MiR-125b-5p 抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲：基于靶向下調(diào)CD147的表達(dá)

卵巢癌是臨床上較常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其全球發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮體癌，而死亡率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中居首位。盡管檢測(cè)和治療手段取得了進(jìn)步，但在我國(guó)卵巢癌的發(fā)病率和死亡率仍相當(dāng)高，并且逐年增加。卵巢癌患者早期癥狀不明顯，缺乏有效的篩查和診斷方法，其中約70%患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是晚期，且可能也發(fā)生了轉(zhuǎn)移和侵襲。因此探討卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，尋找新的卵巢癌生物標(biāo)志物和潛在治療靶標(biāo)，是目前亟待解決的重大課題。

微小核糖核酸RNA（miRNA）是一類長(zhǎng)度約為20-25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA分子，通過靶向mRNA進(jìn)行切割或翻譯抑制發(fā)揮重要的調(diào)控作用。其具有多種生物學(xué)效應(yīng)，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、侵襲和凋亡等關(guān)鍵的細(xì)胞過。有研究表明一些miRNA在卵巢癌中異常表達(dá)，提示miRNA參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程。全基因組miRNA表達(dá)譜的研究發(fā)現(xiàn)miR-125b在人卵巢癌組織中異常表達(dá)。但miR-125b-5p在卵巢癌中的生物學(xué)功能及其調(diào)控的分子機(jī)制尚有待進(jìn)一步明確。

miRNA 通過調(diào)控特定的靶基因發(fā)揮生物學(xué)功能。為確定miR-125b-5p在卵巢癌的調(diào)控機(jī)制，我們通過Starbase(http://starbase.sysu.edu.cn/)生信預(yù)測(cè)軟件初步篩選出細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白誘導(dǎo)因子（CD147），其為miR-125b-5p的假定靶點(diǎn)之一。CD147是一種單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。前期本課題組以及其它研究均發(fā)現(xiàn)CD147在卵巢癌患者血清中高表達(dá)，與腫瘤的惡性進(jìn)展呈正相關(guān)，能促進(jìn)卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移。這提示CD147的高表達(dá)與卵巢癌的不良預(yù)后相關(guān)，且其可能在卵巢癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估、侵襲轉(zhuǎn)移等方面具有重要作用。但miR-125b是否可通過靶向CD147來調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移？這尚待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

本研究通過收集臨床卵巢癌與癌旁組織樣本進(jìn)行比較，并通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、Transwell 實(shí)驗(yàn)等來考察miR-125b-5p 通過靶向調(diào)控CD147的表達(dá)來影響卵巢癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。本研究在臨床樣本及細(xì)胞水平層面展開，深入研究卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，為進(jìn)一步理解卵巢癌的發(fā)生機(jī)制以及為卵巢癌的診療靶點(diǎn)選擇提供新的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 臨床樣本

收集2019年1月～2021年5月于湖南省腫瘤醫(yī)院行手術(shù)治療并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的50對(duì)卵巢癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織（癌灶邊緣≥3 cm）樣本。所有患者術(shù)前均未接受任何放、化療及免疫調(diào)劑治療。所有標(biāo)本均經(jīng)病理醫(yī)師確認(rèn)。本研究獲得本院倫理委員會(huì)審批，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。術(shù)中獲得標(biāo)本后立即置于液氮中凍存。

1.2 細(xì)胞系及主要試劑

人正常卵巢細(xì)胞系NOEC細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)院科學(xué)院細(xì)胞資源中心；卵巢癌細(xì)胞系SKOV3，HO8910、OVCAR3、A2780、OVCA429（ATCC）；HEK293 細(xì)胞（湖南優(yōu)誠(chéng)生物）；胰酶、抗生素（Invitrogen）；DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清（GIBCO）；TRIzol RNA分離試劑（Taqman）；SYBR Green real-timePCR mixture（Qiagen）；限制性內(nèi)切酶、dNTP、Taq酶以及快速連接試劑盒（TaKa-Ra）；CO恒溫培養(yǎng)箱、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Thermo）；轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體Lipofectamine3000（Invitrogen）；熒光酶檢測(cè)試劑盒（Promega）；pcDNA3.1質(zhì)粒、pcDNA3.1空載體、miR-125b-5p mimic、mimic陰性對(duì)照序列（NC mimic）、miR-125b-5p inhibitor、inhibitor 陰性對(duì)照序列（NC inhibitor）和PCR引物，psiCHECK-2-CD147-WT及CD147-MUT雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（湖南豐暉生物）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及其轉(zhuǎn)染

卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、HO8910用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，在37 ℃飽和濕度、含5%CO的恒溫培養(yǎng)箱孵箱中培養(yǎng)。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SKOV3，HO8910 細(xì)胞用0.25%胰酶消化后，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)算后，按照密度為3×10/孔，種到6孔板中，鋪細(xì)胞18～24 h，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～80%。使用Lipofectamine 3000將100 nmol/L miRNA模擬物或抑制劑（miR 125b 5p mimic，5' UCCCUGAGACCCU AACUUGUCA3'；miR 125b 5p inhibitor,UCACAAG UUAGGGUCUCAGGGA3'；mimic NC，5'UUCUCCG ACGUGUCACGUTT3'；and inhibitor NC，5'CAGU ACUUUUGUGUAGUACAA3'）、1 μg pcDNA3.1、pcDNA3.1-CD147轉(zhuǎn)染到HEK293、SKOV3和HO8910細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞上清。

1.4 RT-qPCR檢測(cè)癌細(xì)胞中miR-125b-p及CD147mRNA的表達(dá)水平

設(shè)計(jì)引物，所用引物序列及測(cè)序由優(yōu)誠(chéng)生物完成。然后取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期卵巢癌細(xì)胞、卵巢癌組織樣本，提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：階段1（50 ℃，2 min）1個(gè)周期，階段2（95 ℃，10 min）1個(gè)周期，階段3（95 ℃，15 s，60 ℃，1 min）。最后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，使用GraphPad Prism 4.0分析數(shù)據(jù)，所用引物序列見表1。

“今兒個(gè)呢，王爺？”晚飯畢，眼看著王爺已跨出飯館門，戲班子幾個(gè)人趕緊起身，用手胡亂抹幾下嘴，追了出去。

1.5 Transwell實(shí)驗(yàn)

基質(zhì)膠進(jìn)行鋪板，制作細(xì)胞懸液，使用胰蛋白酶消化貼壁細(xì)胞，PBS清洗后用無血清培養(yǎng)基重懸接種細(xì)胞，將細(xì)胞懸液加入Transwell小室，培養(yǎng)24 h固定，最后染色計(jì)數(shù)。

1.6 靶基因預(yù)測(cè)以及雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)

當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期時(shí)，每組細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化后，用移液管轉(zhuǎn)移到10%胎牛血清培養(yǎng)基中備用。將細(xì)胞懸液按一定梯度稀釋，在適當(dāng)溫度下接種于10 mL培養(yǎng)基中。梯度密度分別為50、100和200細(xì)胞/皿。將細(xì)胞置于37 ℃，5%CO，飽和濕度的培養(yǎng)箱中2周。在此期間，每天肉眼觀察，直到培養(yǎng)皿中出現(xiàn)可見的克隆體，然后停止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS洗滌2次。然后加入5 mL 4%多聚甲醛固定細(xì)胞15 min。棄去固定液，最后加入適量的GIMSA染料溶液。最后，靜置15 min，然后用純凈水洗掉。

1.7 Westem blot實(shí)驗(yàn)

通過Starbase在線數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)顯示，miR-125b-5p與CD147具有潛在結(jié)合位點(diǎn)（圖3A）。進(jìn)一步通過雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在HEK 293細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimic和CD147 WT時(shí)，細(xì)胞的熒光素酶活性受到明顯抑制（圖3B）。

選擇CD147表達(dá)最高的SKOV3細(xì)胞，miR-125b-5p表達(dá)最高的HO8910細(xì)胞這兩種卵巢癌細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)機(jī)制研究。在SKOV3 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimic 過表達(dá)miR-125b-5p，RT-qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR-125b-5p mimic組miR-125b-5p表達(dá)明顯升高。而在HO8910 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-125b-5p inhibitor 沉默miR-125b-5p，miR-125b-5p inhibitor 組細(xì)胞中miR-125b-5p的表達(dá)明顯降低（＜0.01，圖2A）。隨后開展CCK8實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示過表達(dá)miR-125b-5p組卵巢癌細(xì)胞的增殖速度明顯下降（＜0.001，圖2B、C）。通過Transwell實(shí)驗(yàn)表明過表達(dá)miR-125b-5p組穿膜細(xì)胞數(shù)要明顯低于對(duì)照組（HO8910：＜0.001；SKOV3：0.001，圖D）。

1.8 CCK-8檢測(cè)

采用SPSS 23.0和GraphPad Prism 4.0統(tǒng)計(jì)分析。上述各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析和多重比較；兩分類的計(jì)數(shù)資料間差異比較采用χ檢驗(yàn)；利用Pearson 法檢驗(yàn)miR-125b-5p和CD147 mRNA兩者之間的相關(guān)性。＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.9 細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)

Starbase生信軟件預(yù)測(cè)顯示miR-125b-5p與CD147之間的潛在互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)。取HEK293細(xì)胞，2×10/孔接種于96孔板，過夜后利用Lipofectamine3000將野生型（WT）及突變型（MUT）的CD147熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒及miR-125b-5p mimic與NC mimic質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入PC細(xì)胞中，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染48 h后檢測(cè)相對(duì)熒光素酶活性。

2.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

96空扳每孔接種100 μL細(xì)胞懸液，然后將培養(yǎng)板置于37 ℃，5%CO的培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24 h，每孔加入10 μL CCK-8溶液，放置于培養(yǎng)箱中孵育4 h。最后用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。

2 結(jié)果

2.1 miR-125b-5p在卵巢癌組織及細(xì)胞系中均呈低表達(dá)，CD147呈高表達(dá)

RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與卵巢癌癌旁組織相比，50 例卵巢癌組織中miR-125b-5p 表達(dá)顯著降低，而CD147 mRNA的表達(dá)顯著增高（＜0.05，圖1A、B）；另外，Pearson 相關(guān)性分析顯示，在50 例卵巢癌組織中miR-125b-5p與CD147表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（=-0.2961，＜0.01，圖1C）。與人正常卵巢細(xì)胞系NOEC細(xì)胞相比，卵巢癌癌細(xì)胞系SKOV3，HO8910、OVCAR3、A2780和OVCA429細(xì)胞中CD147 mRNA表達(dá)均顯著增加，而miR-125b-5p表達(dá)顯著降低（＜0.05，圖1D、E）。

2.2 過表達(dá)miR-125b-5p抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲

HPLC-雙波長(zhǎng)法同時(shí)測(cè)定苗藥了哥王乙醇提取物中傘形花內(nèi)酯和西瑞香素的含量 ……………………… 馮 果等（17）：2369

2.3 miR-125b-5p在卵巢癌細(xì)胞內(nèi)靶向結(jié)合CD147

收集卵巢癌細(xì)胞、卵巢癌組織蛋白樣品，取約20 mg加100 μL蛋白裂解液，勻漿器勻漿提取總蛋白，BCA 法蛋白定量，調(diào)節(jié)每份樣品濃度，以20 μL/孔的蛋白量體積上樣，樣品加入1/5 體積的5×SDS 上樣緩沖液，100 ℃煮沸5 min，進(jìn)行SDS-PAGE 凝膠電泳。積層膠與分離膠的濃度分別為5%和10%。應(yīng)用不連續(xù)緩沖系統(tǒng)進(jìn)行垂直電泳，待溴酚蘭指示劑達(dá)分離膠下部，斷開電源。取下凝膠，用轉(zhuǎn)移緩沖液浸泡數(shù)分鐘，用蛋白濕轉(zhuǎn)移裝置將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上，用鼠抗人P-gp，兔抗人E-cadherin,鼠抗人CD147和β-actin抗體37 ℃孵育1 h，4 ℃過夜，HRP 標(biāo)記的二抗37 ℃孵育30 min，ECL 化學(xué)發(fā)光法顯影定影，進(jìn)行Western blot 分析。

卵巢癌是影響我國(guó)乃至全球女性生殖系統(tǒng)的主要惡性腫瘤之一。大多數(shù)卵巢癌患者確診時(shí)已發(fā)展至晚期，使得手術(shù)完全切除困難，術(shù)后頻繁復(fù)發(fā)，錯(cuò)過了最佳治療時(shí)間。盡管近年來手術(shù)以及其他多種治療方法都取得明顯的進(jìn)步，但是病人的整體生存情況并沒有得到顯著的改善，卵巢癌患者5年生存率僅45%。因此卵巢癌被認(rèn)為是婦科最惡性且預(yù)后較差的腫瘤之一。亟需探索卵巢癌潛在的發(fā)病機(jī)制，尋找新的特征分子作為抗腫瘤靶點(diǎn)和分子標(biāo)志物，對(duì)提高卵巢癌的療效和改善預(yù)后具有重要意義。

2.4 miR-125b-5p在卵巢癌細(xì)胞內(nèi)負(fù)調(diào)控CD147的表達(dá)，并抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移與侵襲

在SKOV3細(xì)胞中轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒和對(duì)照質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染成功后，過表達(dá)miR-125b-5p 組中miR-125b-5p的表達(dá)升高，而CD147的mRNA和蛋白表達(dá)明顯下降（＜0.05，圖4A～D)。過表達(dá)miR-125b-5p 后再轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CD147，CD147的mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高（＜0.05，圖4E～G）。Transwell 實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)miR-125b-5p后卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移受到明顯抑制，而過表達(dá)miR-125b-5p后再過表達(dá)CD147，卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移的能力得到增強(qiáng)（圖4H～I(xiàn)）。

3 討論

政府會(huì)計(jì)制度改革是一個(gè)必然過程，在經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展的推動(dòng)下，改革措施更適合當(dāng)前的體制。雖然機(jī)構(gòu)計(jì)費(fèi)系統(tǒng)仍然存在，但隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，在社會(huì)福利機(jī)構(gòu)各部門的共同努力下，會(huì)計(jì)制度改革將會(huì)更加完善。現(xiàn)代事業(yè)單位會(huì)計(jì)制度增強(qiáng)了事業(yè)單位會(huì)計(jì)的資產(chǎn)管理能力，適應(yīng)了制度的發(fā)展，同時(shí)也適應(yīng)了社會(huì)的發(fā)展。

MiRNA被證實(shí)在多種腫瘤，如乳腺癌、膀胱癌、肝癌、喉部鱗癌和卵巢癌等的發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮著關(guān)鍵的生物學(xué)調(diào)控作用。miRNA幾乎參與了與腫瘤發(fā)生發(fā)展的所有過程，包括增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、血管生成和免疫應(yīng)答等，其通過抑制信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中特定分子或重要的癌基因表達(dá)而發(fā)揮促癌或抑癌作用。有研究表明miR-125b-5p能阻斷PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路，抑制胃癌和膀胱癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，也可通過靶向調(diào)控TXNRD1抑制肝細(xì)胞癌的增殖和遷移。這提示miR-125b-5p能通過阻斷信號(hào)通路和靶向基因表達(dá)，從而抑制癌細(xì)胞的增殖。另外，有多項(xiàng)研究提示miR-125b可能在抑制卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用。通過本研究證實(shí)miR-125b-5p在卵巢癌組織和癌細(xì)胞株中均低表達(dá)，這一結(jié)果與先前研究報(bào)道一致。為探索其在卵巢癌中的作用，隨后通過過表達(dá)miR-125b-5p后，卵巢癌細(xì)胞SKOV3、HO8910的增殖、侵襲和遷移能力均受到明顯抑制，相反，抑制miR-125b-5p 后，卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力明顯提高。這些結(jié)果表明miR-125b-5p 在抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)功能的重要調(diào)控作用。

網(wǎng)絡(luò)時(shí)代高校圖書館如何滿足廣大師生對(duì)信息的需求，在信息時(shí)代立于不敗之地，已經(jīng)成為圖書館建設(shè)的重中之重，而流通部是圖書館的對(duì)外窗口，是圖書館和師生讀者之間的橋梁和紐帶，是圖書館整體形象的體現(xiàn)，因此做好流通部服務(wù)工作，提高服務(wù)質(zhì)量，滿足讀者在新形勢(shì)下對(duì)圖書館工作的信息化需求，是當(dāng)前圖書館發(fā)展趨勢(shì)。

考慮到miR-125b-5p在卵巢癌中的關(guān)鍵作用，很有必要進(jìn)一步探討miR-125b-5p表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。而CD147作為一種黏附分子，在很多惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，被認(rèn)為是腫瘤進(jìn)展過程中的重要基因，通過在腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶和血管生成因子，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，包括轉(zhuǎn)移和侵襲。課題組前期在一項(xiàng)前瞻研究中，已證實(shí)CD147與卵巢癌惡行程度正相關(guān)，并通過體外的血管生成實(shí)驗(yàn)已證實(shí)CD147能激活HIF-1α/VEGF信號(hào)通路，促進(jìn)卵巢癌的血管形成過程，最終參與卵巢癌的發(fā)病過程，但其調(diào)控的上下游分子機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。以上結(jié)果提示調(diào)控CD147的上游信號(hào)分子機(jī)制或許亦可為卵巢癌進(jìn)展研究提供關(guān)鍵的理論基礎(chǔ)。因此基于以上研究結(jié)果以及文獻(xiàn)提示，我們思考miR-125b-5p是否通過調(diào)控CD147抑制卵巢癌惡行生物學(xué)行為？以及miR-125b-5p是直接調(diào)控還是間接調(diào)控CD147發(fā)揮作用？這均尚不清楚。本研究為解決這些問題，首先通過RTqPCR 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示卵巢癌組織和細(xì)胞株中miR-125b-5p低表達(dá)，而CD147高表達(dá)，這一結(jié)果和課題組研究結(jié)果一致。隨后通過Pearson相關(guān)性分析明確二者為負(fù)相關(guān)。CD147能促進(jìn)卵巢癌的增殖、侵襲和遷移，而miR-125b-5p的作用相反，二者之間的調(diào)控機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

礦井提升機(jī)也是煤礦生產(chǎn)過程中重要的運(yùn)輸設(shè)備，具有控制難度較大、運(yùn)行速度快和慣性質(zhì)量大的特征。礦井提升機(jī)的運(yùn)行環(huán)境極為復(fù)雜，對(duì)設(shè)備的正常運(yùn)行影響較大，如在惡劣的開采環(huán)境中提升機(jī)的某些電氣元件常出現(xiàn)失靈等現(xiàn)象。此外，礦井提升機(jī)在工作過程常面臨交替轉(zhuǎn)換工作，常出現(xiàn)機(jī)械設(shè)備故障等問題，嚴(yán)重影響了礦井提升機(jī)的正常使用效率，降低了煤礦企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。在礦井提升機(jī)設(shè)備中采用微電子技術(shù)、仿真模擬技術(shù)等可以有效提升礦井提升機(jī)的智能化程度和機(jī)器運(yùn)行的安全性能。自動(dòng)化的傳感元器件能夠增強(qiáng)礦井提升機(jī)的自我判斷能力和自我診斷能力，不僅簡(jiǎn)化了提升機(jī)的制作結(jié)構(gòu)，還便于機(jī)械的安裝與維護(hù)，有效提高了礦井提升機(jī)的性能。

通過Starbase在線數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)顯示，miR-125b-5p與CD147具有潛在結(jié)合位點(diǎn)，隨后使用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，明確miR-125b-5p可直接靶向CD147發(fā)揮作用。隨后通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-125b-5p后，CD147蛋白和mRNA的表達(dá)均降低，而沉默miR-125b-5p后，CD147的蛋白和mRNA表達(dá)均會(huì)增加。這證實(shí)miR-125b-5p能靶向結(jié)合并負(fù)調(diào)控CD147。另外，通過Transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究miR-125b-5p與CD147的相互作用對(duì)卵巢癌細(xì)胞的影響。通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，沉默miR-125b-5p能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移，過表達(dá)miR-125b-5p后，卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移受到明顯抑制，隨后進(jìn)行rescue 實(shí)驗(yàn)，過表達(dá)miR-125b-5p 后再過表達(dá)CD147，卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移的能力恢復(fù)，這證實(shí)了miR-125b-5p通過負(fù)調(diào)控CD147，從而抑制了卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移的能力。本研究首次證實(shí)miR-125b-5p通過靶向CD147促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，這為卵巢癌的診療提供新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

這里使用DDR2存放算法的激勵(lì),具體內(nèi)存條型號(hào)是MT4HTF3264HY。采用Xilinx的IP核MIG產(chǎn)生DDR2控制器,DDR2控制器經(jīng)分層處理,可以簡(jiǎn)化設(shè)計(jì)并使其模塊化[13]。

綜上所述，本研究證實(shí)miR-125b-5p可通過直接靶向卵巢癌重要調(diào)控基因CD147的表達(dá)，從而抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移與侵襲的能力。本研究通過了解miR-125b-5p在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為進(jìn)一步理解卵巢癌的發(fā)生機(jī)制以及為卵巢癌的診療靶點(diǎn)選擇提供新的理論依據(jù)。