雞戊型肝炎病毒感染及其鑒別診斷

秦卓明 殷若新 馬秀麗 高月花 張玉霞 亓立紅 黃兵 李玉峰 徐懷英

摘 要：雞戊型肝炎病毒（禽HEV）是導(dǎo)致雞肝臟、脾臟腫大綜合癥（HS）的主要病原，近期在臨床可疑病例發(fā)生增多。該病以病雞肝臟、脾臟腫大以及蛋雞、肉種雞的產(chǎn)蛋下降、死淘率增加等為主要危害特征。鑒于引起肝臟病變的病因較為復(fù)雜，在此做一下鑒別。

關(guān)鍵詞：雞戊型肝炎病毒;感染;鑒別診斷

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：C 文章編號：1673-1085（2022）03-0028-06

肝脾腫大綜合癥（HS）由禽戊型肝炎病毒感染引起，是一種以開產(chǎn)的蛋雞和肉種雞產(chǎn)蛋下降、死淘率逐漸增加為特征的疾病[1，2]。病雞剖檢特征：在腹腔內(nèi)積有紅色腹水、腹部點狀出血，肝臟、脾臟腫大。首次描述該病時稱為肝臟和脾臟腫大綜合征（HS），又稱為大肝大脾?。˙LS）、出血壞死性肝炎脾臟綜合征、出血壞死性肝炎、肝炎-肝出血綜合征和壞死性膽管肝炎[3]。在澳大利亞，大肝大脾?。˙LS）被公認為是一種在經(jīng)濟上嚴重危害肉種雞并導(dǎo)致其產(chǎn)蛋嚴重下降的疾病。尚未見到人感染禽HEV的報道，不具有公共衛(wèi)生意義。

1 病因?qū)W

1.1 分類

幾乎所有的禽戊型肝炎病毒分離株均屬于戊型肝炎病毒科。戊型肝炎病毒科分兩個屬，分別為正肝病毒屬（含哺乳動物和禽源戊型肝炎病毒）和副肝病毒屬（含有清喉鱒魚病毒）。在正肝病毒屬中，有4個病毒種。其中，A型毒株分別來自人、豬、野豬、鹿、貓鼬、兔子、駝鹿和駱駝;B型毒株分別來自禽類和野鳥;C型毒株分別來自大鼠、澳洲大袋貍、亞洲麝香鼩、雪貂和水貂;D型毒株主要來自蝙蝠。

已經(jīng)從世界范圍流行的雞HEV毒株中鑒定出了至少四種不同的基因型，具體包括基因1型（澳大利亞）、2型（美國）、3型（歐洲和中國）和4型（中國臺灣和匈牙利）。

1.2 形態(tài)學(xué)

雞HEV是一種球形、無包膜、系統(tǒng)對稱的病毒顆粒，其病毒直徑約為32～34 nm，在其表面有杯狀凹陷，類似于杯狀病毒。

1.3 化學(xué)組成

雞HEV基因組是一個聚腺苷化單股正鏈RNA，長度為6 654 bp，具有poly（A）尾巴結(jié)構(gòu)，比哺乳動物HEVs短約600 bp。鳥類的HEV基因組由一個短的5’非編碼區(qū)（NCR）、三個開放閱讀框（ORF）和一個3’NCR組成。ORF1位于基因組的5’端，編碼非結(jié)構(gòu)蛋白;ORF 2編碼免疫原性衣殼蛋白;ORF 3編碼一個功能未知的小蛋白質(zhì)。

1.4 病毒復(fù)制

雞HEV不能在細胞培養(yǎng)中繁殖。在SPF雞實驗感染HEV后，在肝臟中檢測到HEV的復(fù)制。同時，在一些肝外組織包括結(jié)腸、空腸、回腸、十二指腸和盲腸中亦檢測到了HEV，這表明雞HEV復(fù)制不僅發(fā)生在肝臟，而且在胃腸道組織中也可進行復(fù)制。有證據(jù)表明， HEV在口服后首先在胃腸道復(fù)制，然后到達肝臟，并通過糞便大量排出病毒。

1.5 理化因子

利用氯仿和乙醚處理含有HEV的肝懸液不能滅活病毒，但經(jīng)56 ℃孵育1 h或37 ℃孵育6 h后，則混懸液失去感染性。利用0.05%Tween20、0.1%NP40和0.05%福爾馬林分別處理HEV肝懸液，其感染性可降低1 000倍。糞口傳播途徑表明，HEV可抵御腸道中的酸性和弱堿性環(huán)境而不失活。

1.6 菌株分類

雞HEV株目前僅有1個血清型，同一基因型分離株的序列同源性較高，如基因2型分離株間約為90%以上。GenBank中的5個雞HEV分離株ORF2的同源性在98%以上。但不同基因型之間如基因1型、2型和3型的核苷酸序列同源性有一定的差異，一般為82%～83%。如匈牙利和中國臺灣的基因4型雞HEV與已知3個基因型的核苷酸序列同源性僅為82%～87%。從澳大利亞BLS雞分離出的病毒是HEV變異株，與來自美國和加拿大的2型禽HEV的核苷酸序列同源性僅為80%[4-6]。

1.7 實驗室宿主系統(tǒng)

雞HEV只有通過靜脈接種病毒才能在雞胚中繁殖，而不能通過其他的接種方法進行增殖。研究表明，用來自雞HEV感染性cDNA克隆的RNA轉(zhuǎn)錄子轉(zhuǎn)染萊航公雞肝癌（LMH）雞肝細胞系（ATCCCRL-2117），則證實該細胞支持雞HEV的復(fù)制。利用禽HEV的抗血清，采用免疫熒光（IF）法檢測轉(zhuǎn)染的LMH細胞中的病毒抗原，發(fā)現(xiàn)熒光信號主要分布在細胞質(zhì)中。但是，病毒并不能在細胞之間傳播。

2 流行病學(xué)

2.1 發(fā)生和分布

1991年在加拿大西部首次報道HS綜合征，此后在加拿大東部和美國得到認可。目前，世界上許多國家都曾報道HEV感染?；\養(yǎng)的萊航母雞、肉種雞均易感染該病，但肉-蛋兼用品系雞則很少感染。HEV感染在美國雞群中屬地方性流行。美國大約有71%的雞群和30%的雞，其HEV抗體呈陽性。在另一項研究中，有大約45%的蛋雞，其HEV抗體陽性;有63%的雞群HEV RNA檢測陽性。在西班牙，大約有90%的雞群和20%～80%的雞，其禽HEV抗體檢測陽性。

中國禽HEV的感染十分普遍。2007年，梁久紅等報道我國南方的雞血清抗體陽性率為3%[7];張璐等2008～2009年對山東、黑龍江和廣東三省進行的血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)健康雞的血清陽性率為28.5%，患有肝脾腫大綜合征的雞的血清陽性率為43.3 %[8];趙冀楠等2009～2011年對我國多個地區(qū)的禽HEV感染情況調(diào)查發(fā)現(xiàn)，36個雞場中32個為禽HEV抗體陽性，陽性率為88.9%;4884份雞血清中，2 262份為陽性，陽性率為46.31%[9]。

2.2 感染宿主

在自然條件下，除雞外，還發(fā)現(xiàn)了一些野生鳥類如小白鷺、普通紅隼、紅腳獵鷹、畫眉鷹也可感染HEV，但野生鳥感染禽HEV是否產(chǎn)生臨床癥狀尚不清楚。在實驗條件下，所有日齡的雞均可通過靜脈和口鼻接種途徑感染HEV。但是，人工接種HEV不感染哺乳動物。

2.3 傳播、攜帶和媒介

HEV在雞群之間很容易發(fā)生傳播[10]。通過口鼻接種SPF雞均成功復(fù)制了HEV感染。糞便可能是病毒傳播的主要途徑，因為實驗性感染雞的糞便排泄出大量的病毒。在1日齡雛鳥中檢測到了禽HEV的病毒RNA，暗示該病可能會垂直傳播。盡管從實驗感染禽HEV的雞蛋清中分離到感染的病毒，但仍然缺乏可發(fā)生垂直傳播的有力證據(jù)。氣溶膠途徑傳播禽類HEV不成功。尚未發(fā)現(xiàn)傳播禽HEV的攜帶者或媒介。

3 臨床癥狀

大多數(shù)禽類HEV感染為亞臨床癥狀，其發(fā)病率和死亡率均較低。發(fā)生HS綜合征的禽類在死亡前通常缺乏明顯的臨床癥狀。在該病爆發(fā)時，有些雞場產(chǎn)蛋下降20%以上，而有些雞場則幾乎不受影響。在實驗條件下，實驗感染的蛋雞在12周內(nèi)產(chǎn)蛋下降為10%～30%。肝脾腫大綜合征的特征是，在30～72周齡期間，肉種雞和蛋雞的死亡率高于正常的死亡率，且發(fā)病高峰集中發(fā)生在40～50周齡。在發(fā)病期間，每周死亡率上升至約0.3%，有可能超過1.0%。在美國中西部的一個商業(yè)蛋雞場，感染雞從第19周到27周，雞群產(chǎn)蛋下降了45%，且該雞群73%的感染雞HEV RNA檢測結(jié)果呈陽性。在澳大利亞，雞大肝大脾病呈現(xiàn)多種臨床癥狀，從亞臨床感染到雞蛋下降20%，且伴隨著在3～4周內(nèi)每周高達1%的死亡率。患病雞通常冠子和肉垂蒼白、精神抑郁、厭食、羽毛臟或肛門有糊狀糞便?；疾‰u群通常產(chǎn)小蛋、伴有蛋殼薄和顏色差，但種蛋的內(nèi)部質(zhì)量、受精率和孵化率并不受影響。

4 病理剖檢

4.1 臨床剖檢

在自然條件下，死亡雞通常有卵巢退行性病變，腹部積有紅色液體，肝、脾腫大。在死亡前，感染雞通常體況良好，冠子和肉垂蒼白，但也有個別雞體況較差。肝臟通常質(zhì)脆，有紅色或黃色的斑點或褐色的病灶，并可能伴有肝被膜下血腫和表面附著的血凝塊[11]。感染雞的脾臟從輕微病變到嚴重腫大，有時伴有白色壞死點。

4.2 組織學(xué)病變

在顯微鏡下，肝臟的病變從多灶性出血到廣泛性壞死和出血，包括門靜脈周圍異粒細胞和單核炎癥細胞浸潤。在門靜脈及其周圍，常伴有淋巴細胞浸潤和少數(shù)漿細胞浸潤。此外，同質(zhì)嗜酸性細胞物質(zhì)、淀粉樣蛋白在肝臟間質(zhì)細胞中的積累和肝細胞的分離也是常見的。在嚴重的病例中，常?？梢姷诫x散性的肉芽腫，并伴有可能形成的門靜脈血栓。

利用禽HEV在實驗條件下感染SPF雞，主要病變發(fā)生在肝臟。在部分感染雞身上，出現(xiàn)了肝臟被膜皮下出血，右肝中葉略腫大。在顯微鏡下，在肝臟切片中觀察到了淋巴細胞性外周炎和靜脈炎的病灶。靜脈接種后10 d（DPI），對雞的肝臟損傷最嚴重。其他的肝臟病變?nèi)绺渭毎麎乃?、間質(zhì)淀粉樣蛋白和被膜下出血等，亦可在感染雞觀察到。SPF感染禽HEV后，均可在顯微鏡下觀察到其它臟器病變，如脾臟（輕度淋巴樣增生）、胸腺（輕度皮質(zhì)發(fā)育不全）、腎（偶爾有輕度淋巴細胞間質(zhì)性腎炎）和肺臟（輕度淋巴細胞性、異嗜性副支氣管和間質(zhì)性炎癥）等病變[12]。

5 發(fā)病和免疫機制

5.1 發(fā)病機制

目前，禽HEV在雞體內(nèi)感染的發(fā)病機制尚不清楚。鳥類HEV被認為是通過糞-口途徑進入宿主。禽HEV在肝臟中復(fù)制后，由肝細胞釋放到膽囊，然后通過糞便排出。除肝臟外，在實驗性感染雞的結(jié)腸、盲腸、空腸、回腸、十二指腸和盲腸扁桃體中也可檢測到復(fù)制的HEV。胃腸道組織可能是口服接種雞HEV后病毒復(fù)制的第一個場所，盡管目前對肝臟以外HEV復(fù)制所導(dǎo)致雞的臨床癥狀和病理變化尚不清楚。

5.2 免疫機理

體液抗體在雞體內(nèi)的反應(yīng)大致發(fā)生在接種雞HEV的1～4周，而細胞介導(dǎo)的免疫在機體內(nèi)的情況尚不清楚。禽HEV不僅在基因方面與哺乳動物HEV相關(guān)，而且與哺乳動物在抗原性方面也相關(guān)[13]。禽類HEV的衣殼蛋白是免疫性基因，可產(chǎn)生抵御禽類HEV感染的保護性免疫。在禽HEV和哺乳動物HEV之間，其衣殼蛋白中既有相同的抗原表位，又有不同的抗原表位，該結(jié)果已得到證實。目前，在禽類HEV衣殼蛋白中，已鑒定出4個公認的抗原結(jié)構(gòu)域（I、II、III、IV）。但是，一項動物攻毒實驗結(jié)果表明，衣殼蛋白中決定免疫的表位不具有保護性[14]。

6 診斷

6.1 初步診斷

根據(jù)臨床癥狀和病理變化可初步診斷，但缺乏特征性的指標。確診需要依賴實驗室檢測。因該病肝臟和脾臟腫大，容易與腫瘤病相混淆，可通過組織病理學(xué)進行鑒別。

6.2 實驗室診斷

對其診斷主要依賴于利用RT-PCR來檢測患雞糞便、膽汁和血清中的病毒RNA[15]或通過ELISA檢測抗體，提示過去曾經(jīng)感染過HEV。

禽HEV在細胞培養(yǎng)中不復(fù)制。雖然可以通過靜脈接種雞胚感染，但由于靜脈接種技術(shù)難度大，利用雞胚分離病毒并不成功。

6.3 鑒別診斷

6.3.1 肝臟腫瘤性疾病

6.3.1.1 馬立克氏?。∕arek’s disease， MD） 是雞最常見的淋巴組織增生性疾病，以危害淋巴系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等為特征，在上述部位形成單核細胞浸潤和腫瘤。通常在4～18周齡發(fā)病，一旦進入產(chǎn)蛋高峰，MD的發(fā)病幾率就大大降低。病雞經(jīng)常伴有癱瘓或劈叉反應(yīng)，消化道和性腺常有腫瘤，且肝臟腫瘤結(jié)節(jié)突出表面、質(zhì)地堅硬而致密。

6.3.1.2 雞白血?。ˋvian leucosis， AL） 是一類由禽白血病毒所引起的雞的多種腫瘤性疫病的總稱。在自然條件下，以淋巴白血病最為常見，又稱大肝病。通常在雞開產(chǎn)后發(fā)?。ù笥?0周齡），病雞極度消瘦，肝脾顯著腫大，體積可達正常體積的3～4倍，通常伴有法氏囊腫瘤，這也是雞白血病的重要特征性病變。

6.3.1.3 網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥（RE） 是一種由病毒（REV）引起，以禽類（雞、鴨和野雞等）免疫抑制、致死性網(wǎng)狀內(nèi)皮瘤、矮小綜合征和慢性腫瘤為特征的疫病。病雞生長發(fā)育障礙，個體瘦小，病雞羽毛發(fā)育不整齊和雞群發(fā)育不良，而飼料消耗量不減少。最典型的病雞是肝臟腫大并呈蒼白或大理石樣和發(fā)生腫瘤。在腫瘤中發(fā)現(xiàn)淋巴細胞、網(wǎng)狀細胞和漿細胞?；旌细腥臼荝E發(fā)生的重要原因。

6.3.2 病毒感染引起的非腫瘤性肝臟病變

6.3.2.1 禽流感 包括高致病性禽流感和低致病性禽流感，由正黏病毒引起，多見于冬、春、秋等天氣驟變及寒冷季節(jié)，對各種日齡雞均可感染。該病臨床癥狀復(fù)雜多變，既可以造成全身內(nèi)臟性出血，又可造成全身性出血，如肉髯、腳部鱗片等。剖檢可見：肝臟腫大、質(zhì)脆、易破裂、色淺和出血，多色彩，有黃色條紋。胰腺有褐色或白色斑點樣出血以及變性的壞死灶，此為特征性病變。

6.3.2.2 雞包涵體肝炎 由腺病毒引起，主要發(fā)生于肉雞。所有品系的雞都能感染，商品肉雞最易感。發(fā)病多在3～9周齡之間，但以5周齡的雞最多見。特征性病變?yōu)楦窝?，肝色淺質(zhì)脆、出血，腫大、發(fā)黃，表面及切面有出血點或出血斑。

6.3.2.3 雞心包積液綜合征 由I群4型禽腺病毒引起，主要感染3～5周齡的雛雞。特征性癥狀是心包腔中有淡黃色、清亮的積液。肝臟腫脹，脂肪變性和有出血點。

6.3.2.4 其它病毒感染 如鴨病毒性肝炎、鴨瘟、鴨呼腸孤等病毒感染。

6.3.3 細菌或真菌感染導(dǎo)致的肝炎、肝周炎和肝臟腫大 大多數(shù)細菌或真菌感染均可導(dǎo)致肝臟和脾臟產(chǎn)生各種病變，如大腸桿菌、沙門氏菌（白痢、傷寒、副傷寒等）、巴氏桿菌、空腸彎桿菌、鏈球菌、結(jié)核桿菌、葡萄球菌、螺旋體、支原體、綠膿桿菌、波氏桿菌等細菌以及曲霉菌等真菌感染，均可造成對肝臟、脾臟等內(nèi)臟器官一定程度的損傷。具體表現(xiàn)為：肝臟腫大、質(zhì)脆、出血、壞死、肝臟萎縮、肝臟硬化、肉芽腫等，出現(xiàn)肝周炎、心包炎、腹膜炎和氣囊炎等。該類疾病的最大特點是：細菌或真菌感染通常是在家禽機體抵抗力低下的情況下發(fā)病的，常?？赏ㄟ^培養(yǎng)基分離到病原菌，且利用抗生素治療，一般效果較好。相反，由病毒性感染所導(dǎo)致的肝臟病變通常無藥可治。

6.3.4 寄生蟲感染所導(dǎo)致的肝臟病變 組織滴蟲病、住白細胞原蟲病等寄生蟲病可導(dǎo)致肝臟腫大，并出現(xiàn)特征性壞死。以組織滴蟲病為例，可導(dǎo)致典型的肝臟和盲腸腫大;盲腸黏膜發(fā)炎出血，形成潰瘍和經(jīng)典的栓塞;肝臟出現(xiàn)特征性的壞死灶，肝臟體積增大，表面形成一種圓形或不規(guī)則的稍稍凹陷的潰瘍灶，潰瘍呈淡綠色或淡黃色，邊緣少有突起。

6.3.5? 霉菌毒素、藥物中毒等導(dǎo)致的肝臟病變 霉菌毒素、有害物質(zhì)、廢棄物、毒物等大都需要在肝臟中代謝，因此，上述每一種因子都會影響到肝臟的功能。以霉菌毒素為例，如種雞食入霉菌毒素，可導(dǎo)致雞弱雛較多、雛雞肝臟質(zhì)脆、貧血等。藥物中毒損害最嚴重的通常是肝臟，如磺胺藥中毒、喹乙醇中毒、有機磷中毒等。

6.3.6 營養(yǎng)、環(huán)境等因素所導(dǎo)致的肝臟病變 肉雞腹水、缺氧、熱應(yīng)激、痛風、脂肪肝出血綜合征、生物素缺乏、膽堿缺乏、維生素缺乏（VA、VB、VE等）等多種因素可導(dǎo)致家禽肝臟的病變。

可以采取排除法對上述因素進行分析，一一排除，進而發(fā)現(xiàn)真正的原因。

7 預(yù)防

目前還沒有針對禽HEV的有效疫苗，缺乏針對禽類HEV感染的治療方法。在養(yǎng)雞場實施嚴格的生物安全措施可以控制病毒的傳播。

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蛋殼顏色與營養(yǎng)含量有關(guān)嗎？

沒有關(guān)系！雞蛋的蛋殼顏色取決于雞的品種，是受基因控制的，遺傳穩(wěn)定。雞蛋無論大小或顏色如何，在營養(yǎng)價值上都非常相似。蛋殼顏色只是滿足多元化的需求，試驗證明蛋殼顏色及深淺與雞蛋營養(yǎng)成分和品質(zhì)沒有直接聯(lián)系。市場上雞蛋主要有四種，褐殼雞蛋、粉殼雞蛋、白殼雞蛋和綠殼雞蛋，其中褐殼雞蛋和粉殼雞蛋在我國占據(jù)主要市場（消費習(xí)慣）。不同的蛋殼顏色與蛋殼厚度、蛋殼強度有一定的關(guān)聯(lián)性，但是蛋殼顏色的形成機制與蛋黃、蛋白等營養(yǎng)物質(zhì)的形成機制無相關(guān)性，與雞蛋的營養(yǎng)成分沒有必然聯(lián)系。