ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)在診斷SLE方面的價(jià)值分析

任彥喜

摘要：目的 分析ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)在診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）方面的價(jià)值。方法 選擇2021年1月至2022年2月東明縣人民醫(yī)院收治30例的SLE患者納入研究組，同期30例健康者納入對(duì)照組，均行ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)，對(duì)比兩組體液免疫指標(biāo)、ENA抗體陽(yáng)性檢出率。結(jié)果 研究組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽(yáng)性檢出率高于對(duì)照組（P<0.05），研究組IgM、IgG、IgA高于對(duì)照組，C3、C4低于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)可用于SLE診斷。

關(guān)鍵詞：系統(tǒng)性紅斑狼瘡;血清體液免疫檢驗(yàn);ENA抗體檢驗(yàn);診斷意義

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種慢性復(fù)發(fā)性自身免疫性疾病，在育齡婦女中很常見(jiàn)[1]。SLE的病因尚不完全清楚，可能與遺傳、雌激素和環(huán)境因素（包括藥物、紫外線(xiàn)和感染）密切相關(guān)[2]。SLE的癥狀是面部蝴蝶狀紅斑，表皮水泡有或沒(méi)有中性粒細(xì)胞。暴露部位容易出現(xiàn)皮膚病變，包括光敏感性、脫發(fā)、雷諾現(xiàn)象、網(wǎng)狀紅斑和紫癜，除了皮膚損傷，還可能伴有關(guān)節(jié)疼痛或關(guān)節(jié)炎[3]。SLE患者血清中具有較多自身抗體和免疫復(fù)合物，導(dǎo)致血清免疫球蛋白、補(bǔ)體水平異?，F(xiàn)象出現(xiàn)，故可以結(jié)合以上指標(biāo)對(duì)患者進(jìn)行診斷評(píng)估。實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，如在診斷中可以結(jié)合ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)，能為臨床提供一定的參考依據(jù)。本研究分析ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)在診斷SLE方面的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1 基本資料

選擇2021年1月至2022年2月東明縣人民醫(yī)院收治30例的SLE患者納入研究組，同期30例健康者納入對(duì)照組，均簽署知情同意書(shū)。研究組：男1例，女29例;年齡21～52歲，平均（38.65±7.82）歲。對(duì)照組：均為女性，年齡20～53歲，平均（38.37±7.93）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 研究方法

血清體液免疫檢驗(yàn)：采集血液，分離血清，使用ELISA法檢測(cè)IgM、IgG、IgA、C3、C4。（1）包被：用包被液稀釋抗體至蛋白含量為0.5～20 ?G/ml，100 ?l/孔，4℃包被過(guò)夜。（2）洗盤(pán)：PBS沖洗2～3次即可，每次3～5 min;（3）封孔：按200～250 ?l/孔加封孔液，4℃過(guò)夜，然后棄孔內(nèi)封孔液;（4）樣品處理：用洗滌液或樣品稀釋液將樣品（包括未知抗原）稀釋至所需濃度;（5）標(biāo)準(zhǔn)溶液：用洗滌液或樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至所需濃度;（6）加樣：依次加入50～100 ?l/孔稀釋的標(biāo)準(zhǔn)溶液、處理過(guò)的樣品、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，室溫或37℃孵育30～60 min;（7）加入酶標(biāo)抗體：按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)稀釋酶標(biāo)抗體，按50～100 ?l/孔加入新鮮制備的酶標(biāo)抗體，室溫或37℃孵育1 h;（8）加入顯色底物溶液：按100～150 ?l/孔加入新配制的TMB底物溶液，室溫避光15～30 min。（9）反應(yīng)終止：每個(gè)反應(yīng)孔加入50 ?l終止液。（10）結(jié)果：反應(yīng)孔顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)。陰性反應(yīng)是無(wú)色或很淡的。根據(jù)顏色的深淺，用“+”和“-”表示。OD值也可以在450 nm（ABTS為410 nm）下測(cè)量?？瞻讓?duì)照孔置零后，測(cè)量每個(gè)孔的OD值。如果樣品孔的OD值比陰性對(duì)照孔的OD值大2.1倍，則為陽(yáng)性。

ENA抗體檢驗(yàn)：采集血液，分離血清，用免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)ENA抗體。（1）室溫下用100 ?l 70%酒精的聚偏氟乙烯孔板培養(yǎng)10 min。倒出酒精，用PBS清洗3次;（2）加入稀釋后的捕獲抗體，每孔加100 ?l，蓋上板蓋，4℃過(guò)夜;（3）將100 ?l 2%的脫脂牛奶加入每個(gè)孔中，蓋上盤(pán)子，在室溫下培養(yǎng)2 h;（4）向每孔加入100 ?l血清。可在體外預(yù)先受到刺激（間接伊利斑）。蓋上標(biāo)準(zhǔn)的96孔板塑料板蓋，在37℃的CO2培養(yǎng)箱中孵化15～20 h。（5）每孔加入100 ml清洗緩沖液，并在4℃的環(huán)境中孵化10 min。（6）于10 ml PBS-1%BSA中稀釋100 ?l檢測(cè)抗體，此為1板的量。每孔加100 ?l此液體，蓋上板蓋，37℃下孵育1.5 h。（7）10 ml的PBS-1%BSA稀釋10 ?l的親和素堿性磷酸酶，每孔加入100 ?l，37℃的溫度下1 h。（8）每孔加100 ?l BCIP/NBT，室溫下反應(yīng)5～15 min。將板倒置以免殘留的液體流回膜上一旦膜干燥后，讀取點(diǎn)數(shù)。4℃下放置一夜，點(diǎn)數(shù)會(huì)比較明顯。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組體液免疫指標(biāo)（IgM、IgG、IgA、C3、C4）、ENA抗體陽(yáng)性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 24.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)，（P<0.05）為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 兩組ENA抗體陽(yáng)性檢出率對(duì)比

研究組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽(yáng)性檢出率分別為60.00%（18/30）、56.67%（17/30）、63.33%（19/30）、66.67%（20/30）、73.33%（22/30），對(duì)照組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽(yáng)性檢出率均為0（P<0.05）。

2.2 兩組體液免疫指標(biāo)對(duì)比

研究組IgM、IgG、IgA、C3、C4分別為（1.97±0.41）mg/L、（25.45±4.22）mg/L、（1.85±0.43）mg/L、（0.33±0.04）g/L、（0.09±0.02）g/L，對(duì)照組分別為（0.89±0.25）mg/L、（10.64±2.36）mg/L、（0.93±0.32）mg/L、（1.03±0.18）g/L、（0.26±0.05）g/L，IgM、IgG、IgA高于對(duì)照組，C3、C4低于對(duì)照組（P<0.05）。

3討論

SLE是一種由抗體和免疫復(fù)合物形成的自體免疫性疾病，在女性中更常見(jiàn)，占90%，通常是20～40歲的育齡婦女[4]。SLE屬?lài)?yán)重疾病，其診斷應(yīng)該包括兩部分，一是臨床癥狀，二是免疫學(xué)指標(biāo)。美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)共包括11項(xiàng)，如蝴蝶狀皮膚紅斑或盤(pán)狀紅斑、板狀紅斑、光敏感性、口鼻潰瘍、脫發(fā)、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛或胸膜炎、漿膜炎和腎臟損害等，符合其中4項(xiàng)即可確診[5]。SLE對(duì)血液系統(tǒng)的損害是白細(xì)胞減少，溶血性貧血和低血小板計(jì)數(shù)。最重要的是抗核抗體陽(yáng)性，有許多抗核抗體陽(yáng)性的抗體，更特異的被稱(chēng)為抗雙鏈dna抗體陽(yáng)性，抗smith抗體陽(yáng)性，抗磷脂抗體陽(yáng)性。目前，在我國(guó)SLE臨床診斷中，血清補(bǔ)體水平降低也成為主要的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。

本研究中，研究組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽(yáng)性檢出率高于對(duì)照組（P<0.05），研究組IgM、IgG、IgA高于對(duì)照組，C3、C4低于對(duì)照組（P<0.05）。體液免疫是指免疫效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體?？贵w具有保護(hù)作用，可產(chǎn)生相應(yīng)的免疫治療。體液免疫中含有大量抗體，可以殺死和破壞病原體[6]。蛋白質(zhì)、多糖、病毒顆粒和病原體在大分子細(xì)菌表面產(chǎn)生不同的抗原和特異性抗體，可被體液免疫殺死和清除，具有良好的免疫效果[7]。在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征和SLE等自身免疫性疾病中，活動(dòng)期血清IgM會(huì)升高。而急性感染后多伴隨出現(xiàn)免疫球蛋白IgG陽(yáng)性，當(dāng)感染痊愈時(shí)，會(huì)有記憶抗體，即免疫球蛋白IgG，表示感染，但不表示疾病。IgA可分為血清型和分泌型。IgA血清型可介導(dǎo)ADCC的調(diào)節(jié)和吞噬作用。分泌型IgA（sIgA）是黏膜防御系統(tǒng)的主要成分。它覆蓋鼻子、咽、氣管、腸和膀胱的黏膜表面，可以抑制微生物附著在呼吸道上皮細(xì)胞上，減緩病毒繁殖，這是一個(gè)重要的黏膜屏障。它對(duì)某些病毒、細(xì)菌和一般抗原具有抗體活性，這是防止病原體侵入人體的第一道防線(xiàn)。當(dāng)外來(lái)抗原進(jìn)入呼吸道或消化道并刺激局部免疫系統(tǒng)時(shí)，它們可以在沒(méi)有中樞免疫系統(tǒng)參與的情況下進(jìn)行免疫反應(yīng)，并產(chǎn)生分泌性抗體，即SIgA?？乖涂贵w結(jié)合需要補(bǔ)體，當(dāng)它引起免疫反應(yīng)和自身免疫時(shí)，補(bǔ)體將被消耗和減少[8]。因此，當(dāng)免疫系統(tǒng)受損時(shí)，補(bǔ)體C3/C4會(huì)被消耗。

抗ENA抗體主要用于檢測(cè)風(fēng)濕性疾病，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、SLE等，但與疾病的嚴(yán)重程度和活動(dòng)性無(wú)明顯關(guān)系[9]。不同的陽(yáng)性抗體對(duì)應(yīng)不同的疾病，如抗SM抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)，常見(jiàn)于SLE。結(jié)締組織病患者體內(nèi)有ENA抗體。不同的抗ENA抗體與疾病類(lèi)型有關(guān)。正如1/2的SLE患者有抗ENA抗體。SLE是由于同時(shí)存在多種抗體，其中SM抗體是擁有屬性標(biāo)記的抗體。臨床上，SM抗體陽(yáng)性多伴有RNA抗體陽(yáng)性，單一SM抗體陽(yáng)性少見(jiàn)。常用的方法很難純化和分離SM和RNP抗原?；旌辖Y(jié)締組織病患者的抗ENA抗體出現(xiàn)頻率高，滴度高，主要用于核糖核蛋白。血清中抗RNP抗體滴度幾乎為負(fù)相關(guān)，是混合結(jié)締組織病的一個(gè)指標(biāo)?？笵NA抗體陽(yáng)性的患者如果同時(shí)有抗ENA抗體，預(yù)后較好。腸道和抗LA抗體通常與干燥綜合征同時(shí)發(fā)生。因此，檢測(cè)ENA抗體有助于結(jié)締組織疾病的診斷和鑒別診斷。非風(fēng)濕性疾病患者和正常血清中未檢測(cè)到抗SM抗體和抗RNP抗體，抗SM抗體與SLE活動(dòng)性和腎損害無(wú)關(guān)，不能作為判斷SLE腎病活動(dòng)性、改善和療效的依據(jù)。

綜上所述，ENA抗體檢驗(yàn)和血清體液免疫檢驗(yàn)，可用于SLE診斷。

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