傣藥紅花臭牡丹根飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陸應(yīng)彩 彭霞 李清 卯明霞 仁紹坤

【摘要】目的：建立紅花臭牡丹根飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：觀察紅花臭牡丹根性狀和顯微鑒別特征;參照《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2005年版第三冊·傣族藥）及《中國藥典》（2015年版四部）建立薄層鑒別方法;照《中國藥典》（2015年版四部）測定水分、總灰分、酸不溶性灰分、砷鹽、重金屬、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、浸出物;采用分光光度法通過線性關(guān)系、準(zhǔn)確度、精密度、不同產(chǎn)地以及試驗(yàn)條件的考察來建立紅花臭牡丹根中總黃酮的含量測定方法，檢測波長為357nm。結(jié)果：性狀及鑒別方法專屬性好，3個(gè)不同產(chǎn)地10批紅花臭牡丹根飲片水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物及總黃酮的含量的平均值分別為5.93%、2.24%、0.12%、13.57%、5.47%。砷鹽均符合規(guī)定、重金屬均小于百萬分之十、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量均未檢出。結(jié)論：所建立方法可應(yīng)用于紅花臭牡丹根飲片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】紅花臭牡丹根飲片;紫外分光光度法;蘆丁;薄層色譜法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號】R282.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517（2022）11-0036-05

StudyonQualityStandardofClerodendrumjaponicum（Thunb.）SweewithDaimedicine

LUYingcaiPENGXia*LIQingMAOMingxiaRENShaokun

XishuangbannaInstituteForFoodandDrugControl，Jinhong666100，China

Abstract：ObjectiveTosetupqualitystandardsofClerodendrumjaponicum（Thunb.）Swee.MethodsToobservetherootcharacterandmicroscopicidentificationcharacteristicsofpeonyroseus;establishthinlayeridentificationmethodaccordingtoYunnanTraditionalChinesemedicinestandard（Volume3of2005editionDaimedicine）andfourpartsofChinesePharmacopoeia2015;determinewater，totalash，acidinsolubleash，arsenicsalt，heavymetal，organochlorinepesticideresidueandextractaccordingtofourpartsofChinesePharmacopoeia2015edition;collectThedeterminationmethodoftotalflavonoidsintherootofpeonyodoratumwasestablishedbySpectrophotometrywithlinearrelation，accuracy，precision，differentproductionareaandtestconditions.Thedetectionwavelengthwas357nm.ResultsThecharactersandidentificationmethodswerespecific.Theaveragecontentsofwater，totalash，acidinsolubleash，extractandtotalflavonoidsin10batchesofrootofPaeoniasuffruticosafromthreedifferentproducingareaswere5.93%、2.24%、0.12%、13.57%、5.47%.Theresultsshowedthatarsenicsaltmettherequirements，heavymetalswerelessthan10partspermillion，andorganochlorinepesticideresidueswerenotdetected.ConclusionTheestablishedmethodcanbeappliedtothequalitycontrolofClerodendrumjaponicum（Thunb.）Swee.

Keywords：TheRootofClerodendrumjaponicum（Thunb.）Swee;UVSpectrophotometry;Rutin;ThinLayerChromatography;QualityStandard

紅花臭牡丹根飲片為馬鞭草科植物赪桐Clerodendrumjaponicum（Thunb.）Sweet的干燥根的加工炮制品。紅花臭牡丹根的藥材標(biāo)準(zhǔn)收載于《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2005年版第三冊[1]，西雙版納地區(qū)傣醫(yī)將紅花臭牡丹根稱為“哈賓亮”，意譯為“療效顯著，名貴價(jià)高”[2-5]，傣醫(yī)是四大民族醫(yī)藥之一，紅花臭牡丹根、葉均作藥用，為傣醫(yī)常用藥，具有清火解毒、活血止血、調(diào)經(jīng)通乳、除風(fēng)止痛、補(bǔ)土健胃的功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、赤白帶下、產(chǎn)后缺乳;六淋證出現(xiàn)的小便熱澀疼痛、尿黃、尿血;睪丸腫痛;脘腹脹痛，不思飲食，四肢乏力;風(fēng)濕病關(guān)節(jié)肌肉腫痛[2-5]。預(yù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)報(bào)道[6-7]表明，紅花臭牡丹根主要含有鞣質(zhì)、酚酸類、黃酮類及揮發(fā)油等成分。近代藥理研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物具有神經(jīng)保護(hù)、抗心肌缺血、抗胃潰瘍、抗炎、抗腫瘤以及降糖等藥理作用[8-11]。而目前尚無紅花臭牡丹根飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[1-2]。故本文建立紅花臭牡丹根飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[12]，且參照《赪桐根中總黃酮的提取工藝》[7]及《腎茶總黃酮的含量測定》[13]采用蘆丁為對照品，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色后，用紫外分光光度法對紅花臭牡丹根飲片中總黃酮的含量進(jìn)行研究以有效控制其質(zhì)量并為其應(yīng)用提供保障。紅花臭牡丹植物圖如圖1。

1儀器與材料

1.1儀器UV-2600紫外分光光度計(jì)（島津）;BGZ-76電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）;SX2-4-10箱式電阻爐;TLCVisualizer2薄層色譜成像儀（瑞士卡瑪）;OLYMPUSBX41生物顯微鏡（奧林巴斯中國有限公司）;BL310天平（德國賽多利斯集團(tuán)）;AE200電子天平[梅特勒-托里多儀器（上海）有限公司，型號：MS205DU];LC-300B數(shù)控超聲波清洗器（濟(jì)南市中區(qū)魯超儀器廠）;UPH-IV-20T超出水機(jī)（四川優(yōu)普超純科技有限公司）;DFT-100A高速萬能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）;DZKW-S-6電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）;CAMAGLinomat5半自動薄層點(diǎn)樣儀（瑞士卡瑪）;TLCVisualizer2薄層色譜成像儀（瑞士卡瑪）;RE-20000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）;SPS-04L氣相色譜儀（安捷倫科技）。

1.2試藥不同產(chǎn)地的10批藥材分別采自云南景洪市、云南勐?？h、云南勐臘縣。由西雙版納州食品藥品檢驗(yàn)所彭霞主任藥師鑒定為馬鞭草科植物臭茉莉ClerodendrumphilippinumSchau.var.simplexC.Y.WuetR.C.Fang。蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100080-201610，含量UV法測定，以92.6%計(jì)）。無水乙醇（分析純）、氫氧化鈉（優(yōu)級純）、亞硝酸鈉（分析純）、硝酸鋁（分析純）、石油醚（分析純）、丙酮（分析純）、鹽酸（分析純）、無水硫酸鈉（分析純）、硫酸（分析純）、二氯化鉀、水合氯醛等均為天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司生產(chǎn)，水為蒸餾水。

2方法與結(jié)果

2.1性狀本品為大小不一的類圓形及不規(guī)則塊片，厚0.2～1.0cm。外表面灰棕色至黃棕色，具不規(guī)則細(xì)皺紋，有少數(shù)凸起的支根痕。質(zhì)硬，切面皮部較薄，木部寬廣，黃白色，有橫向裂紋，有的莖木髓部中空。氣微，味淡。如圖2所示。

2.2顯微特征粉末淡黃色。木栓細(xì)胞黃棕色，類長方形或類多角形，壁不甚厚;韌皮纖維多單個(gè)散在，長梭形，壁厚，孔溝明顯，直徑約為17～19μm;木纖維成束，孔溝不明顯，直徑約為16～17μm。導(dǎo)管為具緣紋孔，紋孔排列緊密，直徑約為43～59μm;石細(xì)胞眾多，呈類方形、類長方形或類三角形，單個(gè)散在或集聚成群，壁厚，孔溝明顯，胞腔內(nèi)大多含草酸鈣方晶，直徑25～50μm。淀粉粒眾多，大小不一，多單粒，呈類圓形或類橢圓形，臍點(diǎn)十字形、裂縫狀、點(diǎn)狀，直徑4～12μm;復(fù)粒多由2～4分粒組成。草酸鈣方晶直徑11～22μm?！对颇鲜≈兴幉臉?biāo)準(zhǔn)》（2005年版第三冊·傣族藥）[1]收載“紅花臭牡丹根”項(xiàng)下，未入標(biāo)準(zhǔn)。如圖3所示。

2.3薄層色譜鑒別取本品粉末1g，加乙醇15mL，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?mL使溶解，作為供試品溶液。另取紅花臭牡丹根對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》四部通則0502）[14]試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2005年版第三冊·傣族藥）[1]收載“紅花臭牡丹根”項(xiàng)下有薄層色譜鑒別一項(xiàng)。已納入標(biāo)準(zhǔn)。按照藥材薄層色譜條件，檢測三個(gè)不同產(chǎn)地10批紅花臭牡丹根飲片，薄層色譜圖均一致，重現(xiàn)性好，符合規(guī)定，納入標(biāo)準(zhǔn)。如圖4所示。

2.4檢查項(xiàng)與浸出物參照《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2005年版第三冊·傣族藥）[1]收載“紅花臭牡丹根藥材”項(xiàng)下的規(guī)定及《中國藥典》（2015版四部通則）[14]測定三個(gè)不同產(chǎn)地10批紅花臭牡丹根飲片樣品的水分（通則0832第二法）、總灰分（通則2302）、酸不溶性灰分（通則2302）、砷鹽（通則0822第一法），重金屬（通則0821第二法）、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量（通則2341，測定9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量）總六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和）、總滴滴涕（p，p'-DDE、p，p'-DDD、o，p'-DDT、p，p'-DDT之和）、五氯硝基苯;浸出物（通則2201用水作溶劑照水溶性浸出物測定法項(xiàng)下的熱浸法）。各項(xiàng)測定結(jié)果均符合規(guī)定，結(jié)果均見表1。

2.5總黃酮的的含量測定

2.5.1對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品適量，置100mL量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻。精密量取20mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每1mL中含蘆丁0.3mg）。

2.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0.25、0.50、0.75、1、2、3、4、5、6mL，分別置于25mL量瓶中，各加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法（通則0401）[14]，在357nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.5.3測定法取本品粉末約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入80%乙醇溶液100mL，稱定重量，置85℃水浴上回流1h，放至室溫，稱定重量，用80%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置25mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6mL”起依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量。按干燥品計(jì)算，含總黃酮以蘆?。–27H30O16）計(jì)算。

2.5.4吸收光譜的測定、光譜一致性檢測精密吸取蘆丁對照品溶液、供試品溶液各5mL，分別置于25mL量瓶中，照分光光度法，在200～800nm波長范圍內(nèi)測定吸收光譜，結(jié)果蘆丁對照品與供試品光譜吸收圖譜基本一致，在357nm處有最大吸收。參照赪桐根中總黃酮的提取工藝優(yōu)選[7]及腎茶中總黃酮的含量測定方法[2]，選取357nm為檢測波長。

2.5.5線性關(guān)系考察精密量取蘆丁對照品溶液0.25、0.50、0.75、1、2、3、4、5、6mL（相當(dāng)于蘆丁2.86282、5.72567、8.58846、11.45129、22.90257、34.35386、45.80515、57.25643、68.70772μg/mL），按上述測定法測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：Y=0.0287528X+0.00831103，r2=0.99985，結(jié)果表明蘆丁在2～68μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.6精密度試驗(yàn)取同一批樣品6份（產(chǎn)地：西雙版納景洪市曼蚌湯，批號：20190702），按供試品測定方法測定，總黃酮的平均含量為5.32%，RSD為1.5%。

2.5.7重復(fù)性試驗(yàn)精密量取2.5.1對照品溶液（22.90257μg/mL），按“2.3”項(xiàng)下方法操作，依次測定7次，以吸收度值計(jì)算RSD為0.16%，結(jié)果符合要求。

2.5.8加樣回收率試驗(yàn)根據(jù)《中國藥典》2015版四部（通則9101）[14]，藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中準(zhǔn)確度相關(guān)規(guī)定，設(shè)計(jì)同一濃度，9份供試品溶液按2.5.3方法進(jìn)行測定。該分析方法的回收率為101.17%～107.89.20%，且RSD為2.4%，結(jié)果符合要求。

2.5.9樣品測定取不同產(chǎn)地的10批紅花臭牡丹根飲片，按照上述方法制備供試品溶液，按2.5.2確定工作曲線，以干燥品計(jì)算總黃酮含量。測定結(jié)果均符合規(guī)定，結(jié)果見表1。

3討論

3.1試驗(yàn)條件的考察

3.1.1含量測定試驗(yàn)以蘆丁為對照品采用分光光度法，以相應(yīng)的試劑為空白，分別考察溶劑：50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇;提取方式：回流提取時(shí)間分別為60min、90min、120min;回流溫度分別為75℃、85℃、95℃;超聲處理分別為30min、45min、60min;溶劑量分別為25mL、50mL、100mL;取樣量分別為0.25g、0.5g、1.0g、1.5g制備的供試品溶液，在357nm波長處測定吸光度，計(jì)算總黃酮的含量。結(jié)果表明，取樣量為0.25g，100mL80%乙醇為溶劑85℃回流提取，紅花臭牡丹根中總黃酮的溶出量最大，因此選取此方法制備供試品溶液。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在30分鐘內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.1.2薄層色譜鑒別本次飲片研究考察了薄層色譜的耐用性。不同廠牌的薄層板，硅膠G薄層板（青島海洋化工廠、青島譜科分離材料有限公司、青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司）;其它的方法驗(yàn)證《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2005年版第三冊·傣族藥）[1]已收載。

3.2限度擬定各項(xiàng)限度是根據(jù)各測定結(jié)果照《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2005年版第三冊·傣族藥）[1]收載“紅花臭牡丹根藥材”項(xiàng)下的限度擬定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行擬定，具體見表1。鑒于砷鹽均符合規(guī)定暫不納入標(biāo)準(zhǔn)，重金屬均小于百萬分之十暫不納入標(biāo)準(zhǔn)，有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量中總六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和）、總滴滴涕（p，p'-DDE、p，p'-DDD、o，p'-DDT、p，p'-DDT之和）、五氯硝基苯均未檢出故不納入標(biāo)準(zhǔn)。

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（收稿日期：2021-10-02編輯：劉斌）

作者簡介：陸應(yīng)彩（1982-），女，布依族，本科，副主任藥師，研究方向?yàn)橹写鏊幊煞址治黾皹?biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：503889408@qq.com

通信作者：彭霞（1966-），女，彝族，本科，主任藥師，研究方向?yàn)橹写鏊幊煞址治黾皹?biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：425580460@qq.com