一種小體積注射液裝量檢查方法的探討

魏文，王彥娜，吳明遠(yuǎn)，王建剛

康立泰藥業(yè)有限公司，山東 青島 266000

裝量即凈含量，是定量包裝產(chǎn)品的基本屬性。國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的《定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督規(guī)定》（總局令第 75 號）于 2006年 1 月 1 日在各行業(yè)中施行［1］。我國早期藥品標(biāo)準(zhǔn)對單劑量藥品重（裝）量差異、裝量檢查項(xiàng)目進(jìn)行了規(guī)定，以保證藥品的有效性、安全性和均一性。

目前，計(jì)算藥品裝量的方法有兩種：重量法和容量法［2-3］。其中，重量法適用于以重量計(jì)的藥品制劑，不適用于小體積注射液的裝量檢測；而容量法采用注射器量取體積，僅能精確到小數(shù)點(diǎn)后一位，且注射器讀數(shù)較粗，會造成較大的誤差［4］，均不適用小體積注射液的裝量檢測。因此，開發(fā)一種精確度高、適用于小體積注射液制劑裝量檢測的方法十分重要。

本實(shí)驗(yàn)針對上述現(xiàn)有技術(shù)不適用于小體積注射液制劑裝量檢測、誤差較大等問題，參考《中國藥典》三部（2020 版）中關(guān)于注射劑項(xiàng)下裝量檢查中重量／相對密度計(jì)算裝量的描述（三部通則0102）［2］，進(jìn)行人白介素-12（human interleukin-12，hIL-12）相對密度測定和裝量檢查，探討采用一種精確度高、適用于小體積注射液制劑裝量檢測的方法——重量／ 相對密度計(jì)算裝量［4-5］。

1 材料與方法

1.1 供試品 hIL-12 注射液（CHO 細(xì)胞表達(dá)，批號：201807002、201807004、201808006）由本公司生產(chǎn)。

1.2 主要儀器 萬分之一分析天平（配套打印機(jī)）AUW220 購自島津公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱DHG-9246購自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；藥品強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱SHH-100GD-2 購自重慶永生實(shí)驗(yàn)儀器廠；生化培養(yǎng)箱SPX-100B-Z 購自上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；1 mL 移液器購自美國Thermo fisher 公司。

1.3 相對密度測定

1.3.1 測定方法 將供試品存放于4 ℃冰箱備用，測量前平衡至室溫。取1 支西林瓶作為空容器，用純化水清潔內(nèi)外壁3 次，在105 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥至恒重，取出置干燥器中放冷至室溫，再精密稱定西林瓶（空容器）的重量。用已計(jì)量的1 mL 移液槍準(zhǔn)確量取1 mL 供試品，注入至上述已恒重的西林瓶中，精密稱定總重量，按下式計(jì)算每1 mL 供試品的重量，即供試品的相對密度。

供試品的相對密度 = 1 mL 供試品和容器的總重量-空容器的重量

1.3.2 不同溫度供試品對相對密度測定影響的檢測2 名實(shí)驗(yàn)員分別在20、22、24 ℃條件下，按照1.3.1項(xiàng)方法測定201808006 批供試品的相對密度，同時(shí)測定滅菌注射用水相對密度作為內(nèi)參。重復(fù)10 次，計(jì)算供試品、滅菌注射用水、供試品與滅菌注射用水比值的變異系數(shù)（CV）及不同溫度間的差異。

1.3.3 不同批次供試品對相對密度測定影響的檢測2 名實(shí)驗(yàn)員分別在22 ℃條件下，按照1.3.1 項(xiàng)方法測定 3 批供試品（201807002、201807004、201808006）的相對密度。重復(fù)10 次，計(jì)算供試品CV 和不同批次間的差異。

1.3.4 強(qiáng)制條件穩(wěn)定性檢測 取201807002 批供試品，分別經(jīng)4 ℃避光（對照組）、40 ℃高溫避光（高溫組）、4 ℃ 4 500 lx 光照（光照組）條件處理各 10 瓶。分別于7、14 d 取出每種條件處理的供試品各5 瓶，平衡至20 ～24 ℃，按照1.3.1 項(xiàng)方法測定相對密度。計(jì)算供試品CV 和各處理?xiàng)l件間的差異。

1.4 裝量檢查法 2 名實(shí)驗(yàn)員分別進(jìn)行獨(dú)立試驗(yàn)：取5個(gè)西林瓶（無膠塞），用純化水清潔內(nèi)外壁3 次，在105 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥至恒重，取出置干燥器中放冷至室溫；取供試品5 瓶，平衡至室溫。精密稱定西林瓶（空容器）重量，立即除去供試品鋁蓋及膠塞（開啟時(shí)注意避免損失），用2.5 mL 干燥量入式注射器及注射針頭抽盡供試品內(nèi)容物［4-6］，注入上述西林瓶中，精密稱定總重量。按下式計(jì)算每個(gè)容器內(nèi)容物的裝量［7-8］，并求其平均裝量。

供試品裝量=（總重量-空容器重量）／供試品相對密度

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS Statistics 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用方差分析，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［9-10］。

2 結(jié) 果

2.1 相對密度測定

2.1.1 不同溫度供試品對相對密度測定的影響 不同溫度下供試品相對密度的平均值為1.004 g ／ mL，10 次重復(fù)測定的CV 均小于2%。2 名實(shí)驗(yàn)員分別在不同溫度下測定供試品相對密度的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F 分別為 0.362 和 1.211，P 分別為 0.700 和0.314）。見表1。表明正常室溫波動(dòng)對供試品的相對密度測定無影響。

表1 不同溫度下供試品相對密度檢測結(jié)果（g ／ mL）Tab.1 Relative density of test samples at various temperatures（g ／ mL）

不同溫度下滅菌注射用水相對密度10 次重復(fù)測定的CV 均小于2%。不同實(shí)驗(yàn)員、不同溫度的檢測結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F 分別為0.146 和0.071，P 分別為0.865 和0.932）。見表2。表明正常室溫波動(dòng)對滅菌注射用水的相對密度測定無影響。

表2 不同溫度下滅菌注射用水相對密度檢測結(jié)果（g ／ mL）Tab.2 Relative density of sterilized water for injection at various temperatures（g ／ mL）

實(shí)驗(yàn)員 1 在不同溫度下（20、22、24 ℃）測定供試品與滅菌注射用水相對密度比值的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 0.283，P = 0.755），實(shí)驗(yàn)員 2 在不同溫度下（20、22、24 ℃）測定供試品與滅菌注射用水相對密度比值的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 1.134，P =0.337），見表3。表明正常室溫波動(dòng)對供試品性質(zhì)無影響，供試品性質(zhì)較穩(wěn)定，該方法用于本供試品檢測的適用性較好。

表3 不同溫度下供試品與滅菌注射用水相對密度比值檢測結(jié)果Tab.3 Relative density ratio of test samples to sterilized water for injection at various temperatures

2.1.2 不同批次供試品對相對密度測定的影響 不同批次供試品相對密度的平均值為1.004 g ／ mL，CV 均小于2%。2 名實(shí)驗(yàn)員檢測3 批供試品相對密度的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F 分別為0.036 和1.820，P 分別為0.965 和0.181）。見表4。表明不同批次供試品性質(zhì)較穩(wěn)定。

表4 不同批次供試品相對密度檢測結(jié)果（g ／ mL）Tab.4 Relative densities of test samples of various batches（g ／ mL）

2.1.3 強(qiáng)制條件穩(wěn)定性 各種處理?xiàng)l件供試品相對密度的平均值為1.004 g ／ mL，CV 均小于2%。處理7 和14 d 各組供試品相對密度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F 分別為 0.156 和 0.219，P 分別為 0.858 和0.806）。見表5。表明供試品性質(zhì)較穩(wěn)定，高溫、光照等可能造成供試品性質(zhì)改變的強(qiáng)制條件對其相對密度均無影響。

表5 各種處理?xiàng)l件下供試品的相對密度（g ／ mL）Tab.5 Relative densities of test sample sunder various conditions for treatment（g ／ mL）

上述試驗(yàn)結(jié)果表明，不同環(huán)境溫度間、批次間、穩(wěn)定性研究不同時(shí)間取樣的相對密度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05），可將 hIL-12 相對密度確定為一個(gè)固定數(shù)值，即測定結(jié)果的平均值，不用每次測定。常規(guī)儲存條件（4 ℃）存放的批生產(chǎn)供試品和穩(wěn)定性研究供試品的相對密度平均值均為1.004 g ／ mL，最終取2 次試驗(yàn)結(jié)果的平均值作為hIL-12 的相對密度，為 1.004 g ／ mL。

2.2 裝量檢查結(jié)果 2 名實(shí)驗(yàn)員獨(dú)立試驗(yàn)的3 批供試品平均裝量檢查結(jié)果分別為1.09、1.08、1.09、1.08、1.09 和 1.09 mL（最后一位為實(shí)測數(shù)值），均大于產(chǎn)品的標(biāo)示裝量（1.00 mL），符合規(guī)定。5 瓶檢測結(jié)果的CV 均小于2%，且不同人員操作差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（不同批次的F 分別為2.133、0.800、3.200，P 分別為 0.182、0.397、0.111）。見表 6。表明重量／ 相對密度計(jì)算裝量的方法適用于hIL-12裝量檢查，且重復(fù)性較好。

表6 3 批供試品不同實(shí)驗(yàn)員裝量檢查結(jié)果（mL）Tab.6 Examination results of filling quantities of three batches of test samples by different operators（mL）

3 討 論

《中國藥典》三部（2020 版）中“最低裝量檢查法”（通則0942）要求：灌裝標(biāo)示裝量為1 mL 的注射劑應(yīng)適當(dāng)增加裝量，易流動(dòng)液增加0.10 mL，黏稠液增加0.15 mL，其最后一位數(shù)值是有效位（相對密度 ＞1.25g ／ mL 的溶液為黏稠液），對于以容量計(jì)的小規(guī)格標(biāo)示裝量劑，可改用重量法或按品種項(xiàng)下的規(guī)定方法檢查［2］。

本公司hIL-12 為標(biāo)示裝量1 mL 的易流動(dòng)液，采用容量法有以下缺點(diǎn)：用2.5 mL 注射器量取體積只能精確讀取到小數(shù)點(diǎn)后一位，檢出的每支裝量與實(shí)際裝量差距較大；用5 mL 量筒檢查1 mL 供試品時(shí)相對誤差大［11］，不能滿足“量筒的大小應(yīng)使待測體積至少占其額定體積的40%”的要求，而目前市場上量筒的最小額定體積為5 mL，且用肉眼估讀誤差大；注射器的量入式標(biāo)化國內(nèi)尚無標(biāo)準(zhǔn)可循，且注射器讀數(shù)較粗，有造成結(jié)果誤判的可能性；判斷標(biāo)準(zhǔn)只有下限無上限，可能造成因注射液使用超量造成不必要的不良反應(yīng)等問題［12］。因此，參考《中國藥典》三部（2020 版）關(guān)于注射劑項(xiàng)下的規(guī)定方法，改用重量／ 相對密度計(jì)算裝量的方法進(jìn)行檢測。

本文相對密度測定方法避免了比重瓶測定法藥液用量大［13-14］（目前市場上比重瓶的最小額定體積為5 mL），且方便快捷，重復(fù)性、穩(wěn)定性和適用性較好。采用本文方法計(jì)算小容量注射劑裝量，無需量筒，避免了容量法誤差大等缺點(diǎn)［15］，取3 位有效數(shù)字進(jìn)行結(jié)果判斷，能更快速、準(zhǔn)確、真實(shí)地測定小容量注射劑每支的裝量。采用機(jī)械分裝時(shí)，裝量的波動(dòng)不可避免，應(yīng)控制在一定范圍內(nèi)，采用本方法可按藥典要求結(jié)合本產(chǎn)品安全劑量，規(guī)定規(guī)格為1 mL 注射液的裝量范圍，以確保臨床給藥量，防止使用超量。