活血合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

申祥國

[摘要]目的 以當(dāng)歸和胸肋行氣活血合劑為例，探討當(dāng)歸活血合劑和胸肋行氣活血合劑質(zhì)量研究標(biāo)準(zhǔn)。 方法 采用薄層色譜（TLC）法對(duì)當(dāng)歸活血?jiǎng)┲挟?dāng)歸、羌活、赤芍、紫花地丁進(jìn)行定性鑒別，對(duì)胸肋行氣活血合劑中的大黃、當(dāng)歸進(jìn)行質(zhì)量鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定胸肋行氣活血合劑中黃岑苷的含量。 結(jié)果 建立靈敏、簡(jiǎn)便、可靠的TCL，采用TCL鑒別，可以清楚的看到藥劑顯示出來的光斑顏色與對(duì)照藥品是相同的，并且陰性無干擾。胸肋行氣活血合劑中黃甘油的含量應(yīng)在16mg以上。 結(jié)論 當(dāng)歸活血?jiǎng)┖托乩咝袣饣钛蟿┲卸际且环N性質(zhì)穩(wěn)定的活血?jiǎng)?，TCL和HPLC可用于當(dāng)歸活血?jiǎng)┖托乩咝袣饣钛蟿┑馁|(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 活血合劑；質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜 ；高效液相色譜

[中圖分類號(hào)] R927.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）13-37-03

[Abstract] Objective To angelica and costal line blood gas mixture as an example， study Angelica Huoxue Mixture and costal line blood gas mixture quality standard research. Methods Using thin layer chromatography （TLC） method for qualitative identification of angelica， notopterygium Angelica Huoxue agent， radix paeoniae rubra， Viola yedoensis， used to identify the quality of chest Qi Huoxue Mixture of rhubarb， Chinese angelica， using high performance liquid chromatography（HPLC） determination of chest Qi and blood circulation of Baicalin in bonding agent. Results To establish a sensitive， simple， reliable TCL， using TCL identification， can clearly see the spot color and control drug agents displayed is the same， and no negative interference. Content in yellow glycerol costal line blood gas in the mixture should be more than 16mg. Conclusion Angelica blood activating agent and chest rib of Qi and blood and activating blood circulation in the mixture is a stable， TCL and HPLC can be used for quality control of Angelica Huoxue agent and costal line blood gas mixture.

[Key words] Huoxue Mixture； The quality control standard； Thin layer chromatography； High performance liquid chromatography

活血合劑是一種以活血化瘀為主要組成方劑的統(tǒng)稱，具有消散淤血、通行血脈、通經(jīng)止痛、療傷消瘡以及破血消癥等作用，主要是應(yīng)用于各種治瘀血阻滯病癥的治療[1]。根據(jù)作用強(qiáng)弱的不同，可以分為活血化瘀劑、活血消瘡劑、療傷止痛劑、活血消癥劑以及活血調(diào)經(jīng)劑五大類[2]。當(dāng)歸是活血合劑的一種，其成分主要有當(dāng)歸、紅花、續(xù)斷以及羌活等十多味重要組成，在臨床中可以用于治療關(guān)節(jié)疼痛、肌肉疼痛、神經(jīng)痛、慢性支氣管炎、慢性盆腔炎、月經(jīng)疼痛、高血壓病、帶狀皰疹以及鼻炎等各種病例。胸肋行氣活血合劑主要成分有川芎、黃芪、赤芍、桃仁、紅花、青皮、當(dāng)歸、蒼術(shù)、海藻、牛膝、枳殼、桔梗等，具有活血、祛瘀、止痛和消腫作用，在臨床上主要用于胸肋跌打損傷的治療[3]。為有效的控制當(dāng)歸活血合劑和胸肋行氣活血合劑的質(zhì)量，保證其在臨床中的療效，本研究采用TLC對(duì)當(dāng)歸活血?jiǎng)┲挟?dāng)歸、羌活、赤芍、紫花地丁進(jìn)行定性鑒別，對(duì)胸肋行氣活血合劑中的大黃、當(dāng)歸進(jìn)行質(zhì)量鑒別，采用HPLC測(cè)定胸肋行氣活血合劑中黃芩苷的含量，現(xiàn)將研究報(bào)道如下。

1 試藥與儀器

1.1 試藥

1.1.1 當(dāng)歸活血?jiǎng)┰囁?當(dāng)歸活血合劑（深圳平樂骨傷科醫(yī)院制劑室）；當(dāng)歸對(duì)照藥材，芍藥苷對(duì)照品均購自中國藥品生物鑒定所；芍藥苷對(duì)照品、紫花地丁對(duì)照藥材；硅膠 G薄層板購自山東大學(xué)生物科學(xué)與工程研究所；研究中使用的所有藥劑均為分析純[4]。

1.1.2 胸肋行氣活血合劑試藥 胸肋行氣活血合劑（江蘇省姜堰市中醫(yī)院）；當(dāng)歸對(duì)照藥材中國藥品生物制品鑒定所，正己烷和醋酸乙酯色譜純，所使用的水均為純化水。

1.2 儀器

點(diǎn)樣器；水浴鍋（型號(hào)：H.H.S21-4R，廠家：上海醫(yī)療器械五廠）；三用紫外儀（型號(hào)：ZF-2，廠家：上海安亭電子儀器廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 當(dāng)歸活血合劑質(zhì)量鑒別

2.1.1 當(dāng)歸與羌活的薄層鑒別方法與結(jié)果 當(dāng)歸與羌活的薄層鑒別：（1）取當(dāng)歸20mL，采用乙醚振搖的方式連續(xù)提取2次，每次提取量為20mL，分取出當(dāng)中的乙醚，保留備用，將溶液合并到乙醚提取液中，揮干，將1mL的醋酸乙酯加入殘?jiān)?，使其充分溶解，并將其作為供試?yàn)的溶液用品。（2）取當(dāng)歸對(duì)照藥材1g，并加入10mL的乙醚，待混合后連續(xù)振搖5min，并提取當(dāng)中的乙醚液，蒸干，將1mL的醋酸乙酯加入殘?jiān)?，使其充分溶解，并將其作為試?yàn)中的對(duì)照藥材溶液用品。（3）取無當(dāng)歸的陰性藥品作為對(duì)照藥品，按照供試驗(yàn)品的制作方法將其制成當(dāng)歸空白對(duì)照溶液。

鑒別結(jié)果：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄 VIB）實(shí)驗(yàn)[5]，吸取供試驗(yàn)用品溶液、對(duì)照藥材用品溶液以及當(dāng)歸空白對(duì)照用品溶液三種，每種溶液中吸取5μL，分別將該三種溶液點(diǎn)在統(tǒng)一硅膠G薄層板上，按照9︰1的以正己烷-醋酸乙酯作為展開劑，將其展開后取出，并將其晾干，待其晾干后放置紫外光燈365nm下進(jìn)行檢測(cè)。在供試驗(yàn)色譜中，可以看到與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，其顯示出來的光斑顏色都是相同的，并且陰性無干擾。

2.1.2 赤芍薄層鑒別方法與結(jié)果 赤芍薄層鑒別：（1）取赤芍20mL，放置于正丁醇和水飽溶液中，連續(xù)振搖5min，并提取2次，每次提取20mL，將提取的40mL溶液與正丁醇提取液合并，并在合并溶液中加入20mL清水洗滌，過濾水液，蒸干，將1mL的醋酸乙酯加入殘?jiān)?，使其充分溶解，并將其作為供試?yàn)的溶液用品。（2）取芍藥苷對(duì)照品1g，加入甲醇將其制成每1mL含1mg的溶液，將其作為對(duì)照品溶液。（3）取沒有赤芍的陰性藥品作為對(duì)照藥品，按照供試驗(yàn)品的制作方法將其制成當(dāng)赤芍白對(duì)照溶液。

鑒別結(jié)果：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄 VIB）實(shí)驗(yàn)[6]，吸取供試驗(yàn)用品溶液、對(duì)照藥材用品溶液以及當(dāng)歸空白對(duì)照用品溶液三種，每種溶液中吸取5μL，分別將該三種溶液點(diǎn)在統(tǒng)一硅膠G薄層板上，按照40︰5︰10︰0.2的比例，將氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸作為展開劑，將其展開后取出，并將其晾干，并噴以5%的香草醛硫酸溶液，對(duì)其進(jìn)行加熱處理后，可以清晰的看到斑點(diǎn)，在供試驗(yàn)色譜中，可以看到與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，其顯示出來的光斑顏色都是相同的，并且陰性無干擾。

2.1.3 紫地花丁薄層鑒別方法與結(jié)果 紫地花丁薄層鑒別：（1）取紫地花丁20mL，放置于正丁醇和水飽溶液中，振搖提取2次，每次提取20mL，將提取的40mL溶液與甲醇提取液合并，采用超聲處理20min，并在合并溶液中加入20mL清水洗滌，過濾水液，將甲醇溶液蒸干，將1mL的醋酸乙酯加入殘?jiān)?，使其充分溶解，并將其作為供試?yàn)的溶液用品。（2）取紫地花丁對(duì)照品0.8g，加入30mL清水煎煮，將其作為對(duì)照品溶液。（3）取不含紫地花丁的陰性藥品作為對(duì)照藥品，按照供試驗(yàn)品的制作方法將其制成紫地花丁空白對(duì)照溶液。

鑒別結(jié)果：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄 VIB）實(shí)驗(yàn)，吸取供試驗(yàn)用品溶液、對(duì)照藥材用品溶液以及當(dāng)歸空白對(duì)照用品溶液三種，每種溶液中吸取5μL，分別將該三種溶液點(diǎn)在統(tǒng)一硅膠G薄層板上，按照5︰3︰1的比例，將甲苯-醋酸乙酯-甲酸作為展開劑，將其展開后取出，待其晾干后放置紫外光燈365nm下進(jìn)行檢測(cè)。在供試驗(yàn)色譜中，可以看到與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，其顯示出來的光斑顏色都是淡藍(lán)色的熒光斑點(diǎn)，并且陰性無干擾。

2.2 胸肋行氣活血合劑質(zhì)量鑒別

2.2.1 大黃薄層鑒別 （1）取大黃藥劑10mL，并加入10mg氯仿，萃取，分離出氯仿液，并將其蒸干；（2）用1%氫氧化鈉溶液加入殘?jiān)?dāng)溶液呈紅色后加入3%過氧化鈉溶液，加熱，當(dāng)加酸至酸性時(shí)，溶液由紅色逐漸變?yōu)辄S色。

2.2.2 當(dāng)歸薄層鑒別 當(dāng)歸薄層鑒別方法如上述當(dāng)歸活血?jiǎng)┲械蔫b別方法相同。

2.2.3 黃岑苷含量測(cè)定 試藥：胸肋行氣活血合劑（江蘇省姜堰市中醫(yī)院）；黃岑苷對(duì)照藥材中國藥品生物制品鑒定所。儀器：儀器為SHIMADZU日本島津高效液相色譜儀，檢測(cè)器為SPD-10AVP，CH250型超聲波清洗器。試劑：甲醇（色譜純）、水（重蒸餾水）；含量測(cè)定：流動(dòng)相取47︰53︰0.2的比例配置甲醇-水-磷酸，流速設(shè)置為1.0mL/min，檢測(cè)波長設(shè)置為280nm，柱溫設(shè)置為28℃，理論塔板數(shù)>3000，分離度：>1.5，色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠[7]。溶液的制備：取在60℃減壓干燥4h的黃岑苷和適量對(duì)照品，加入甲醇制成含量為1mL含40μg的溶液作為對(duì)照品。取試驗(yàn)品1mL，加入70%的乙醇制成50mL樣品并過濾，作為供試品溶液。

2.2.4 測(cè)定結(jié)果 線性關(guān)系考察：分別吸取1.0～0.6μL的對(duì)照品溶液記錄色譜圖，將對(duì)照品含量作為橫坐標(biāo)，將峰面積作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，結(jié)果表明黃岑苷在0.04～0.24μg之間線性關(guān)系良好[4]。

測(cè)定方法：吸取對(duì)照品溶液和供試驗(yàn)品溶液各10μL，并分別將溶液注入HPLC中，測(cè)定出沒帶黃岑苷的含量應(yīng)該大于16.0mg。

3 討論

當(dāng)歸也叫做干歸，是一種傘形科植物，其形狀略呈圓柱形，一般支根有3～5條，其支根長度在15～25cm左右，表面主要呈現(xiàn)出黃棕色，顏色深一點(diǎn)的呈現(xiàn)出棕褐色，具有縱橫紋和橫長皮孔；根部含有揮發(fā)油，即亞丁基苯酞、鄰羧基苯正戊酮等[8]。當(dāng)歸性味甘、辛，溫，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效[3]。主要用于血虛萎黃、眩暈心悸、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)等癥狀的治療，酒當(dāng)歸具有活血通經(jīng)的作用，可以用于經(jīng)閉痛經(jīng)，風(fēng)濕痹痛，跌撲損傷[5]。因其有多種治療功效，因此在臨床醫(yī)學(xué)中得到了普遍的應(yīng)用，加強(qiáng)其質(zhì)量檢測(cè)也顯得尤為重要。胸肋行氣活血合劑是一種活血、祛瘀、止痛和消腫作用，在臨床上主要用于胸肋跌打損傷的治療。

當(dāng)歸活血合劑和胸肋行氣活血合劑都是臨床醫(yī)學(xué)中常用的一種活血合劑藥物，為保證其制劑質(zhì)量，采用薄層色譜質(zhì)量檢測(cè)的方法，可以對(duì)當(dāng)歸活血合劑中的當(dāng)歸、羌活、赤芍以及紫花地汀等主要藥物成分進(jìn)行鑒別。在當(dāng)歸薄層鑒別方法中，主要是參考了朱美艷、李鄭林[6]的鑒別方法，按照9︰1的以正己烷-醋酸乙酯作為展開劑。在赤芍薄層鑒別中，主要參照了朱益利、譚浩軍[1]的鑒別方法，按照按照40︰5︰10︰0.2的比例，將氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸作為展開劑。在紫地花丁薄層鑒別中，參照了葉宓曚、徐凌的鑒別方法，按照5︰3︰1的比例，將甲苯-醋酸乙酯-甲酸作為展開劑，其顯示出來的光斑顏色都是淡藍(lán)色的熒光斑點(diǎn)。

TCL和HPLC 鑒別方法具有操作簡(jiǎn)單、開展快速的特點(diǎn)，在鑒定過程中，可以清晰的看到顯示出來的光斑顏色，分離出來的效果也比較好，體現(xiàn)出了很強(qiáng)的專業(yè)性，并且陰性空白無干擾[9-12]。HPLC可以有效檢測(cè)出胸肋行氣活血合劑中黃岑苷的含量。因此可以總結(jié)出當(dāng)歸活血?jiǎng)┖托乩咝袣饣钛蟿┲卸际且环N性質(zhì)穩(wěn)定的活血?jiǎng)琓CL和HPLC可用于當(dāng)歸活血?jiǎng)┖托乩咝袣饣钛蟿┑馁|(zhì)量控制。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 朱益利，譚浩軍.活血接骨合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，15（4）：88-90.

[2] 葉宓曚，徐凌.祛風(fēng)清熱合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].浙江臨床醫(yī)學(xué)，2012，8（11）.1008-7664.

[3] 藍(lán)明雄，李國榮，林慧菁，等.傷科活血合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].醫(yī)藥前沿，2012（21）：119-120.

[4] 葉宓曚，俞索靜，徐凌，等.升清降濁合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中成藥，2011，29（8）：附16-附18.

[5] 黃運(yùn)福，石玲婷，孫粉嬌，等.歸紅合劑促進(jìn)產(chǎn)后子宮復(fù)舊的臨床研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8（10）：97-98，100.

[6] 朱美艷，李鄭林.歸芍通絡(luò)合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)正骨，2011，19（5）：16.

[7] 蘇琳.沙棘脂康合劑工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2012：41-43.

[8] 杜娟.復(fù)方天麻緩釋片的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 咸陽：陜西中醫(yī)學(xué)院，2009：122-123.

[9] 劉瑞新，王青曉.高效液相色譜法測(cè)定元胡止痛口服液中延胡索乙素的含量[J].中國實(shí)用方劑學(xué)，2010，16 （8）：97-98.

[10] 張明輝，藺寧利，邵忙收.HPLC法測(cè)定胃安寧片中延胡索乙素含量研究[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33（1）：112-113.

[11] 劉修樹，陳業(yè)倉.高效液相色譜法測(cè)定舒通肩痛片中延胡索乙素含量[J].中國藥業(yè)，2011，20（7）：156-157.

[12] 李永，張龍.高效液相色譜法測(cè)定延胡索藥材中延胡索乙素的含量[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2009，16（11）：11-12.

（收稿日期：2015-03-15）