慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α與肝組織病理分級及分期的相關(guān)性研究

澤汪格瑪，楊建蓉，歐仕穎，余長芳（甘孜藏族自治州人民醫(yī)院 ，四川甘孜 626000）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是嗜肝DNA病毒，全球約有20億人口曾感染HBV，其中有2.4億人為慢性HBV感染者[1]。持續(xù)性HBV感染對肝臟功能有嚴(yán)重?fù)p傷，慢性HBV感染也是導(dǎo)致肝硬化、肝細(xì)胞癌的主要因素[2-3]。目前，慢性乙型肝炎防治指南推薦丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine transferase，ALT）＞2倍正常值上限的慢性乙肝患者進(jìn)行肝臟活組織檢查，以指導(dǎo)抗病毒治療[4]。但肝臟活組織檢查存在一定的局限性[5]，因此，急需無創(chuàng)性檢測指標(biāo)用于評估患者是否需要抗病毒治療。銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin，CP）、肝細(xì)胞核因子1α（hepatic nuclear factor 1α，HNF 1α）均可反映肝功能狀態(tài)，相關(guān)報(bào)道顯示，血清CP，HNF 1α可用于各種肝病的診斷與鑒別[6-7]。但在慢性HBV感染患者肝臟炎癥及纖維化進(jìn)展過程中，上述指標(biāo)是否可準(zhǔn)確反映慢性HBV感染患者肝臟炎癥分級和纖維化分期尚不明確。有鑒于此，本研究對血清CP，HNF 1α與慢性HBV感染患者肝組織病理分級及分期的關(guān)系進(jìn)行研究，旨在為慢性HBV感染的臨床評估與治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年2月～2020年12月于甘孜藏族自治州人民醫(yī)院就診并接受肝臟活組織檢查的慢性HBV感染者158例為感染組，年齡26～68(43.26±10.57)歲；男性105例，女性53例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①慢性HBV感染符合2015版《慢性乙型肝炎防治指南》[8]中的相關(guān)定義；②年齡18～70周歲；③接受肝臟活組織檢查；④自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近1個(gè)月內(nèi)服用免疫抑制劑或其他影響本研究結(jié)果藥物，如可的松、強(qiáng)的松等；②存在肝臟活組織檢查禁忌癥；③并發(fā)其他類型病毒性肝炎或其他肝臟疾病；④伴有嚴(yán)重心、肺、腎等功能障礙；⑤并發(fā)惡性腫瘤、全身性炎癥疾病或自身免疫性疾病；⑥處于妊娠期、哺乳期婦女。并選取同期醫(yī)院內(nèi)體檢正常者50例為對照組，年齡24～70歲，平均年齡45.53±11.82歲；男性30例，女性20例。兩組受試者年齡、性別比例資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 儀器與試劑 肝功能指標(biāo)的檢測采用7600型全自動生化分析儀及配套試劑（日本日立）；CP，HNF 1α的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（美國Bio Rad）。

1.3 方法 清晨采集受試者空腹靜脈血5 ml，室溫下靜置20 min，3 000 r/min離心15 min分離上層血清，檢測ALT，AST，CP和HNF 1α含量。感染組患者在腹部B超引導(dǎo)下進(jìn)行肝穿刺活檢，穿刺針刺入深度至少2cm，獲取肝組織立即送病理科，采用HE染色，通過Metavir評分[9]對肝組織炎癥和纖維化程度進(jìn)行評級，其中肝組織炎癥分為4級：無炎癥活動為G0級，輕度炎癥活動為G1級，中度炎癥活動為G2級，重度炎癥活動為G3級；肝纖維化分為5期：無病變?yōu)镕0期，匯管區(qū)纖維性擴(kuò)大但無纖維間隔形成為F1期，匯管區(qū)纖維性擴(kuò)大且少數(shù)纖維間隔形成為F2期，多數(shù)纖維化間隔形成但無硬化結(jié)節(jié)為F3期，肝硬化為F4期。肝組織炎癥活動分級＞G2級、肝纖維化分期＞F2期提示炎癥顯著或纖維化程度顯著。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0分析處理數(shù)據(jù)，正態(tài)計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析或t檢驗(yàn)，偏態(tài)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)變換后再進(jìn)行比較；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）或率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Logistic回歸模型分析影響肝組織炎癥和纖維化的因素；相關(guān)性分析采用Paerson相關(guān)系數(shù)描述，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平的比較 檢測感染組和對照組血清CP，HNF1α，ALT及AST水平，結(jié)果顯示，感染組血清CP（205.63±18.74mg/L），HNF1α（3.25±0.91ng/ml）水平低于對照組（283.59±22.35mg/L, 6.38±0.83ng/ml），ALT（149.67±23.91U/L），AST（109.84±19.23U/L）水平高于對照組（25.13±5.62U/L, 19.93±4.37U/L），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=24.440, 21.634; 36.457, 32.743, 均P＜0.001）。

2.2 不同肝組織炎癥分級的慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平比較 根據(jù)Metavir評分對肝組織炎癥進(jìn)行評估，＜G2級121例（G0級19例，G1級102例），≥G2級37例（G2級23例，G3級14例）。比較＜G2級和≥G2級慢性HBV感染患者血清CP，HNF1α，ALT及AST水平，結(jié)果顯示，＜G2級患者血清CP（211.37±20.54mg/L），HNF1α（3.42±1.05ng/ml）水平高于≥G2級 者（186.96±15.32mg/L,2.69±0.83ng/ml）；ALT（134.56±17.68U/L），AST（92.53±17.93U/L）水平低于≥G2級 者（199.08±22.34U/L, 166.45±20.58U/L），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.704, 3.872; 18.212, 21.183, 均P＜0.001）。

2.3 不同肝纖維化分期的慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平比較 根據(jù)Metavir評分對肝纖維化程度進(jìn)行評估，＜F2期122例（F0期55例，F(xiàn)1期67例），≥F2期36例（F2期25例，F(xiàn)3期7例，F(xiàn)4期4例）。比較＜F2期和≥F2期慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平，結(jié)果顯示，＜F2期患者CP（215.69±21.37mg/L），HNF1α（3.58±1.12ng/ml）水平高于≥F2期 者（171.54±16.64mg/L,2.13±0.55ng/ml）；ALT（130.25±16.52U/L），AST（84.53±18.23U/L）水平低于≥F2期 者（215.48±21.69U/L, 195.61±21.37U/L），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.408, 7.431; 25.229, 30.857, 均P＜0.001）。

2.4 肝組織炎癥或纖維化顯著的危險(xiǎn)因素分析 見表1。采用Logistic回歸模型分析影響肝組織炎癥和纖維化的因素，結(jié)果顯示，血清CP，HNF 1α升高分別是肝組織炎癥或纖維化顯著的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05）。

表1 肝組織炎癥或纖維化顯著的危險(xiǎn)因素分析

2.5 慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平相關(guān)性分析 采用Paerson相關(guān)系數(shù)描述慢性HBV感染患者血清CP，HNF 1α，ALT及AST水平相關(guān)性，結(jié)果顯示，CP，HNF 1α與ALT，AST呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.452，-0.429；-0.521，-0.483，均P＜0.001）。

3 討論

臨床數(shù)據(jù)顯示，HBV感染患者中大多為慢性感染狀態(tài)，表現(xiàn)為血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和/或HBV DNA陽性持續(xù)時(shí)間≥6個(gè)月，這種持續(xù)感染可引起肝組織出現(xiàn)纖維化，甚至肝硬化[10]。目前，臨床常用肝組織活檢評價(jià)肝臟病變的嚴(yán)重程度，推薦Metavir評分對組織炎癥與纖維化程度進(jìn)行分期，但肝組織活檢屬于有創(chuàng)性檢查，結(jié)果判讀有一定的主觀差異[11]。而肝臟瞬時(shí)彈性成像技術(shù)雖屬于無創(chuàng)性檢查，但容易受腹腔積液、肥胖等因素的影響[12]。因此，對于無法進(jìn)行肝組織活檢、肝臟瞬時(shí)彈性成像技術(shù)等檢查的患者，亟需其他可客觀評估病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

血清學(xué)檢查具有無創(chuàng)、重復(fù)性好、價(jià)格便宜等特點(diǎn)，是反映肝性病理損傷的理想指標(biāo)[13]。CP是肝臟合成的糖蛋白，可反映肝臟合成功能，在各種肝病中的臨床應(yīng)用價(jià)值受到廣泛關(guān)注[14]。CORRADINI等[15]納入328例非酒精性脂肪肝患者，發(fā)現(xiàn)CP基因多態(tài)性可能與患者高鐵蛋白血癥和肝鐵儲量增加有關(guān)，攜帶有這種變異的患者存在更嚴(yán)重的肝纖維化。WANG等[16]通過分析細(xì)胞因子表達(dá)譜發(fā)現(xiàn)，CP可能有助于修復(fù)氧化應(yīng)激，維持肝細(xì)胞在無藥耐受同種異體原位肝移植模型中的生存。KANG等[17]通過回顧性研究，血清CP水平與HBV感染患者肝纖維化呈負(fù)相關(guān)，聯(lián)合CP，血小板和HBsAg可有效預(yù)測顯著纖維化，晚期纖維化和肝硬化。HNF 1α主要表達(dá)于肝臟，可調(diào)控肝臟中多個(gè)基因表達(dá)，參與脂代謝、碳水化合物的合成及代謝等生物過程，對于促進(jìn)肝細(xì)胞的分化成熟，維持肝細(xì)胞正常的功能有重要作用[18]。基礎(chǔ)研究成果表明，沉默HNF1α可激活炎癥信號通路，加重正常干細(xì)胞的損傷和肝纖維化程度[19]。鄧羊羊等[20]采用免疫組織化學(xué)染色法對慢性乙型肝炎患者的肝穿刺組織觀察顯示，HNF1α的表達(dá)強(qiáng)度隨著肝臟炎癥及纖維化程度的加重而降低，提示HNF 1α可能在肝臟炎癥及纖維化過程中其負(fù)向調(diào)控作用。上述研究表明，CP，HNF1α可用于HBV感染的病情評估。

本研究對血清CP，HNF1α與慢性HBV感染患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，感染組CP，HNF 1α水平低于對照組，進(jìn)一步表明上述指標(biāo)與慢性HBV感染密切相關(guān)，是判斷是否存在疾病的潛在診斷標(biāo)志。同時(shí)，不同肝組織炎癥、纖維化程度患者CP，HNF1α水平有顯著差異，CP，HNF 1α分別與肝功能酶譜ALT，AST呈負(fù)相關(guān)，血清CP，HNF1α升高可能是肝組織炎癥或纖維化顯著的獨(dú)立保護(hù)因素，由此推測，CP，HNF 1α可能參與了慢性HBV感染患者肝組織病理變化過程，可用于評估慢性HBV感染患者病情嚴(yán)重程度。

綜上所述，血清CP，HNF 1α水平與慢性HBV感染患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可反映肝組織炎癥及纖維化進(jìn)程，有望作為臨床反映慢性HBV感染患者肝組織病理變化的敏感指標(biāo)。但本研究病例樣本數(shù)較少，仍需要更大樣本，進(jìn)一步闡明CP，HNF 1α在慢性肝損傷、肝纖維化中的生物學(xué)特征。