乳腺癌組織MAL2和 IGF-1R蛋白表達與病理特征及預(yù)后的相關(guān)性研究

劉曉鑫，白春峽，伏 玉（營口市中心醫(yī)院 ，遼寧營口 115000）

乳腺癌（breast cancer）是較為多見的惡性腫瘤之一，據(jù)流行病學(xué)提示，乳腺癌的發(fā)病率正日漸升高，每年約新增30萬乳腺癌病例，死亡人數(shù)高達4萬人左右[1]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的提高，對于乳腺癌的治療方式也逐漸增加，包括內(nèi)分泌治療、抗HER-2靶向治療、乳腺癌根治術(shù)等，治療效果已取得了較大的進步，但患者后期復(fù)發(fā)率仍較高[2-3]。T細胞分化蛋白（mal T-cell differentiation protein 2，MAL2）是一種與胞內(nèi)囊泡蛋白運輸功能有關(guān)的分子，已被證實在源自上皮的腫瘤中發(fā)揮著重要的作用[4]。胰島素樣生長因子1受體（insulin like growth factor 1 receptor，IGF-1R）是一種跨膜蛋白，已被證實其介導(dǎo)的信號和腫瘤的轉(zhuǎn)移和分化有關(guān)[5]。近年來，腫瘤分子標(biāo)志物已逐漸成為乳腺癌的研究重點，在乳腺癌的診斷以及預(yù)后中發(fā)揮著重要的作用，但對于MAL2和IGF-1R的研究比較少。本研究擬研究乳腺癌組織中MAL2，IGF-1R蛋白表達與乳腺癌患者病理特點及不良預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床診治乳腺癌提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取營口市中心醫(yī)院2015年3月～2016年3月收治的131例乳腺癌患者作為研究對象，年齡41～62（53.32±5.43）歲；TMN分期：I～II期57例，III～IV期74例；病理類型：浸潤性導(dǎo)管癌66例，非浸潤性導(dǎo)管癌65例；分化程度：高分化45例，中低分化86例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《中華婦產(chǎn)科學(xué)》[6]中乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者經(jīng)病理學(xué)證實為乳腺癌；③患者精神意志正?？膳浜现委煛Ｅ懦龢?biāo)準(zhǔn)：①患者并發(fā)嚴重免疫系統(tǒng)障礙；②患者并發(fā)嚴重心力衰竭或者肝腎功能衰竭；③患者預(yù)期生存時間＜3個月；④患者為妊娠期孕婦；⑤患者資料不完整；⑥隨訪失訪。

1.2 儀器與試劑 兔抗MAL2單克隆抗體（深圳晶美生物工程有限公司，批號：YS-K64163），兔抗IGF-1R單克隆抗體（上海瀘震實業(yè)有限公司，批號：HZbscience），枸櫞酸鈉緩沖溶液（上海士鋒生物科技有限公司，批號：sf2415），蘇木精（北京伊塔生物科技有限公司，批號：YT1086），二甲苯（上海吉至生化科技有限公司，批號：D33950-5g），梯度酒精（上海一研生物科技有限公司，批號：EY-elisa4218），通用型二抗（北京百奧萊博科技有限公司，批號：SY0708-EWM），組織切片機（上海玉研科學(xué)儀器有限公司，型號5000smz），顯微鏡（南京貝登醫(yī)療股份有限公司，型號V116291）。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)染色法：術(shù)中收集乳腺癌患者癌旁正常組織和癌組織，用10g/dl中性甲醛固定，以石蠟包埋，制作為4μm的厚片，使用免疫組織化學(xué)SP法進行檢測。由兩名專業(yè)醫(yī)師采用雙盲法進行閱片。免疫組織化學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn)：胞漿以及胞核可觀察到棕黃色顆粒，按染色程度進行計分，0分為未成功染色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細胞率：0分為＜5%，1分為6%～25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為76%～100%。染色程度分數(shù)乘以陽性細胞率分數(shù)即為蛋白表達結(jié)果，陰性表達為0～4分，陽性表達為＞5分。

1.3.2 隨訪情況：采用電話及門診檢查相結(jié)合的方式進行隨訪，行體格檢查、影像學(xué)檢查等。納入本研究后第1年每3個月隨訪1次，第2年每6個月隨訪一次，其后1年隨訪1次，納入本研究60個月止。記錄隨訪期間復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和死亡等情況，將隨訪期間復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和死亡的患者列入預(yù)后較差組，反之則列入預(yù)后良好組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS20.0進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以n表示，組間比較采用χ2檢驗；乳腺癌患者預(yù)后因素分析采用COX比例風(fēng)險回歸模型。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者癌組織和癌旁正常組織MAL2和IGF-1R對比 見圖1，圖2。乳腺癌患者癌組織MAL2[77.86%（102/131)]蛋白陽性率顯著高于癌旁正常組織 [17.56%（23/131）]，乳腺癌患者癌組織IGF-1R[80.15%（105/131）]蛋白陽性率顯著高于癌旁正常組織[21.37%(28/131)]，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=95.482，P=0.002；χ2=90.540，P=0.003)。

圖1 MAL2蛋白在乳腺癌患者癌組織和癌旁正常組織表達（×400）

圖2 IGF-1R蛋白在乳腺癌患者癌組織和癌旁正常組織表達（×400）

2.2 不同病理特點患者MAL2和IGF-1R蛋白表達分析 見表1。在不同病理類型乳腺癌中MAL2和IGF-1R蛋白陽性表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；在不同乳腺癌TMN分期以及分化程度上MAL2和IGF-1R蛋白陽性表達率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

表1 不同病理特點患者MAL2和IGF-1R蛋白表達分析

2.3 預(yù)后不同的乳腺癌患者MAL2，IGF-1R蛋白水平對比 131例乳腺癌患者隨訪期間，預(yù)后較差患者59例，預(yù)后良好患者72例。預(yù)后較差組患者MAL2蛋白[94.92%（56/59）]陽性表達率顯著高于預(yù)后良好組[36.11%（26/72）]，預(yù)后較差組患者IGF-1R蛋白[91.53%（54/59)]陽性表達率顯著高于預(yù)后良好組[41.67%（30/72)]，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.110，8.727，均P=0.000)。

2.4 影響乳腺癌患者預(yù)后因素的COX比例風(fēng)險回歸分析 見表2。將TMN分期、分化程度、MAL2蛋白表達、IGF-1R蛋白表達作為自變量，將預(yù)后作為因變量，進行COX比例風(fēng)險回歸模型分析得出，中低分化、III-IV期、MAL2蛋白陽性表達、IGF-1R蛋白陽性表達是乳腺癌患者不良預(yù)后的危險因素（P＜0.05）。

表2 乳腺癌預(yù)后COX比例風(fēng)險回歸模型的單因素和多因素分析

3 討論

乳腺癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤之一，是婦科內(nèi)發(fā)病率和致死率最高的癌癥[7-8]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對于乳腺癌的認識逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)腫瘤分子標(biāo)志對于乳腺癌的診斷以及預(yù)后預(yù)測具有較高的意義[9-10]。因此本次研究檢測所選患者MAL2和IGF-1R蛋白，并與患者病理特點及預(yù)后情況進行分析，希望為臨床的診治提供參考。

MAL2屬于四跨整合膜蛋白，定位在染色體8q 24上，與大部分惡性腫瘤如腎癌、肺癌、膽管癌等有關(guān)[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，MAL2在胰腺癌和直腸癌中具有較高的表達，同時與患者的預(yù)后具有明顯的相關(guān)性[12]。MAL2的異常表達雖然無法直接促進癌癥的發(fā)生和發(fā)展，但其水平能夠間接地促進蛋白質(zhì)靶向性異常，引發(fā)蛋白質(zhì)的分布出現(xiàn)問題，進而引起腫瘤的異常增生和分化。本研究發(fā)現(xiàn)，MAL2在乳腺癌中呈高表達，且該蛋白在不同乳腺癌TMN分期以及分化程度上的陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示MAL2在乳腺癌發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。同時，TMN分期和低分化程度是MAL2蛋白異常表達的危險因素，說明當(dāng)TMN分期III～IV以及低分化程度乳腺癌患者體內(nèi)，MAL2蛋白的表達水平已出現(xiàn)明顯的升高。有研究認為[13]，MAL2在原發(fā)性肝癌患者癌組織中存在過表達，同時與患者肝癌細胞的轉(zhuǎn)移相關(guān)。MAL2的多次跨膜，多通過細胞內(nèi)的協(xié)同轉(zhuǎn)運完成，這會使細胞蛋白表達以及腫瘤細胞功能出現(xiàn)明顯改變。本研究顯示，預(yù)后較差組患者MAL2蛋白陽性表達率顯著高于預(yù)后良好組患者，且MAL2蛋白陽性表達是患者預(yù)后不良的獨立危險因素，這說明MAL2在患者乳腺癌預(yù)后轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮著重要的作用，臨床在后期應(yīng)當(dāng)密切觀察患者體內(nèi)MAL2表達水平，以及時干預(yù)。IGF-1R蛋白是一種多功能生長因子，在細胞的增生、分化以及凋亡中發(fā)揮著較高的作用[14-15]。有研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌中，IGF-1的表達明顯提高，且預(yù)后較差患者明顯高于預(yù)后良好患者[16]。同時研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1在乳腺癌患者血清中同樣有較高的表達。以上研究均能夠說明，IGF-2在癌癥中發(fā)揮著重要意義，但目前對于IGF-1與癌癥預(yù)后的相關(guān)性并無明確的結(jié)論，可能與內(nèi)分泌、自分泌/旁分泌的方式進行影響。本研究數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌組織IGF-1R蛋白陽性率顯著高于癌旁正常組織，提示該蛋白在乳腺癌中亦呈高表達。在機體葡萄糖轉(zhuǎn)運中，IGF-1R通路效果下，能夠使人源葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白內(nèi)活性明顯升高，這會促進葡萄糖的轉(zhuǎn)運能力，使腫瘤組織生長和增殖速度更快[17-18]。本研究結(jié)果提示，在不同乳腺癌TMN分期以及分化程度上IGF-1R蛋白陽性表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明在腫瘤的形成和發(fā)展過程中，IGF-1R發(fā)揮著重要的作用，不僅可以作為IGF-1的受體還能夠在細胞生長代謝中起到重要的效果。本研究結(jié)果提示，預(yù)后較差組IGF-1R蛋白陽性率顯著高于預(yù)后良好組，IGF-1R蛋白陽性表達是患者不良預(yù)后的獨立危險因素，這可能是因為，IGF-1R能夠介導(dǎo)自身所生成的IGF-1s的信號傳遞，不僅對于腫瘤的生成、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移能夠起到促進作用，而且嚴重影響患者的預(yù)后情況。同時IGF-1R還是細胞內(nèi)重要的第二信號系統(tǒng)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，促進PI3K的水平，增強癌細胞的增殖和抑制[19-20]。本次研究發(fā)現(xiàn)，MAL2和IGF-1R蛋白在乳腺癌發(fā)生及進展過程中扮演著重要的角色，對兩者進行檢測的意義價值較高。但本次研究因為隨訪時間較短以及病例納入較少的因素，導(dǎo)致實驗存在一定的偏差，因此以后應(yīng)彌補此不足。

綜上所述，MAL2和IGF-1R蛋白在乳腺癌中具有較高的表達水平，且與乳腺癌患者TMN分期和分化程度具有明顯的相關(guān)性，同時可能是患者不良預(yù)后的危險因素之一。