血漿S1P和HDL-C表達(dá)水平與帕金森病患者臨床癥狀的相關(guān)性研究

閆 欣，商素亮，李 娜，武 嬌

（1.保定市第二中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北保定 072750; 2.河北省第八人民醫(yī)院老年科，石家莊 050000）

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是老年人常見神經(jīng)系統(tǒng)性疾病，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，調(diào)查顯示85歲以上老年人群發(fā)病率達(dá)5%左右，臨床主要表現(xiàn)為典型運(yùn)動(dòng)癥狀如靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩、姿勢(shì)反射障礙等及非運(yùn)動(dòng)癥狀如認(rèn)知障礙、焦慮、抑郁等，而非運(yùn)動(dòng)癥狀可能出現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)癥狀之前加速PD的發(fā)生或出現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)癥狀之后加重PD患者殘疾，給家庭、社會(huì)帶來巨大的精神負(fù)擔(dān)[1-2]。尋找評(píng)估PD嚴(yán)重程度的生物學(xué)指標(biāo)作為輔助診斷手段對(duì)提高患者預(yù)后具有現(xiàn)實(shí)意義。氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致多巴胺水平降低是PD的主要發(fā)病機(jī)制，多巴胺神經(jīng)元變性壞死，導(dǎo)致多巴胺遞質(zhì)生成障礙，從而使黑質(zhì)紋狀體通路中多巴胺與乙酰膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)平衡失調(diào)，產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直[3]。鞘氨醇1磷酸（sphingosine1phosphate，S1P）是鞘磷脂代謝過程中重要信號(hào)分子，主要以脂蛋白形式存在，在內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞及心肌細(xì)胞均有所表達(dá)。研究證實(shí)，其具有血管內(nèi)皮保護(hù)、心肌缺血/再灌注損傷保護(hù)等作用，是動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的保護(hù)因素，與氧化應(yīng)激損傷關(guān)系密切[4]。高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）是由脂質(zhì)及其所攜帶的調(diào)節(jié)因子組成的復(fù)雜脂蛋白，主要在肝臟合成，負(fù)責(zé)攝取膽固醇、三酰甘油等，具有抗氧化、抗炎等作用[5]。王守章等[6]研究發(fā)現(xiàn)，PD患者外周血HDL-C表達(dá)水平明顯低于健康對(duì)照組，且提示HDL-C與PD氧化應(yīng)激損傷有關(guān)，是PD的保護(hù)因素。然而有關(guān)探討S1P，HDL-C在PD中的表達(dá)水平與臨床癥狀的關(guān)系研究鮮有報(bào)道，因此本研究分析血漿S1P，HDL-C表達(dá)與PD臨床癥狀的關(guān)系，以期為尋找評(píng)估PD患者病情嚴(yán)重程度的生物學(xué)指標(biāo)，及時(shí)有效干預(yù)、治療以提高患者生活質(zhì)量提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2018年7月～2021年3月于保定市第二中心醫(yī)院確診的PD患者100例為研究對(duì)象（PD組），男性52例，女性48例，年齡62～85（75.03±6.37）歲，根據(jù)HoehnYahr分期[7]標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定患者嚴(yán)重程度，將患者分為輕度組（1～2期）35例、中度組（2.5～3期）36例、重度組（4～5期）29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合《中國(guó)帕金森病的診斷標(biāo)準(zhǔn)(2016版)》的相關(guān)內(nèi)容[8]；②首發(fā)PD患者；③一般資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①特發(fā)性震顫、腦血管病、腦炎、中毒、腦外傷等導(dǎo)致的繼發(fā)性PD綜合征；②多系統(tǒng)萎縮、進(jìn)行性核上性麻痹等PD疊加綜合征；③并發(fā)心臟、肝臟、腎臟功能不全者；④惡性腫瘤患者。另選取同期健康體檢者105例為對(duì)照組，男性53例，女性52例，年齡63～85歲，平均年齡74.97±6.18歲。PD組與對(duì)照組性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，受試者家屬或者本人均簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技有限公司，型號(hào)：Multiskan FC）；全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特生物科技有限公司，型號(hào)：AU5800）；血漿S1P酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（北京百奧萊博科技有限公司，批號(hào)：ARB11575）；血漿HDL-C生化檢測(cè)試劑盒（浙江伊利康生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：L7003）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集：PD患者于確診后24 h內(nèi)、體檢者于體檢當(dāng)日空腹情況下抽取肘靜脈血5 ml于肝素抗凝管中，在20℃條件下離心15 min（3 000 r/min）分離得到血漿，-80℃保存于冰箱待測(cè)。

1.3.2 血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平檢測(cè)：從-80℃冰箱中取出凍存血漿樣本，解凍，采用ELISA法測(cè)定受試者血漿S1P表達(dá)水平；采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血漿HDL-C表達(dá)水平，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 臨床癥狀評(píng)分：運(yùn)動(dòng)癥狀：采用統(tǒng)一帕金森病評(píng)定量表第Ⅲ部分（unified Parkinson’s disease rating scale part III，UPDRS Ⅲ）評(píng)分評(píng)價(jià)PD患者運(yùn)動(dòng)功能，由UPDRS Ⅲ評(píng)分計(jì)算震顫、強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩、步態(tài)或姿勢(shì)異常、軸性癥狀計(jì)算言語(yǔ)、步態(tài)、姿勢(shì)等得分，各項(xiàng)評(píng)分相加得UPDRS Ⅲ總評(píng)分，總評(píng)分越高癥狀越嚴(yán)重[9]。

非運(yùn)動(dòng)癥狀：①認(rèn)知功能：采用簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查（minimental state examination，MMSE）量表[10]評(píng)價(jià)，MMSE評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：定向感10分、注意力及計(jì)算力5分、記憶力3分、回憶力3分、語(yǔ)言及視空間能力9分，總分30分，分?jǐn)?shù)越高，認(rèn)知功能越好。②焦慮：采用漢密爾頓焦慮量表（Hamilton anxiety scale，HAMA）14項(xiàng)版本[11]進(jìn)行評(píng)價(jià)，0～14分為非焦慮；＞14分為焦慮。③抑郁：采用漢密爾頓抑郁量表（Hamilton depression scale，HAMD）24項(xiàng)版本[12]進(jìn)行評(píng)價(jià)，＜8分為非抑郁；≥8分為抑郁。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對(duì)本研究數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 23.0進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNKq檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）表示，采用卡方檢驗(yàn)；采用Pearson法分析血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平與患者臨床癥狀評(píng)分的相關(guān)性；Logistic回歸分析影響重度PD的危險(xiǎn)因素；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD組與對(duì)照組血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平比較 與對(duì)照組比較，PD組患者血漿S1P（298.77±142.22 pmol/ml vs 512.66±201.31 pmol/ml），HDL-C（0.96±0.24 mmol/L vs 1.87±0.33mmol/L）表達(dá)水平均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.744, 20.327，均P＜0.05）。

2.2 不同嚴(yán)重程度PD患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平比較 見表1。與輕度組患者比較，中度、重度組患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平顯著降低（q=4.448, 7.641, 7.088, 21.025, 均P＜0.05）；與中度組患者比較，重度組患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平顯著降低（q=3.458, 14.416, 均P＜0.05）。

表1 不同嚴(yán)重程度PD患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平比較（±s）

表1 不同嚴(yán)重程度PD患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平比較（±s）

項(xiàng)目 輕度組（n=35） 中度組（n=36） 重度組（n=29） F值 P值S1P（pmol/ml） 395.33±156.66 290.73±142.60 210.25±113.07 14.090 0.000 HDL-C（mmol/L） 1.36±0.29 1.07±0.25 0.45±0.16 113.414 0.000

2.3 不同嚴(yán)重程度PD患者運(yùn)動(dòng)癥狀、非運(yùn)動(dòng)癥狀評(píng)分比較 見表2。與輕度組患者比較，中度、重度組患者UPDRS Ⅲ評(píng)分、HAMD評(píng)分、HAMA評(píng)分顯著升高（q=5.234, 9.120, 9.296, 15.487,11.405, 23.955, 均P＜0.05），MMSE評(píng)分顯著降低（q=11.766, 18.214, 均P＜0.05）；與中度組患者比較，重度組患者UPDRS Ⅲ評(píng)分、HAMD評(píng)分、HAMA評(píng)分顯著升高（q=4.199, 6.742, 13.257, 均P＜0.05），MMSE評(píng)分顯著降低（q=7.136，P＜0.05）。

表2 不同嚴(yán)重程度PD患者運(yùn)動(dòng)癥狀、非運(yùn)動(dòng)癥狀評(píng)分比較（±s）

表2 不同嚴(yán)重程度PD患者運(yùn)動(dòng)癥狀、非運(yùn)動(dòng)癥狀評(píng)分比較（±s）

項(xiàng)目 輕度組（n=35） 中度組（n=36） 重度組（n=29） F值 P值UPDRS Ⅲ評(píng)分 26.89±8.63 43.11±16.66 56.79±27.27 21.036 0.000 HAMD評(píng)分 12.35±3.96 19.63±4.87 25.18±5.17 61.097 0.000 HAMA評(píng)分 8.86±2.67 16.93±3.89 26.79±5.83 143.461 0.000 MMSE評(píng)分 23.67±4.37 16.58±3.67 12.06±2.15 85.925 0.000

2.4 PD患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平與運(yùn)動(dòng)癥狀評(píng)分、非運(yùn)動(dòng)癥狀評(píng)分相關(guān)性分析 PD患者血漿S1P和HDL-C表達(dá)水平與UPDRS Ⅲ評(píng)分、HAMD評(píng)分、HAMA評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)（rS1P=-0.480，-0.577，-0.603，P=0.002, 0.006, 0.003；rHDL-C=-0.500，-0.496，-0.605，P=0.027, 0.008,0.030），與MMSE評(píng)分呈正相關(guān)（rS1P=0.587,P=0.008；rHDL-C=0.518，P=0.013）。PD組 患 者血漿S1P表達(dá)水平與HDL-C表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.633，P=0.007）。

2.5 影響重度PD的Logistic回歸分析 見表3，表4。以PD是否重度為因變量（否=0，是=1），以UPDRS Ⅲ評(píng)分、HAMD評(píng)分、HAMA評(píng)分、MMSE評(píng)分、S1P，HDL-C為自變量（均為實(shí)測(cè)值）進(jìn)行單因素及多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平降低是影響重度PD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。

表3 影響重度PD的單因素Logistic回歸分析

表4 影響重度PD的多因素Logistic回歸分析

3 討論

帕金森病（PD）是第二大中樞神經(jīng)退行性疾病，常見于中老年人群，具有高發(fā)病率、高致殘率及慢性病程特點(diǎn)[13]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為氧化應(yīng)激及氧自由基形成導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元功能紊亂進(jìn)一步造成患者出現(xiàn)認(rèn)知功能異常及運(yùn)動(dòng)障礙是PD主要發(fā)病機(jī)制[14]。

鞘氨醇1磷酸（S1P）是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外多種生物學(xué)功能的重要信號(hào)分子之一，是鞘磷脂代謝產(chǎn)生的一種生物活性脂類，參與細(xì)胞的多種基本功能，如細(xì)胞增殖、遷移、存活及細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，能夠拮抗氧化應(yīng)激，保護(hù)線粒體功能[15-16]。ESAKI等[17]研究報(bào)道，鞘磷脂在少突膠質(zhì)細(xì)胞分化和髓鞘等神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，精神分裂癥患者的胼胝體中S1P表達(dá)水平較對(duì)照組低。DIRR等[18]研究發(fā)現(xiàn)，ATP13A2基因編碼的ATP13A2蛋白功能障礙造成鞘磷脂代謝異常，使鞘磷脂在腦部積累，進(jìn)一步促使腦部多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)水平降低，從而造成小鼠行為異常及運(yùn)動(dòng)障礙，因此推測(cè)SIP與PD患者行為異常有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，PD組患者血漿S1P表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，與ESAKI等[17]研究結(jié)果具有類似性，且隨病情嚴(yán)重程度的增加水平逐漸降低，驗(yàn)證了推測(cè)的合理性，說明血漿S1P異常低表達(dá)可能與PD發(fā)生及病情進(jìn)展有關(guān)，原因可能是S1P表達(dá)水平降低，氧化應(yīng)激水平增加，使多巴胺神經(jīng)元死亡增多。膽固醇是一種具有調(diào)節(jié)激素分泌作用的前體物質(zhì)，在大腦組織中廣泛存在，其水平變化可影響突觸和神經(jīng)細(xì)胞膜等中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)，在PD的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色。HDL-C是血液中密度最高、顆粒最小的一種脂蛋白及血脂代謝的基礎(chǔ)物質(zhì)，可逆向轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇，具有抗氧化、抗炎、抗血栓等作用，與氧化應(yīng)激關(guān)系密切，研究證實(shí)其為PD患者保護(hù)因素[19]。YANG等[20]研究發(fā)現(xiàn)，較低的血漿HDL-C表達(dá)水平是評(píng)估PD發(fā)生及病情嚴(yán)重程度的重要標(biāo)志。本研究結(jié)果顯示，PD組患者血漿HDL-C表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，且隨病情嚴(yán)重程度的增加水平逐漸降低，與YANG等[20]研究結(jié)果趨勢(shì)一致，提示血漿HDL-C異常低表達(dá)可能與PD發(fā)生及病情進(jìn)展關(guān)系密切，原因可能是HDL-C異常低表達(dá)，抗氧化作用減弱，對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)拮抗作用減弱，使多巴胺神經(jīng)元死亡增多，多巴胺水平降低。

PD臨床表現(xiàn)主要是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能障礙，但其也會(huì)出現(xiàn)一系列非運(yùn)動(dòng)癥狀，包括神經(jīng)精神癥狀，如情感障礙、認(rèn)知功能障礙、精神癥狀、睡眠障礙、自主神經(jīng)功能障礙等[21]。研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激反應(yīng)能夠增加海馬神經(jīng)元損傷，與認(rèn)知損害、抑郁、焦慮密切相關(guān)[22]。UPDRS量表是臨床常用的評(píng)價(jià)PD病情嚴(yán)重程度的評(píng)分量表，主要以患者癥狀及體征為依據(jù)，評(píng)分越高病情越嚴(yán)重；HAMD評(píng)分是臨床常用的評(píng)定抑郁狀態(tài)的方式，評(píng)分越高抑郁狀態(tài)越嚴(yán)重；HAMA評(píng)分是焦慮狀態(tài)評(píng)定方式，評(píng)分越高焦慮狀態(tài)越嚴(yán)重；MMSE評(píng)分是簡(jiǎn)易精神量表評(píng)分，能全面、準(zhǔn)確、迅速反映被試智力狀態(tài)及認(rèn)知功能缺損程度，評(píng)分越高患者精神狀態(tài)越好且認(rèn)知障礙越小[23]。本研究結(jié)果顯示，輕度、中度、重度PD患者UPDRS Ⅲ評(píng)分、HAMD評(píng)分、HAMA評(píng)分依次升高，MMSE評(píng)分依次降低，說明PD患者不是單純運(yùn)動(dòng)障礙性疾病，其也存在認(rèn)知功能、情感障礙等，且與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。劉茹等[24]研究發(fā)現(xiàn)，與PD認(rèn)知功能無(wú)障礙組患者比較，PD認(rèn)知功能障礙組患者血清HDL-C表達(dá)水平顯著降低，且與認(rèn)知功能評(píng)定工具蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表（MoCA）評(píng)分呈正相關(guān)，提示血脂成分HDL-C異常低表達(dá)可能加重PD患者認(rèn)知功能損害。本研究結(jié)果顯示，PD組患者血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平與UPDRS Ⅲ評(píng)分、HAMD評(píng)分、HAMA評(píng)分、MMSE評(píng)分有關(guān)，且二者表達(dá)水平降低是影響重度PD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示檢測(cè)S1P，HDL-C可能有利于評(píng)估PD的嚴(yán)重程度及患者認(rèn)知功能障礙、焦慮、抑郁程度。原因可能與S1P是HDL-C中的磷脂成分，HDL-C異常低表達(dá)，使S1P表達(dá)降低，進(jìn)一步導(dǎo)致抗氧化作用減弱，氧化應(yīng)激反應(yīng)加重有關(guān)，其中具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，血漿S1P，HDL-C異常低表達(dá)可能與PD患者臨床癥狀有關(guān)，臨床可以通過監(jiān)測(cè)血漿S1P，HDL-C表達(dá)水平，評(píng)估PD的發(fā)生、嚴(yán)重程度及臨床癥狀的變化，為尋找新的輔助診斷手段對(duì)提高患者生活質(zhì)量提供一定參考。然而本研究并沒有對(duì)S1P與HDL-C在PD患者中的具體作用機(jī)制進(jìn)行研究，后期應(yīng)進(jìn)行深入闡述。