàn)多發(fā)的片絮狀、斑塊狀等影像，其余肺葉、肺段出現(xiàn)不同形態(tài)的播散灶，可出現(xiàn)斑片狀、結(jié)節(jié)狀、索條狀等影像表現(xiàn)。

1.2 主要儀器

CO培養(yǎng)箱（Heraeus）；SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)）；BX51光學(xué)顯微鏡（Olympus）；StepOne型qRT-PCR儀(ABI)；凝膠成像系統(tǒng)(上海復(fù)日科技)；電泳儀（北京六一生物科技）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和模型構(gòu)建

模型構(gòu)建方法參照文獻(xiàn)［21］。于超凈工作臺(tái)內(nèi)取正常大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨，采用含青鏈霉素雙抗的PBS液清洗，離心后棄去上清，用含20%胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基于37 ℃、含5%CO培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。將正常軟骨細(xì)胞分為以下幾組：control組（正常培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞），IL-1β組（10 ng/L IL-1β處理軟骨細(xì)胞24 h），IL-1β+0.1、0.5、1、2 μmol/L（0.1、0.5、1、2 μmol/L靛玉紅分別與10 ng/L IL-1β共同作用大鼠軟骨細(xì)胞24 h），IL-1β+靛玉紅+NPAS2 si（轉(zhuǎn)染NPAS2 siRNA后0.5 μmol/L靛玉紅與10 ng/L IL-1β共同作用大鼠軟骨細(xì)胞24 h），IL-1β+靛玉紅+NC si（轉(zhuǎn)染non-specific siRNA后0.5 μmol/L靛玉紅與10 ng/L IL-1β共同作用大鼠軟骨細(xì)胞24 h）

1.4 動(dòng)物模型構(gòu)建及分組

收集細(xì)胞（每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔），按照試劑盒（BD ApoAlert caspase-3 Fluorescent Assay Kit）說明書檢測caspase-3活性，最后記錄結(jié)果。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測NPAS2、ACAN、COL2A1 和MMP-13的mRNA表達(dá)

收集各組細(xì)胞，Trizol法提取各組細(xì)胞總RNA，使用ThermoScript RT-PCR 試劑盒對(duì)總RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，按照熒光定量試劑盒SYBR Premix ExTaq 說明書配置反應(yīng)體系，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。利用2法分析NPAS2、ACAN、COL2A1 和MMP-13 mRNA 的相對(duì)表達(dá)水平。各引物請(qǐng)見表1。

1.6 Western blot檢測蛋白表達(dá)

將細(xì)胞接種于96孔板，于37 ℃，5%CO環(huán)境下培養(yǎng)12 h，待細(xì)胞融合達(dá)到80%，按照Turbofect操作說明進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)（每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔）。將NPAS2 siRNA（0.3 μg）和non-specific siRNA（0.3 μg）分別與0.6 μL Turbofect混勻，而后轉(zhuǎn)染進(jìn)入于96孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，37 ℃，5%CO孵育24 h，然后加入0.5 μmol/L靛玉紅與10 ng/L IL-1β共同作用大鼠軟骨細(xì)胞24 h。

1.7 ELISA 法檢測細(xì)胞上清液中NO、PGE2 和TNF-α的表達(dá)

在離心機(jī)中以12 000 r/min 離心20 min，分離并收集清液，按照ELISA 試劑盒說明書進(jìn)行檢測，加樣后（每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔），37 ℃溫育45 min，洗滌后加入鏈霉親和素-HRP混勻，37 ℃反應(yīng)30 min，洗滌后加顯色劑避光顯色，用酶標(biāo)儀檢測450 nm處吸光度值，計(jì)算各因子含量。

1.8 四甲基噻唑藍(lán)染色法（MTT）檢測細(xì)胞活力

3) 算例結(jié)果顯示：青島市智慧城市建設(shè)公眾參與水平為較高水平，但與高水平仍有較大差距，說明青島市智慧城市建設(shè)公眾參與水平仍有較大的提升空間.為進(jìn)一步提高青島市公眾參與水平可從兩個(gè)方面著手，一方面是增強(qiáng)教育培訓(xùn)力度、引進(jìn)高新技術(shù)人才；另一方面是進(jìn)一步提高政務(wù)公開平臺(tái)信息公布及時(shí)率，并拓寬表達(dá)需求及反饋的渠道.

1.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡

韓愈是唐代古文運(yùn)動(dòng)的領(lǐng)導(dǎo)人，他提倡古文，并以此興儒道。儒家歷來重視師道，漢代學(xué)習(xí)經(jīng)書的儒生，特別重視從師受業(yè)，因此韓愈大力提倡師道。[3]其學(xué)生李蟠學(xué)道好文，不隨俗流，從師于他，于是韓愈作《師說》贈(zèng)予他。這足以見得韓愈對(duì)傳道的重視，對(duì)師道的推崇。當(dāng)時(shí)士大夫之族都恥學(xué)于師，并且嘲笑、打擊重視從師的人。韓愈的好友柳宗元曾經(jīng)這樣描寫這一現(xiàn)象：“今之世不聞?dòng)袔煟?dú)韓愈奮不顧流俗，犯笑侮，收召后學(xué)，作《師說》，因抗顏而為師?！盵1]297

1.10 Capspase-3活性檢測

45只SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠，鼠齡10周齡左右，體質(zhì)量25～28 g，購自北京市昌揚(yáng)西山養(yǎng)殖場，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，使用半月板損傷術(shù)建立骨關(guān)節(jié)炎小鼠模型，腹腔內(nèi)注射35 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉小鼠，剃除右膝膝關(guān)節(jié)部位毛并消毒后，切開關(guān)節(jié)囊，用眼科手術(shù)剪刀剪斷內(nèi)側(cè)半月板脛韌帶，縫合并消毒，半月板損傷手術(shù)結(jié)束后，所有小鼠在籠內(nèi)自由活動(dòng)和飲食。Sham組小鼠僅切開關(guān)節(jié)囊。造模4周后，通過小鼠國際骨關(guān)節(jié)炎研究協(xié)會(huì)評(píng)分篩選出造模成功的小鼠進(jìn)行藥物干預(yù)。按照隨機(jī)數(shù)字表法將造模成功的小鼠分為3組，分別為Sham組、OA組、靛玉紅組，每組15只。藥物干預(yù)于造模后3 d開始，靛玉紅組小鼠每3 d關(guān)節(jié)腔注射5 g/kg靛玉紅，持續(xù)四周；OA組每3 d關(guān)節(jié)腔注射等量生理鹽水。給藥結(jié)束后采用麻醉斷頸法處死小鼠。所有涉及小鼠的實(shí)驗(yàn)均經(jīng)河南省中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理編號(hào)（PZHNSZYY-2019-023）。

各組細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行干預(yù)后（每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔），收集各組細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞后，采用適量結(jié)合緩沖液調(diào)整細(xì)胞密度的1×10/mL的單細(xì)胞懸液。用15 μL Annexin-V FITC（1.5 μL/mL）4 ℃孵育預(yù)冷的細(xì)胞30 min，PBS清洗細(xì)胞3次，6 μL PI孵育9 min，立即采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。

1.11 NPAS2 siRNA轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞

小鼠給藥結(jié)束后麻醉斷頭處死，取膝關(guān)節(jié)組織使用液氮研磨法制作組織勻漿。利用RIPA裂解液提取組織勻漿和各組細(xì)胞總蛋白，BCA法測定蛋白質(zhì)濃度。取30 μg蛋白樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離后（每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔），轉(zhuǎn)到聚偏氟乙烯（PVDF）膜。用5%脫脂奶粉室溫條件下慢搖床封閉PVDF膜2 h。洗膜后，加入一抗4 ℃孵育過夜，洗膜后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗，37 ℃孵育1 h，洗膜后加入發(fā)光液（ECL），采用凝膠成像分析儀顯影曝光，Image Lab軟件對(duì)蛋白灰度值進(jìn)行分析。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件（SPSS Inc.Chicago,IL,USA,2011）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩獨(dú)立樣本檢驗(yàn)，多個(gè)獨(dú)立樣本單因素方差分析后進(jìn)行Bonferroni檢測。＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析使用雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 靛玉紅對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞增殖能力的影響

Western blot 和RT-qPCR 檢測結(jié)果顯示，IL-1β組軟骨細(xì)胞中NPAS2 的蛋白和mRNA 表達(dá)水平較control組顯著降低。IL-1β+0.5 μmol/L組軟骨細(xì)胞中NPAS2 的蛋白和mRNA 表達(dá)水平較IL-1β組則顯著升高（圖5）。

2.2 靛玉紅抑制IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞的凋亡

與control組相比，IL-1β組軟骨細(xì)胞凋亡、caspase-3活性和BAX蛋白表達(dá)量均顯著升高，Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著下降；與IL-1β組相比，IL-1β+0.1 μmol/L組軟骨細(xì)胞凋亡、caspase-3活性、Bcl-2和BAX蛋白表達(dá)量無顯著變化，而IL-1β+0.5 μmol/L組、IL-1β+1 μmol/L組和IL-1β+2 μmol/L 組軟骨細(xì)胞凋亡、caspase-3 活性和BAX蛋白表達(dá)量顯著降低，Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著升高（＜0.05，圖2）。

大多數(shù)結(jié)直腸癌患者及其家屬均對(duì)結(jié)直腸癌的相關(guān)知識(shí)知之甚少,在發(fā)病之后常常會(huì)有焦慮,擔(dān)憂,心煩意亂的情緒出現(xiàn),即使是在術(shù)后也常常是夜不能寐,擔(dān)憂害怕等情緒也極大的影響著患者的心情,使患者心情抑郁,嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)自殺的傾向,對(duì)患者的生活質(zhì)量造成了極大的影響。生活質(zhì)量原指人們生活的優(yōu)劣,生活質(zhì)量的高低體現(xiàn)在了人們的生活水平高低,后生活質(zhì)量又被引入醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,主要指個(gè)體生理、心理和生活職能等方面的狀態(tài)評(píng)估。在將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)的對(duì)比分析后,可以了解到在常規(guī)的護(hù)理之下,對(duì)患者進(jìn)行護(hù)理干預(yù),通過健康教育、松弛治療等方法,可以使患者的生活質(zhì)量和睡眠質(zhì)量有明顯的提高。

將細(xì)胞接種到96孔板（1×10/孔），按照實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行干預(yù)后（每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔），每孔加入40 μL濃度為4 mg/mL的MTT溶液，孵育6 h后棄去上清液，而后每孔加入二甲基亞砜（160 μL），振蕩10 min至結(jié)晶完全溶解，以無細(xì)胞空白孔調(diào)零后，測定各孔的吸光度值。

2.3 靛玉紅減少IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解

與control 組相比，IL-1β組軟骨細(xì)胞中ACAN 和COL2A1的蛋白和mRNA表達(dá)量顯著減少，MMP-13的蛋白和mRNA表達(dá)水平則增長近一倍。IL-1β+0.5μmol/L組中ACAN和COL2A1的蛋白和mRNA表達(dá)水平較IL-1β組顯著升高，MMP-13的蛋白和mRNA表達(dá)水平則較IL-1β組顯著降低（圖3）。

2.4 靛玉紅抑制IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞的炎癥反應(yīng)

ELISA檢測結(jié)果顯示，與control組相比，IL-1β組軟骨細(xì)胞中炎癥因子NO、PGE2 和TNF-α表達(dá)水平顯著升高。與IL-1β組相比，IL-1β+0.5 μmol/L組NO、PGE2和TNF-α表達(dá)水平顯著降低。因此，靛玉紅可抑制IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞NO、PGE2 和TNF-α表達(dá)水平的升高，減少細(xì)胞炎癥反應(yīng)（圖4）。

2.5 靛玉紅上調(diào)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞中NPAS2的表達(dá)量

與control組相比，IL-1β組軟骨細(xì)胞增殖能力顯著降低；與IL-1β組相比，IL-1β+0.1 μmol/L組軟骨細(xì)胞增殖能力無顯著變化，而IL-1β+0.5 μmol/L 組、IL-1β+1 μmol/L組和IL-1β+2μmol/L組軟骨細(xì)胞增殖量顯著升高（圖1，＜0.05）。

近幾年，我國城市化水平得到了快速發(fā)展，城市中的給排水工程的規(guī)模也不斷擴(kuò)大。給排水工程是城市建設(shè)過程中一項(xiàng)基礎(chǔ)工程，其質(zhì)量，以及運(yùn)行效果都會(huì)對(duì)人們的日常生活產(chǎn)生直接影響。因此，在給排水工程施工期間，要采取合理的措施，工程施工進(jìn)行控制，從而使給排水工程的質(zhì)量能夠得到顯著提高。

2.6 靛玉紅可通過NPAS2調(diào)節(jié)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)的降解和炎癥反應(yīng)

與IL-1β+靛玉紅+NC si 組相比，IL-1β+靛玉紅+NPAS2 si組細(xì)胞增殖能力、NPAS2和ACAN蛋白表達(dá)水平顯著降低；同時(shí)，細(xì)胞凋亡、MMP-13蛋白表達(dá)水平、PGE2和TNF-α表達(dá)水平均顯著升高。因此，靛玉紅可通過促進(jìn)NPAS2的表達(dá)量提高IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞的增殖能力，降低細(xì)胞凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)降解和炎癥因子的表達(dá)（圖6）。

2.7 靛玉紅對(duì)模型小鼠關(guān)節(jié)組織凋亡相關(guān)蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白表達(dá)的影響

與Sham組比較，OA組中BAX和MMP-13蛋白表達(dá)量顯著上升，Bcl-2和ACAN蛋白表達(dá)量顯著下降；與OA組相比，靛玉紅組中BAX和MMP-13蛋白表達(dá)量顯著下降，Bcl-2和ACAN蛋白表達(dá)量顯著上升（圖7）。

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展與多種因素有關(guān)，如年齡、肥胖、職業(yè)性過度使用和軟骨組織新陳代謝失衡等。軟骨細(xì)胞是關(guān)節(jié)軟骨中唯一存在的細(xì)胞，多項(xiàng)研究表明，軟骨細(xì)胞的異常代謝、炎癥和細(xì)胞基質(zhì)降解在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展中至關(guān)重要。IL-1β是一種致炎細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡，在骨關(guān)節(jié)炎病變過程中破壞軟骨細(xì)胞的代謝平衡，可作為誘導(dǎo)骨關(guān)節(jié)炎體外模型的炎癥因子。本研究顯示，IL-1β誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞后，細(xì)胞增殖力顯著下降，凋亡和細(xì)胞炎癥加劇，細(xì)胞基質(zhì)降解水平升高。

靛玉紅對(duì)多種疾病中的炎癥反應(yīng)有抑制作用，如靛玉紅通過破壞CCL20/CCR6軸介導(dǎo)的炎癥循環(huán)來改善銀屑病樣皮炎。靛玉紅還可抑制肺部炎癥反應(yīng)。Jung 等研究顯示，靛玉紅對(duì)神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-1、PGE 和產(chǎn)生NO與ROS有抑制作用。目前為止，還不清楚靛玉紅對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞損傷的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，與IL-1β組相比，IL-1β+0.1 μmol/L組軟骨細(xì)胞增殖能力、凋亡、capase-3活性、BAX和Bcl-2蛋白表達(dá)量無顯著變化，而IL-1β+0.5 μmol/L組、IL-1β+1 μmol/L組和IL-1β+2 μmol/L組軟骨細(xì)胞增殖量和Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著升高，同時(shí)細(xì)胞凋亡、capase-3 活性和BAX 蛋白表達(dá)量顯著降低。另外，與IL-1β組相比，IL-1β+0.5 μmol/L 組ACAN 和COL2A1的表達(dá)水平顯著升高，MMP-13和炎癥因子的表達(dá)水平則顯著降低。說明，靛玉紅可減少IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的損傷。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，靛玉紅可顯著降低模型小鼠關(guān)節(jié)組織中的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)的降解，說明靛玉紅對(duì)骨關(guān)節(jié)具有保護(hù)作用。

NPAS2又名MOP4，在人體中廣泛表達(dá)，參與生物鐘的調(diào)控，并在細(xì)胞生長、分化、凋亡、炎癥和腫瘤生長抑制等諸多方面發(fā)揮重要作用。Song等研究發(fā)現(xiàn)，敲除NPAS2顯著抑制急性髓性白血病細(xì)胞的增殖作用，同時(shí)促進(jìn)其凋亡。Liu等報(bào)道表明，NPAS2可能參與調(diào)控軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的穩(wěn)態(tài)，減緩創(chuàng)傷后骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)程。然而，NPAS2是否可調(diào)節(jié)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的損傷還不清楚。有文獻(xiàn)報(bào)道吲哚類激素褪黑素可促進(jìn)紋狀體神經(jīng)元中NPAS2的表達(dá)。我們猜測靛玉紅可通過調(diào)節(jié)NPAS2的表達(dá)來減少IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的損傷。本研究顯示，與IL-1β組相比，IL-1β+0.5 μmol/L組中NPAS2的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著升高，說明靛玉紅可有效上調(diào)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中的NPAS2表達(dá)水平。干擾NPAS2表達(dá)后，與IL-1β+靛玉紅+NC si組相比，IL-1β+靛玉紅+NPAS2 si 組細(xì)胞增殖能力、NPAS2 和ACAN蛋白表達(dá)水平顯著降低；同時(shí)，細(xì)胞凋亡、MMP-13 蛋白表達(dá)水平、PGE2 和TNF-α表達(dá)水平均顯著升高。說明干擾NPAS2可有效消除靛玉紅對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的損傷的保護(hù)作用。

退役復(fù)學(xué)高職生有的在陸軍服役，有的在海軍服役，有的在空軍、武警等部隊(duì)服役；有的雖然屬于同一兵種，但服役崗位不同；有的是普通戰(zhàn)士，有的是特種兵。兵種和身份的不同，決定了他們?cè)诓筷?duì)的生活經(jīng)歷有很大差異。從調(diào)研結(jié)果看，特種兵比其他兵種更具有責(zé)任心和積極進(jìn)取的精神，更樂于無私奉獻(xiàn)；在部隊(duì)擔(dān)任過領(lǐng)導(dǎo)職務(wù)或立過軍功的戰(zhàn)士，大多數(shù)都是黨員，復(fù)學(xué)后更容易成為班級(jí)的骨干或核心人物。

綜上，我們發(fā)現(xiàn)0.5 μmol/L靛玉紅具有降低IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的損傷的作用。靛玉紅可促進(jìn)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中NPAS2的表達(dá)量，調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖能力、凋亡、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)降解，靛玉紅還可降低模型小鼠骨關(guān)節(jié)組織細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)的降解。本研究為骨關(guān)節(jié)炎防治提供了潛在靶標(biāo)和理論基礎(chǔ)。