水梔子醋酸乙酯部位化學(xué)成分研究

曹彥剛，任英杰，郝志友，

張艷麗1,2，劉晏靈1,2，王夢(mèng)娜1,2，鄭曉珂1,2，馮衛(wèi)生1,2*

1河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院；2河南省中藥開發(fā)工程技術(shù)研究中心，鄭州 450046

茜草科Rubiaceae梔子屬Gardenia植物全球約有250種，廣泛分布于東半球的熱帶和亞熱帶地區(qū)[1]。水梔子Gardeniajasminoidesvar.radicans為多年生灌木，主要分布于我國(guó)江西、河南、湖南、湖北等省區(qū)[2]。水梔子又名伏尸梔子，因其含有大量的梔子黃色素而常被作為提取色素的原料，在民間，其根、果實(shí)可以入藥，外用可以治療跌打扭傷，內(nèi)服具有清熱涼血、鎮(zhèn)靜止痛、疏風(fēng)解濕的功效[3]。目前，對(duì)于水梔子化學(xué)成分及其藥理活性報(bào)道較少，現(xiàn)有研究表明，水梔子主要含有環(huán)烯醚萜苷類、三萜類、二萜類、香豆素類等化學(xué)成分[3,4]。為進(jìn)一步探尋水梔子中所含的活性成分，為開發(fā)利用其植物資源奠定基礎(chǔ)，本課題對(duì)水梔子醋酸乙酯部位進(jìn)行了系統(tǒng)地化學(xué)成分研究，并從中分離得到17個(gè)化合物，其中包括黃酮類化合物6個(gè)，木脂素類化合物4個(gè)，簡(jiǎn)單苯丙素類化合物4個(gè)，其它類化合物3個(gè)。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，梔子提取物及其有效成分具有較好的降糖活性[5,6]，而水梔子作為梔子的變種，其在遺傳多樣性、化學(xué)成分及藥理活性方面與梔子差異不大[3]。因此，本研究采用體外α-葡萄糖苷酶抑制活性實(shí)驗(yàn)對(duì)所得化合物進(jìn)行降糖活性篩選，以期闡明水梔子降糖活性的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為進(jìn)一步開發(fā)利用其藥用價(jià)值提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Bruker AVANCE Ⅲ 500型核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、A-1000S型水流抽氣機(jī)、CA-1116A型冷卻水循環(huán)裝置(上海愛朗儀器有限公司)；賽譜銳思LC50型高壓制備液相色譜儀(賽譜銳思北京科技有限公司)；YMC-Pack ODS-A色譜柱(250 mm×10 mm，5 μm)(日本YMC有限公司)；柱層析填料MCI gel CHP-20(日本Mitsubishi公司)；Sephadex LH-20(瑞典Parmacia Biotech公司)；柱層析硅膠H(160～200目)、薄層層析硅膠(顆粒范圍10～40 μm)(青島海洋化工廠)；色譜甲醇(天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；色譜乙腈(美國(guó)天地公司)；其它試劑均為分析純或優(yōu)級(jí)純；α-葡萄糖苷酶、4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖(上海源葉生物科技有限公司)；PBS緩沖液(北京索萊寶科技有限公司)。

水梔子于2016年1月采自河南省唐河縣，并經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)陳隨清教授鑒定為茜草科水梔子(Gardeniajasminoidesvar.radicans)的干燥成熟果實(shí)，藥材標(biāo)本(編號(hào)：20160109)存放于河南中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 提取與分離

水梔子(9.8 kg)粉碎后用50%含水丙酮組織破碎提取三次，過濾，合并提取液，45 ℃減壓濃縮得到總浸膏2.3 kg。浸膏加8 L水混懸，依次用等體積的石油醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇萃取5次，分別回收溶劑后得到石油醚部位(104.8 g)，乙酸乙酯部位(199.1 g)，正丁醇部位(650.2 g)。乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，薄層檢識(shí)合并后得到8個(gè)流分A1～A8。

A3(34.2 g)經(jīng)硅膠柱，石油醚-丙酮(100∶1→1∶1)梯度洗脫，得到10個(gè)流分段A3-1～A3-10。A3-3(120.5 mg)經(jīng)制備液相(63%甲醇-水)純化后得化合物15(34.2 mg，tR=19.5 min)。A3-9(1.3 g)經(jīng)Toyopearl HW-40C柱(甲醇)得到5個(gè)流分A3-9-1～A3-9-5。A3-9-5(40.1 mg)經(jīng)制備液相(35%甲醇-水)純化后得到化合物10(4.67 mg，tR=23.6 min)。A3-10(3.7 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱(70%甲醇-水)得到4個(gè)流分A3-10-1～A3-10-4。A3-10-2(38.8 mg)經(jīng)制備液相(50%甲醇-水)純化得到化合物9(2.6 mg，tR=28.7 min)。A3-10-3(71.3 mg)經(jīng)制備液相(48%甲醇-水)純化得到化合物2(6.6 mg，tR=20.3 min)。A3-10-4(204.9 mg)經(jīng)制備液相(45%甲醇-水)純化得到化合物7(4.4 mg，tR=37.9 min)、8(3.5 mg，tR=29.8 min)。

A4(21.0 g)經(jīng)MCI gel CHP-20柱，甲醇-水(10∶90→100∶0)梯度洗脫得到6個(gè)流分A4-1～A4-6。A4-1(12.6 g)經(jīng)ODS中壓柱，甲醇-水(30%→100%)梯度洗脫，得到4個(gè)流分A4-1-1～A4-1-4。A4-1-1(7.5 g)再經(jīng)ODS中壓柱，甲醇-水(10%→100%)梯度洗脫，得到15個(gè)流分A4-1-1-1～A4-1-1-15。A4-1-1-5(213.1 mg)經(jīng)Toyopearl HW-40C柱(30%甲醇-水)得到7個(gè)流分A4-1-1-5-1～A4-1-1-5-7。A4-1-1-5-4(16.7 mg)經(jīng)制備液相(30%甲醇-水)得到化合物16(5.5 mg，tR=23.0 min)。A4-2(2.1 g)經(jīng)ODS中壓柱，甲醇-水(10%→100%)梯度洗脫，得到12個(gè)流分A4-2-1～A4-2-12。A4-2-7(225.5 mg)經(jīng)制備液相(32%乙腈-水)得到化合物1(14.6 mg，tR=28.6 min)。A4-2-9(262.5 mg)經(jīng)硅膠柱(二氯甲烷-甲醇32∶1)得到化合物3(4.6 mg)。

A6(69.3 g)經(jīng)MCI gel CHP-20柱，甲醇-水(10%→100%)梯度洗脫得到5個(gè)流分A6-1～A6-5。A6-2(4.9 g)經(jīng)ODS中壓柱，甲醇-水(10%→100%)梯度洗脫，得到7個(gè)流分A6-2-1～A6-2-7。A6-2-3(730.5 mg)經(jīng)Sephadex LH-20柱(70%甲醇-水)得到2個(gè)流分A6-2-3-1和A6-2-3-2。A6-2-3-1(308.3 mg)經(jīng)制備液相(35%甲醇-水)純化后得到化合物14(2.7 mg，tR=12.8 min)。A6-2-3-2(139.6 mg)經(jīng)制備液相(35%甲醇-水)純化后得到化合物13(2.2 mg，tR=18.6 min)。A6-2-6(940.9 mg)經(jīng)硅膠柱(二氯甲烷-甲醇12∶1)得到4個(gè)流分A6-2-6-1～A6-2-6-4。A6-2-6-4(53.5 mg)經(jīng)制備液相(44%甲醇-水)純化后得到化合物4(8.4 mg，tR=23.4 min)。A6-3(10.6 g)經(jīng)ODS中壓柱，甲醇-水(10%→100%)梯度洗脫，得到9個(gè)流分A6-3-1～A6-3-9。A6-3-3(6.6 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(32∶1～1∶1)梯度洗脫，得到5個(gè)流分A6-3-3-1～A6-3-3-5。A6-3-3-1(99.6 mg)經(jīng)制備液相(45%甲醇-水)得到化合物12(3.5 mg，tR=18.6 min)。A6-3-6(2.3 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(12∶1→6∶1)梯度洗脫，得到4個(gè)流分A6-3-6-1～A6-3-6-4。A6-3-6-1(130.3 mg)經(jīng)Sephadex LH-20柱(70%甲醇-水)得到4個(gè)流分A6-3-6-1-1～A6-3-6-1-4。A6-3-6-1-1(25.8 mg)經(jīng)制備液相(50%甲醇-水)純化得到化合物11(4.2 mg，tR=20.2 min)。A6-3-6-1-3(12.8 mg)經(jīng)制備液相(32%乙腈-水)純化得到化合物17(4.0 mg，tR=18.8 min)。

A7(31.5 g)經(jīng)MCI gel CHP-20柱，甲醇-水(10%→100%)梯度洗脫得到13個(gè)流分A7-1～A7-13。A7-7(2.3 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(32∶1～1∶1)梯度洗脫，得到4個(gè)流分A7-7-1～A7-7-4。A7-7-3(1.7 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(10∶1～1∶1)梯度洗脫，得到7個(gè)流分A7-7-3-1～A7-7-3-7。A7-7-3-4(324.5 mg)經(jīng)Sephadex LH-20柱(70%甲醇-水)得到4個(gè)流分A7-7-3-4-1～A7-7-3-4-4。A7-7-3-4-3(15.1 mg)經(jīng)制備液相(50%甲醇-水)得到化合物5(4.0 mg，tR=22.1 min)、6(2.2 mg，tR=24.0 min)。

1.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選

按照參考文獻(xiàn)[7]中α-葡萄糖苷酶抑制活性測(cè)定方法并作適當(dāng)修改。用PBS緩沖液(0.01 M，pH 6.8)將α-葡萄糖苷酶配成0.5 U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液，將4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)配制成5.0 mM的pNPG溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。在96孔板中加入60 μL的PBS緩沖液、20 μL的α-葡萄糖苷酶溶液和20 μL的待測(cè)樣品溶液，在37 °C的恒溫水浴鍋中孵育10 min，再加入20 μL的pNPG溶液，在37 °C的恒溫水浴鍋中繼續(xù)孵育20 min，在酶標(biāo)儀405 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，每個(gè)待測(cè)樣品溶液均做3次平行重復(fù)。同時(shí)用阿卡波糖作陽性對(duì)照。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色粉末；ESI-MS：m/z383 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：12.82(1H，s，5-OH)，9.58(2H，s，3′，5′-OH)，7.00(2H，s，H-2′，6′)，6.85(1H，s，H-8)，6.67(1H，s，H-3)，3.93(3H，s，OCH3)，3.75(3H，s，OCH3)，3.72(3H,s，OCH3)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，163.8(C-2)，158.8(C-7)，152.7(C-9)，152.1(C-5)，151.2(C-3′，5′)，139.1(C-4′)，132.0(C-6)，125.6(C-1′)，105.9(C-2′，6′)，105.2(C-10)，104.1(C-3)，91.5(C-8)，60.1(OCH3)，60.0(OCH3)，56.5(OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8]，故鑒定化合物1為5，3′，5′-三羥基-6，7，4′-三甲氧基黃酮。

化合物2黃色粉末；ESI-MS：m/z383 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：12.97(1H，s，5-OH)，7.15(2H，br s，H-2′，6′)，6.90(1H，s，H-3)，6.58(1H，s，H-8)，3.87(3H，s，OCH3)，3.74(3H，s，OCH3)，3.73(3H，s，OCH3)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，163.2(C-2)，157.5(C-7)，153.6(C-9)，152.7(C-5)，152.5(C-5′)，150.9(C-3′)，139.6(C-4′)，131.4(C-6)，125.9(C-1′)，107.7(C-3)，104.2(C-10，2′)，102.1(C-6′)，94.3(C-8)，60.1(5′-OCH3)，59.9(4′-OCH3)，56.2(6-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9]，故鑒定化合物2為5，7，3′-三羥基-6，4′，5′-三甲氧基黃酮。

化合物3黃色粉末；ESI-MS：m/z383 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.07(1H，s，5-OH)，7.32(2H，br s，H-2′，6′)，6.97(1H，s，H-3)，6.66(1H，s，H-8)，3.87(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.75(3H，s，6-OCH3)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，163.8(C-2)，157.3(C-7)，152.7(C-5)，152.4(C-9)，148.2(C-3′，5′)，139.8(C-4′)，131.3(C-6)，120.4(C-1′)，104.3(C-2′，6′)，104.1(C-10)，103.1(C-3)，94.5(C-8)，60.0(6-OCH3)，56.4(3′,5′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10]，故鑒定化合物3為5，7，4′-三羥基-6，3′，5′-三甲氧基黃酮。

化合物4黃色粉末；ESI-MS：m/z449 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：8.05(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.88(2H，J=8.8 Hz，H-3′，5′)，6.39(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，5.24(1H，d，J=7.3 Hz，H-1′′)，3.68(1H，dd，J=11.8，2.2 Hz，H-6′′a)，3.52(1H，dd，J=11.8，5.5 Hz，H-6′′b)，3.42(2H，m，H-4′′，5′′)，3.20(2H，m，H-2′′，3′′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：179.5(C-4)，166.0(C-7)，163.1(C-5)，161.6(C-4′)，159.0(C-2)，158.5(C-9)，135.4(C-3)，132.3(C-2′，6′)，122.8(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，105.7(C-10)，104.0(Glc-C-1)，99.9(C-6)，94.7(C-8)，78.4(Glc-C-5)，78.0(Glc-C-3)，75.7(Glc-C-2)，71.3(Glc-C-4)，62.6(Glc-C-6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]，故鑒定化合物4為黃芪苷。

化合物5黃色粉末；ESI-MS：m/z617 [M+ Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：8.06(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.89(2H，J=8.8 Hz，H-3′，5′)，6.40(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，5.12(1H，d，J=7.2 Hz，Glc-H-1)，4.51(1H，d，J=1.3 Hz，Rha-H-1)，1.11(3H，d，J=6.2 Hz，Rha-H-6)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：179.4(C-4)，166.0(C-7)，163.0(C-5)，161.5(C-4′)，159.4(C-9)，158.6(C-2)，135.5(C-3)，132.4(C-2′，6′)，122.7(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，105.7(C-10)，104.6(Glc-C-1)，102.4(Rha-C-1)，99.9(C-6)，94.9(C-8)，78.1(Glc-C-3)，77.2(Glc-C-5)，75.7(Glc-C-2)，73.9(Rha-C-4)，72.3(Glc-C-4)，72.1(Rha-C-3)，71.4(Rha-C-2)，69.7(Rha-C-5)，68.5(Glc-C-6)，17.9(Rha-C-6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12]，故鑒定化合物5為山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6黃色粉末；ESI-MS：m/z617 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：8.09(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.88(2H，J=8.8 Hz，H-3′，5′)，6.41(1H，d，J=1.6 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=1.6 Hz，H-6)，5.04(1H，d，J=7.8 Hz，Gal-H-1)，4.51(1H，br s，Rha-H-1)，3.71(1H，dd，J=10.2，5.6 Hz，Gal-H-6a)，3.38(1H，dd，J=10.2，6.8 Hz，Gal-H-6b)，1.17(3H，d，J=6.2 Hz，Rha-H-6)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：179.6(C-4)，166.1(C-7)，163.0(C-5)，161.6(C-4′)，159.4(C-9)，158.6(C-2)，135.7(C-3)，132.5(C-2′，6′)，122.6(C-1′)，116.1(C-3′，5′)，105.6(C-10)，105.5(Gal-C-1)，101.9(Rha-C-1)，100.0(C-6)，94.9(C-8)，75.4(Gal-C-5)，75.1(Gal-C-3)，73.9(Rha-C-4)，73.0(Rha-C-2)，72.3(Rha-C-3)，72.1(Gal-C-2)，70.1(Gal-C-4)，69.7(Rha-C-5)，67.4(Gal-C-6)，18.0(Rha-C-6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物6為山奈酚-3-O-洋槐糖苷。

化合物7無色蠟狀固體；ESI-MS：m/z419 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：6.60(2H，br s，H-2′，6′)，6.58(2H，br s，H-2，6)，4.75(1H，d，J=5.9 Hz，H-7′)，4.31(1H，d，J=6.9 Hz，H-7)，4.08(1H，d，J=9.2 Hz，H-9′a)，3.76(1H，overlap，H-9′b)，3.75(1H，overlap，H-9a)，3.74(12H，s，3，5，3′，5′-OCH3)，3.35(1H，overlap，H-9b)，3.09(1H，t，J=8.6 Hz，H-8)，2.82(1H，m，H-8′)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：147.9(C-3，5)，147.8(C-3′，5′)，134.8(C-4)，134.2(C-4′)，131.5(C-1)，128.8(C-1′)，103.5(C-2，6)，102.9(C-2′，6′)，87.1(C-7)，81.4(C-7′)，70.2(C-9)，68.9(C-9′)，56.0(3，5，3′，5′-OCH3)，53.9(C-8)，49.3(C-8′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[14]，故鑒定化合物7為表丁香樹脂酚。

化合物8無色蠟狀固體；ESI-MS：m/z411 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.94(1H，d，J=1.6 Hz，H-2′)，6.80(1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-6′)，6.76(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.65(2H，br s，H-2，6)，4.71(2H，d，J=4.1 Hz，H-7，7′)，4.24(2H，m，H-9a，9′a)，3.85(2H，overlap，H-9b，9′b)，3.85(3H，s，3′-OCH3)，3.84(6H，s，3，5,-OCH3)，3.14(1H，m，H-8，8′)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：149.4(C-3，5)，149.1(C-3′)，147.3(C-4′)，136.2(C-4)，133.8(C-1′)，133.1(C-1)，120.1(C-6′)，116.1(C-5′)，111.0(C-2′)，104.5(C-2，6)，87.7(C-7′)，87.5(C-7)，72.7(C-9)，72.6(C-9′)，56.8(3，5-OCH3)，56.4(3′-OCH3)，55.6(C-8)，55.3(C-8′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，故鑒定化合物8為medioresinol。

化合物9白色無定形粉末；ESI-MS：m/z303 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，(CD3)2CO)δ：6.72(2H，br s，H-2′，6′)，4.66(1H，d，J=6.5 Hz，H-2)，4.52(1H，dd，J=9.6，6.8 Hz，H-8a)，4.37(1H，dd，J=9.6，2.0 Hz，H-8b)，4.28(1H，t，J=9.0 Hz，H-4a)，4.07(1H，dd，J=9.0，3.3 Hz，H-4b)，3.82(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.52(1H，m，H-5)，3.22(1H，m，H-1)；13C NMR(125 MHz，(CD3)2CO)δ：179.0(C-6)，148.8(C-3′，5′)，136.6(C-4′)，131.6(C-1′)，104.5(C-2′，6′)，87.2(C-2)，70.8(C-8)，70.7(C-4)，56.6(3′，5′-OCH3)，49.2(C-5)，46.8(C-1)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物9為浙貝素。

化合物10白色無定形粉末；ESI-MS：m/z273 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.95(1H，d，J=1.8 Hz，H-5)，6.82(1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-8)，6.77(1H，d，J=8.1 Hz，H-9)，4.65(1H，d，J=6.6 Hz，H-3)，4.53(1H，dd，J=9.6，6.9 Hz，H-1a)，4.35(1H，dd，J=9.6，2.0 Hz，H-1b)，4.28(1H，t，J=8.8 Hz，H-1′a)，4.07(1H，dd，J=8.8，3.4 Hz，H-1′b)，3.85(3H，s，6-OCH3)，3.54(1H，td，J=8.8，3.4 Hz，H-2′)，3.20(1H，m，H-2)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：181.1(C-3′)，149.2(C-6)，147.7(C-7)，132.3(C-4)，120.2(C-9)，116.2(C-8)，111.0(C-5)，87.8(C-3)，71.8(C-1)，70.9(C-1′)，56.4(6-OCH3)，49.4(C-2)，47.6(C-2′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，故鑒定化合物10為salicifoliol。

化合物11白色針晶；ESI-MS：m/z239 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.60(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，6.90(2H，br s，H-2，6)，6.38(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，3.87(6H，s，3，5-OCH3)，3.76(3H，s，4-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：169.6(C-9)，149.5(C-3，5)，147.0(C-7)，139.6(C-4)，126.6(C-1)，115.7(C-8)，106.9(C-2，6)，56.8(3，5-OCH3)，52.0(4-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，故鑒定化合物11為芥子酸甲酯。

化合物12白色無定形粉末；ESI-MS：m/z263 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：6.47(2H，br s，H-2，6)，3.81(6H，s，3，5-OCH3)，3.64(3H，s，4-OCH3)，2.83(2H，t，J=7.6 Hz，H-8)，2.60(2H，t，J=7.6 Hz，H-7)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：175.3(C-9)，149.2(C-3，5)，135.0(C-4)，132.8(C-1)，106.9(C-2，6)，56.7(3，5-OCH3)，52.0(4-OCH3)，37.0(C-7)，32.1(C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[19]，故鑒定化合物12為methyl 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzenepropanoate。

化合物13白色針晶；ESI-MS：m/z379 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.72(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，7.19(1H，d，J=1.7 Hz，H-2)，7.09(1H，dd，J=8.2，1.7 Hz，H-6)，6.81(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.39(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，5.56(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.88(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：167.7(C-9)，151.0(C-4)，149.4(C-3)，148.2(C-7)，127.6(C-1)，124.4(C-6)，116.6(C-5)，114.8(C-8)，111.9(C-2)，95.8(C-1′)，78.8(C-5′)，78.1(C-3′)，74.1(C-2′)，71.2(C-4′)，62.4(C-6′)，56.5(3-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，故鑒定化合物13為4-羥基-3-甲氧基桂皮?；?β-D-葡萄糖苷。

化合物14白色無定形粉；ESI-MS：m/z409 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.72(1H，d，J=15.8 Hz，H-3)，6.93(2H，br s，H-5，9)，6.43(1H，d，J=15.8 Hz，H-2)，5.57(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.89(6H，s，5，9-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：167.6(C-1)，149.5(C-6，8)，148.4(C-3)，140.0(C-7)，126.5(C-4)，115.3(C-2)，107.2(C-5，9)，95.9(C-1′)，78.9(C-5′)，78.1(C-3′)，74.1(C-2′)，71.2(C-4′)，62.4(C-6′)，56.9(6，8-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21]，故鑒定化合物14為1-芥子?；?O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物15無色蠟狀固體；ESI-MS：m/z395 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：7.52(2H，d，J=8.6 Hz，H-6，6′)，7.34(2H，d，J=2.0 Hz，H-3，3′)，7.11(2H，dd，J=8.6，2.0 Hz，H-5，5′)，1.32(18H，s，H-12，13，14，12′，13′，14′)，1.27(18H，s，H-8，9，10，8′，9′，10′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：147.6(C-2，2′)，147.1(C-1，1′)，138.5(C-4，4′)，124.4(C-3，3′)，124.0(C-5，5′)，119.1(C-6，6′)，34.9(C-7，7′)，34.5(C-11，11′)，31.4(C-8，9，10，8′，9′，10′)，30.2(C-12，13，14，12′，13′，14′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[22]，故鑒定化合物15為2,2′-oxybis(1,4-di-tert-butylbenzene)。

化合物16白色針狀結(jié)晶；ESI-MS：m/z151 [M - H]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.08(2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，6.71(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)，3.47(2H，s，H-7)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：176.2(C-8)，157.4(C-4)，131.3(C-2，6)，126.8(C-1)，116.2(C-3，5)，41.1(C-7)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23]，故鑒定化合物16為對(duì)羥基苯乙酸。

化合物17白色無定形粉末；ESI-MS：m/z353 [M+Na]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.63(1H，dd，J=8.3，1.9 Hz，H-6′)，7.60(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，6.85(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，5.67(1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，3.90(3H，s，3′-OCH3)，3.85(1H，dd，J=12.0，1.8 Hz，H-6a)，3.69(1H，dd，J=12.0，4.5 Hz，H-6b)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：166.8(C-7′)，153.4(C-4′)，148.8(C-3′)，125.7(C-6′)，121.9(C-1′)，116.0(C-5′)，113.9(C-2′)，96.1(C-1)，78.9(C-3)，78.1(C-5)，74.1(C-2)，71.1(C-4)，62.3(C-6)，56.5(3′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[24]，故鑒定化合物17為1-O-香草?；?β-D-葡萄糖。

2.2 α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)以阿卡波糖(acarbose)為陽性對(duì)照，對(duì)水梔子中分離所得含量較大的14個(gè)化合物(1～8、10～13、15和16)進(jìn)行了α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選。結(jié)果如表1所示，當(dāng)濃度為100 μM時(shí)，化合物1、2、4～7、12、13和16具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

表1 化合物1、2、4～7、12、13和16的α-葡萄糖苷酶抑制活性Table 1 The α-glucosidase inhibitory activity of compounds 1,2,4-7,12,13 and

3 討論與結(jié)論

水梔子作為梔子的變種，在我國(guó)有著廣泛的分布，植物資源非常豐富。本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代色譜技術(shù)對(duì)水梔子50%丙酮提取物的醋酸乙酯部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離得到17個(gè)化合物，化合物1～6為黃酮類化合物，化合物7～10為木脂素類化合物，化合物11～14為簡(jiǎn)單苯丙素類化合物，其中，化合物1、3、7、9～15、17為首次從梔子屬中分離得到，剩余化合物均為首次從該植物中分離得到。此外，還對(duì)所得的部分化合物進(jìn)行了α-葡萄糖苷酶抑制活性篩選，從結(jié)果來看，所得化合物對(duì)α-葡萄糖苷酶表的抑制活性較弱，但這并不能得出水梔子中的化學(xué)成分無α-葡萄糖苷酶抑制活性。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，目前關(guān)于梔子降血糖活性成分的報(bào)道主要集中于為環(huán)烯醚萜類成分[5,25,26]，為進(jìn)一步尋求其降糖活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，我們還將繼續(xù)研究其化學(xué)成分，并重點(diǎn)關(guān)注環(huán)烯醚萜類成分，以期獲得具有較好α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物。本研究?jī)?nèi)容豐富了水梔子的化學(xué)成分信息，也在一定程度上為進(jìn)一步開發(fā)其藥用價(jià)值提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。