急性主動(dòng)脈夾層患者血漿miR-30a及D-二聚體水平檢測(cè)對(duì)臨床預(yù)后判斷價(jià)值

黃 英，陳 蘭，周英艷，肖愛(ài)芪

(?？谑械谌嗣襻t(yī)院心血管科，?？?571100)

急性主動(dòng)脈夾層（acute aortic dissection, AAD）是一種極為嚴(yán)重的心血管急癥，其病情兇險(xiǎn)、病死率高，若未能及時(shí)診斷治療，AAD發(fā)生后48 h內(nèi)的病死率高達(dá)50%[1]。準(zhǔn)確地對(duì)AAD進(jìn)行預(yù)后判斷，并采取有效的治療措施，對(duì)降低患者的病死率具有重大幫助。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一類(lèi)單鏈非編碼小分子RNA，參與多種信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，在AAD的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-30a在AAD中異常表達(dá)，參與細(xì)胞外基質(zhì)重塑、氧化應(yīng)激等重要功能的調(diào)節(jié)，有望成為治療AAD的潛在靶點(diǎn)[3]。D-二聚體（Ddimer，D- D）作為反映體內(nèi)纖溶活性的重要指標(biāo)，對(duì)評(píng)估AAD患者的病情及預(yù)后具有一定的價(jià)值[4]。本研究通過(guò)檢測(cè)AAD患者血漿miR-30a及D-二聚體水平，分析其對(duì)AAD預(yù)后判斷的價(jià)值，旨在為AAD的救治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2018年1月～2020年12月?？谑械谌嗣襻t(yī)院收治的AAD患者152例，其中男性114例，女性38例，年齡36～79（54.80±11.24）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)主動(dòng)脈CT血管成像明確診斷為AAD；②臨床病例資料記錄完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)其他心血管疾病及嚴(yán)重基礎(chǔ)??；②不愿意配合本次研究者。152例AAD患者根據(jù)住院期間存活情況分為存活組（n=107）和死亡組（n=45）。另選取65例體檢正常者作為對(duì)照組，其中男性47例，女性18例，年齡35～78（53.70±9.82）歲。各組的性別、年齡及體質(zhì)指數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究與患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 儀器與試劑 7500型熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）；PCR試劑盒，RNeasy試劑盒，miRNA Easy試劑盒和Trizol試劑盒（博士德生物有限公司）；貝克曼ACL7000全自動(dòng)凝血分析儀。

1.3 方法

1.3.1 miR-30a檢測(cè):采集靜脈血3 ml于EDTA抗凝管中，離心分離血漿，在ABI 7500型熒光定量PCR儀上檢測(cè)miR-30a水平。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為15μl：5μl RNA模板，3μl U6及miRNA特異性莖環(huán)引物，0.15μl 100mmol/L脫氧核糖核苷酸，1.00μl逆轉(zhuǎn)錄酶，1.50 μl 10×反轉(zhuǎn)錄緩沖液，0.19 μl RNase抑制劑，4.16 μl雙蒸水；反應(yīng)體系為20μl：1μl 引物及探針Mix（20×），10μl TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μl反向轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67μl雙蒸餾水。采用2-△△Ct法計(jì)算miR-30a水平。

1.3.2 D-二聚體檢測(cè):采用貝克曼ACL 7000全自動(dòng)凝血分析儀及配套試劑盒檢測(cè)D-二聚體水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用校正t檢驗(yàn)（t’檢驗(yàn)）。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。應(yīng)用受試者工作特征曲線（ROC）分析血漿miR-30a及D-二聚體水平預(yù)測(cè)AAD死亡的價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AAD組和對(duì)照組血漿miR-30a及D-二聚體水平比較 AAD組血漿miR-30a（1.93±0.78）及D-二聚體（6.28±1.72μg/ml）水平均明顯高于對(duì)照組（0.72±0.25，0.36±0.08μg/ml），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.758，16.814，均P＜0.001）。

2.2 死亡組和存活組血漿miR-30a及D-二聚體水平比較 死亡組血漿miR-30a（2.42±1.13）及D-二聚體（8.62±2.24μg/ml）水平均明顯高于存活組（1.30±0.56，3.64±1.35μg/ml），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.624，14.735，均P＜0.001）。

2.3 血漿miR-30a及D-二聚體水平預(yù)測(cè)AAD患者死亡的價(jià)值 見(jiàn)表1和圖1。血漿miR-30a及D-二聚體水平預(yù)測(cè)AAD患者死亡的最佳截?cái)嘀捣謩e為1.97，6.36 μg/ml。兩項(xiàng)聯(lián)合預(yù)測(cè)AAD患者死亡的曲線下面積（0.936，95%CI：0.875～0.992）明顯高于單項(xiàng)檢測(cè)miR-30a（0.852，95%CI：0.793～0.913）及D-二聚體（0.824，95%CI：0.767～0.885），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），其敏感度和特異度分別為94.0%和88.6%。

圖1 血漿miR-30a及D-二聚體水平預(yù)測(cè)AAD患者死亡的ROC曲線

表1 血漿miR-30a及D-二聚體水平預(yù)測(cè)AAD患者死亡的價(jià)值

3 討論

急性主動(dòng)脈夾層（AAD）是一種嚴(yán)重的致命性疾病，已成為嚴(yán)重危及人類(lèi)生命健康的重要疾病之一。miRNA在不同生理或病理狀態(tài)下呈現(xiàn)差異性表達(dá)，具有組織器官特異性，可作為AAD診斷或預(yù)后預(yù)測(cè)的潛在標(biāo)志物[5-6]。LI等[7]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在主動(dòng)脈夾層組織中表達(dá)下調(diào)，且與AAD患者的生存有關(guān)，miRNA的過(guò)表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，從而抑制AAD的發(fā)生發(fā)展。XUE等[8]研究認(rèn)為，miRNA在主動(dòng)脈夾層中的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，miRNA的過(guò)度表達(dá)通過(guò)靶向SMAD4誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，可能參與主動(dòng)脈夾層的發(fā)生發(fā)展。D-二聚體是反映機(jī)體內(nèi)纖溶亢進(jìn)、高凝狀態(tài)的可靠標(biāo)志物，在血栓性疾病的診斷中發(fā)揮了重要作用[9]。LI等[10]研究表明，主動(dòng)脈夾層患者D-二聚體顯著升高，不同病期主動(dòng)脈夾層的二聚體存在顯著差異，并可反映主動(dòng)脈夾層的穩(wěn)定情況，在主動(dòng)脈夾層的早期篩查中具有較好的價(jià)值。

本研究顯示，AAD組血漿miR-30a及D-二聚體水平均明顯高于對(duì)照組，且死亡組血漿miR-30a及D-二聚體水平均明顯高于存活組，提示血漿miR-30a及D-二聚體水平升高與AAD患者病情的嚴(yán)重程度有關(guān)，可能參與AAD的發(fā)生發(fā)展，有望作為判斷AAD患者病情嚴(yán)重程度的生物學(xué)指標(biāo)。分析其原因，一方面可能是miR-30a通過(guò)調(diào)控多個(gè)信號(hào)通路，如細(xì)胞增殖、遷移及血管炎癥等，參與了AAD的發(fā)病機(jī)制；另一方面死亡的AAD患者主動(dòng)脈中層撕裂程度較嚴(yán)重，激活凝血系統(tǒng)及后續(xù)的纖溶過(guò)程比較活躍，使血漿中D-二聚體水平升高。WANG等[11]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA的過(guò)度表達(dá)顯著降低了多囊蛋白-1和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1下游靶蛋白的表達(dá)，對(duì)AAD的早期診斷具有較高特異度和敏感度，miRNA可作為AAD的診斷標(biāo)志物，并可能參與AAD的發(fā)病機(jī)制。潘小高等[12]研究認(rèn)為，D-二聚體水平升高是AAD患者院內(nèi)死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=1.04, 95%CI:1.00～1.08,P＜0.05)，是預(yù)測(cè)AAD預(yù)后的可靠指標(biāo)。

本研究進(jìn)一步應(yīng)用ROC曲線分析，結(jié)果顯示miR-30a及D-二聚體兩項(xiàng)聯(lián)合預(yù)測(cè)AAD死亡的AUC最大，其敏感度和特異度較好，說(shuō)明miR-30a及D-二聚體可能是AAD預(yù)后判斷的可靠指標(biāo)，兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AAD預(yù)后判斷的價(jià)值較高。DONG等[13]研究顯示，AAD患者miRNA表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，與AAD嚴(yán)重程度相關(guān)，miRNA在診斷AAD中具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。湛鎮(zhèn)伊等[14]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA的差異表達(dá)在AAD的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，可能是AAD的潛在診斷標(biāo)志物，同時(shí)也為了解AAD的發(fā)病機(jī)制及治療提供新的指導(dǎo)。另有研究表明，AAD患者的D-二聚體水平升高，檢測(cè)D-二聚體水平是排除AAD的良好預(yù)測(cè)指標(biāo)，對(duì)AAD鑒別診斷具有重要的意義[15]。

綜上所述，AAD患者血漿miR-30a及D-二聚體水平明顯升高，其水平升高與AAD患者的病情嚴(yán)重程度及預(yù)后相關(guān)，兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)彌補(bǔ)了單項(xiàng)檢測(cè)的不足，對(duì)AAD預(yù)后判斷具有較好價(jià)值，同時(shí)也為AAD的早期治療提供了新的思路。但本研究仍存在一些不足，如病例來(lái)源較單一，缺乏多中心的研究結(jié)果，未來(lái)仍需更進(jìn)一步深入研究。