民族藥黑鎖梅根的生藥學(xué)研究段烘葉

段烘葉 張潔 楊竹雅 楊劍啟 余遠(yuǎn)盼 楊明瑞 龔大偉 李學(xué)芳

【摘要】目的：建立黑鎖梅根的生藥學(xué)研究方法，找出鑒別特征，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及深入研究開發(fā)提供依據(jù)。方法：采用性狀鑒別、顯微鑒別、化學(xué)成分分析及薄層色譜鑒別等方法進(jìn)行系統(tǒng)的研究。結(jié)果：黑鎖梅根表面有較密并深陷的細(xì)縱皺紋。根橫切面木栓層有石細(xì)胞散在。韌皮部寬廣，射線向外呈喇叭狀并漸彎曲。木質(zhì)部發(fā)達(dá)。粉末特征中石細(xì)胞類方形、長方形或類圓形，胞腔較大，紋孔明顯。淀粉粒臍點(diǎn)點(diǎn)狀、短縫狀、人字形;層紋不明顯。經(jīng)過化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，主要含有多肽、蛋白質(zhì)、糖類、苷類、黃酮類化合物等成分;薄層色譜結(jié)果顯示，3個不同產(chǎn)地黑鎖梅根藥材在相同位置上顯現(xiàn)相同的斑點(diǎn)，重現(xiàn)性較好。結(jié)論：研究結(jié)果為其進(jìn)一步的深入研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】黑鎖梅根;性狀鑒別;顯微鑒別;理化鑒別;薄層色譜

【中圖分類號】R284【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517（2022）11-0022-05

PharmacognosticalStudyontheNationalMedicinePrunusNiveus

DuanHongye1ZhangJie1YangZhuya1YangJiangqi2YuYanpan1YangMingrui1GongDawei1LiXuefang1*

1.YunnanUniversityofChineseMedicine，Kunming650500，China;

2.ChuxiongYiAutonomousPrefectureFoodandDrugInspection，Chuxiong67500，China

Abstract：Objective：ToestablishthepharmacognosticresearchmethodofRadixPrunusNivei，findouttheidentificationcharacteristics，andprovidethebasisforthequalitystandardresearchandfurtherresearchanddevelopment.Methods：Themethodsofcharacteridentification，microscopicidentification，chemicalcompositionanalysisandTLCidentificationwereused.Results：ThereweredenseanddeeplongitudinalwrinklesonthesurfaceofPrunusniveus.Therearestonecellsscatteredinthecorklayeroftherootcrosssection.Thephloemisbroadandtheraysaretrumpetshapedoutwardandgraduallycurved.Thexylemiswelldeveloped.Inthepowdercharacteristics，thestonecellsaresquare，rectangularorround，withlargecavitiesandobviouspits.Thestarchgranulesareumbilicallypunctate，shortslitandherringbone;Thelaminationisnotobvious.Theresultsofsystematicpre-testofchemicalcompositionshowedthatitmainlycontainedpeptides，proteins，sugars，glycosides，flavonoidsandothercomponents;TheresultsofTLCshowedthatthesamespotsappearedatthesamepositioninthethreesampleswithgoodreproducibility.Conclusion：Theresultslayafoundationforfurtherstudyandqualitystandardresearch.

Keywords：RadixPrunusNivei;CharacterIdentification;MicroscopicIdentification;PhysicalandChemicalIdentification;ThinLayerChromatography

黑鎖梅根為薔薇科懸鉤子屬植物紅泡刺藤RubusniveusThunberg.的根[1]。別名鉤絲刺、栽秧苗、鉆地風(fēng)、黑黃泡、冒毒紹勞聶（彝族名）、安何肋輕肯（納西族名）。具有祛風(fēng)除濕、解毒止痢等功效[2-3]。納西族將根用于痢疾、胃痛、急慢性腎炎、附件炎、疝氣、遺精、盜汗。藏族將去皮枝干用于流感、感冒、惡寒發(fā)熱、肺結(jié)核、頭痛、身痛[4]。研究[5-6]表明，紅泡刺藤含有酚酸類、萜類、黃酮類和維生素等活性成分。黃酮具有抗炎癥、抗過敏、抑制細(xì)菌、防治心腦血管疾病和抗腫瘤等作用[7]。黑鎖梅根是我省少數(shù)民族常用藥，在云南全省都有分布[8]，資源豐富，開發(fā)前景可觀。目前，我國對黑鎖梅根的研究主要集中在種質(zhì)資源的評價和利用[9];果實(shí)的研究主

要有品質(zhì)評價、生物活性成分的提取和抗氧化性等方面[10-12]。在性狀鑒別、顯微鑒別及理化鑒別方面尚屬空白，為了確保臨床用藥的準(zhǔn)確性、有效性和安全性，本實(shí)驗(yàn)對該藥材進(jìn)行了系統(tǒng)的生學(xué)藥研究，為進(jìn)一步的深入研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1儀器NikonE100型生物顯微鏡、生物數(shù)碼攝影顯微鏡（日本Nikon）、RM223徠卡切片機(jī)（LeicaBiosystemsNusslochGmbh）、HI121徠卡攤片機(jī)（LeicaBiosystemsNusslochGmbh）、AdobePhotoshop2020簡體中文版圖形處理軟件、電熱恒溫水浴鍋DK98Ⅱ（天津市泰斯特儀器有限公司）、高速萬能粉碎機(jī)（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）、標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩（浙江上虞市華豐五金儀器有限公司）、AR124CN電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）、KH7200B型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）、D28-2電磁爐（吳川市大昌電器有限公司）。

1.2材料石油醚（60～90℃，西隴科學(xué)股份有限公司）、氨水（AR，廣東光華科技股份有限公司）、氯仿（云南楊林工業(yè)開發(fā)區(qū)滇池藥業(yè)）、乙酸乙酯（AR，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）、甲酸（天津市風(fēng)船有限公司）、乙醇（AR，四川西隴科學(xué)有限公司）、95%乙醇（昆明遠(yuǎn)方生物制品有限公司）、無水乙醇（AR，昆明遠(yuǎn)方生物制品有限公司）、固綠FCF（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、臧紅T（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、切片石蠟（上海懿洋儀器有限公司）、蜂蠟（中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司）。其余試劑均為分析純。

本品采自昆明市西山區(qū)西山，中國科學(xué)院昆明植物研究所經(jīng)雷立公研究員鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物紅泡刺藤（RubusniveusThunberg.）的根。

2方法

2.1基源鑒別原植物標(biāo)本送請中科院昆明植物所鑒定，根據(jù)標(biāo)本鑒定結(jié)果，描述植物形態(tài)并核對《中國植物志》。

2.2性狀鑒定觀察藥材的形狀、大小、顏色、表面特征、質(zhì)地、折斷面、氣味等外觀性狀特征進(jìn)行描述并拍攝藥材照片。

2.3顯微鑒定取新鮮藥材藥用部位（根部）切成完整厚度均勻的薄片進(jìn)行脫水（30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇→95%乙醇→無水乙醇→無水乙醇→無水乙醇：TO（3∶1）→無水乙醇：TO（1∶1）→無水乙醇：TO（1∶3）→純TOⅠ→純TOⅡ→純石蠟Ⅰ→純石蠟Ⅱ），按照常規(guī)石蠟制片方法制作石蠟切片，然后再進(jìn)行染色（純TOⅠ→純TOⅡ→95%乙醇→1%番紅→95%乙醇→無水乙醇Ⅰ→無水乙醇Ⅱ→無水乙醇Ⅲ→0.2%固綠→無水乙醇：TO（1∶3）→純TOⅠ→純TOⅡ）、封片。干藥材打粉過60目篩，制成粉末臨時裝片，利用顯微鏡觀察藥材的組織構(gòu)造、細(xì)胞形態(tài)等特征來，并描述分析。

2.4理化鑒定將藥材粗粉（過40目篩），分別制備水提取液、乙醇提取液、酸性乙醇提取液、石油醚提取液，并按照天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)中進(jìn)行化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)，初步得出藥材所含的各類成分、并對各類成分進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)。

2.4.1系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)

2.4.1.1水提取液稱取黑鎖梅根（根）粗粉5g，置于100mL錐形瓶中，加蒸餾水50mL浸泡放置過夜，過濾，濾出約20mL的濾液，用于檢查氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等化學(xué)成分。將剩下的濾渣同濾液于水浴60℃上熱浸30min，然后趁熱過濾，濾渣舍去，濾液，用于檢查糖、多糖、有機(jī)酸、皂苷、苷類、酚類、鞣質(zhì)等化學(xué)成分。

2.4.1.2乙醇提取液稱取黑鎖梅根粗粉10g，置于250mL磨口三角燒瓶中，加入95%乙醇100mL，于水浴上加熱回流1h，稍冷后加入蒸餾水36mL使其含醇量為70%，冷至室溫，過濾，濾渣舍去，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用100mL石油醚（60～90℃）萃取，分別萃取兩次，每次50mL，上層液（石油醚）舍去，下層液（乙醇提取液）濃縮至40mL，加95%乙醇50mL溶解后過濾，濾液，用于檢查黃酮、蒽醌、香豆素、萜類、甾體化合物、內(nèi)酯類化合物、強(qiáng)心苷、有機(jī)酸、酚類、鞣質(zhì)等成分。

2.4.1.3酸性乙醇提取液稱取黑鎖梅根粗粉2g，加0.5%的硫酸乙醇溶液10mL，于水浴上加熱回流10min，過濾，濾渣舍去，濾液，用于檢查生物堿類化學(xué)成分。

2.4.1.4石油醚提取液稱取黑鎖梅根粗粉1g，加入石油醚（60～90℃）10mL，室溫浸泡2～3h，過濾，濾渣舍去，濾液用于檢查揮發(fā)油、油脂、萜類、甾體化合物等成分。

2.4.2薄層色譜供試液的制備稱取3個不同產(chǎn)地的黑鎖梅根粗粉5g，置于磨口錐形瓶中，加95%乙醇50mL，于水浴上加熱回流1h，稍冷后加入蒸餾水18mL使其含醇量為70%，冷至室溫，過濾，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中;用50mL石油醚（60～90℃）分兩次萃取，每次用石油醚25mL，以除去葉綠素等，分出下層乙醇提取液，濃縮至20mL，加95%乙醇25mL溶解后過濾，適當(dāng)超聲，濾液作為供試液。

3結(jié)果

3.1性狀鑒定本品干燥根呈圓柱形，挺直或稍彎曲，長約70cm，直徑0.3～2.3cm。表面黃棕色，有較密并深陷的細(xì)縱皺紋、排列稀疏的須根痕;質(zhì)地堅硬，不易折斷，斷面略平坦，皮部棕褐色，較厚，木部淡黃色，略呈放射狀，皮部與木部易剝離。氣微，味微甜。如圖1所示。

3.2顯微鑒定

3.2.1根橫切面根橫切面呈類圓形，木栓層由10余列扁平細(xì)胞組成，有石細(xì)胞散在，外被落皮層。皮層狹窄，排列緊密。韌皮部寬廣，韌皮射線明顯，向外漸彎曲。形成層呈環(huán)狀排列。木質(zhì)部發(fā)達(dá)，木纖維排列成環(huán)，導(dǎo)管單個或數(shù)個成群存在，分布較密集，呈放射狀排列。薄壁細(xì)胞中含淀粉粒和草酸鈣方晶。如圖2A、B、C所示。

3.2.2粉末特征本品粉末黃棕色。木栓細(xì)胞呈多角形，壁略增厚，含黃棕色色素。導(dǎo)管多為具緣紋孔導(dǎo)管，較大，直徑35～120μm。纖維呈長梭形，單個散在或成束，壁厚2～15μm，紋孔明顯，直徑10～35μm。石細(xì)胞單個或成群存在，類方形、長方形或類圓形，壁厚2～8μm。胞腔較大，紋孔明顯，直徑15～45μm。淀粉粒類圓形、半圓形或不規(guī)則形，直徑2～12μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、短縫狀、人字形，層紋不明顯;復(fù)粒多見，由2～4分粒組成。草酸鈣方晶多，直徑5～18μm。如圖3所示。

3.3理化鑒定

3.3.1主要化學(xué)成分化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，黑鎖梅根含有多肽、蛋白質(zhì)、糖類、苷類、有機(jī)酸類、酚類化合物、鞣質(zhì)、黃酮類化合物、香豆素類、揮發(fā)油等成分。見表1～表5。

3.3.2薄層色譜分別吸取3個不同產(chǎn)地乙醇提取液4μL，點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，乙酸乙酯：甲酸：水（12∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干后用10%硫酸乙醇溶液顯色后于105℃左右加熱數(shù)分鐘觀察，昆明市西山區(qū)碧雞鎮(zhèn)、尋甸回族彝族自治縣功山鎮(zhèn)、嵩明縣阿子營鄉(xiāng)3個不同產(chǎn)地黑鎖梅根藥材供試液在同一塊硅膠G板上的相同位置上顯現(xiàn)相同的斑點(diǎn)，且不同產(chǎn)地對應(yīng)的斑點(diǎn)顏色相同，重現(xiàn)性較好。如圖4所示。

4討論

本文通過對黑鎖梅根的來源、藥材性狀、顯微及理化鑒別的研究結(jié)果表明：黑鎖梅根橫切面及粉末鑒別特征明顯，可作為其真?zhèn)舞b別的專屬性特征。化學(xué)成分豐富，薄層色譜重現(xiàn)性好，為進(jìn)一步的深入研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基礎(chǔ)。

在進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)時，采用的是乙醇提取液作為供試液，分別以乙酸乙酯∶甲酸∶水（4∶1∶1）、乙酸乙酯∶甲酸∶水（8∶1∶1）、乙酸乙酯∶甲酸∶水（10∶1∶1）、乙酸乙酯∶甲酸∶水（12∶1∶1）等為展開劑展開，但最終以乙酸乙酯∶甲酸∶水（12∶1∶1）展開的成點(diǎn)性及重現(xiàn)性較好，其他比例的展開劑展開效果不佳，因所含成分復(fù)雜，拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，成點(diǎn)性不好。

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（收稿日期：2021-10-12編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：云南省科技計劃重大專項(xiàng)（編號202002AA100007）。

作者簡介：段烘葉（1998-），女，漢族，本科，研究方向?yàn)樯帉W(xué)研究。E-mail：1917179412@qq.com

通信作者：李學(xué)芳（1975-），女，彝族，本科，正高級工程師，研究方向?yàn)橹兴庤b定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：lixuef100@126.com