UHPLC 法測(cè)定輻射后的酒石酸唑吡坦片含量

張 穩(wěn)，黃心慧，楊星瑞，周婷婷，高建義，李勇枝（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 安徽 合肥 001；.海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系,上海 004；.中國(guó)航天員科研訓(xùn)練中心,北京 100094）

在長(zhǎng)期空間飛行特殊環(huán)境中，保持航天員的健康是航天任務(wù)成功的首要目標(biāo)。因此，安全有效的藥物治療和藥品保障對(duì)航天員的健康至關(guān)重要。然而用于長(zhǎng)期太空飛行的藥物的穩(wěn)定性變化，不能用陸地環(huán)境穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果來(lái)判斷[1]，在陸地上藥物穩(wěn)定性主要受處方、溫度、光線、濕度和水分及包裝材料等因素影響。而航天環(huán)境受微重力、硬真空、濕度變化、溫差和輻射影響[2]，這些都可能導(dǎo)致藥物的不穩(wěn)定，其主要影響因素為空間輻射?？臻g輻射主要包括空間天然產(chǎn)生的非電離輻射和由人工產(chǎn)生的電離輻射。當(dāng)藥物暴露于任何電離輻射時(shí)，輻射導(dǎo)致藥物分子發(fā)生價(jià)層電子躍遷，與賦形劑發(fā)生相互作用，導(dǎo)致藥物的結(jié)構(gòu)發(fā)生一定變化，從而喪失藥理活性。

酒石酸唑吡坦(zolpidem tartrate)主要通過(guò)作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的苯二氮?受體，增強(qiáng)γ -氨基丁酸(GABA)系統(tǒng)的抑制機(jī)制，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)靜、催眠作用[3-4]。在載人航天特殊作業(yè)環(huán)境中，酒石酸唑吡坦可以用于治療睡眠障礙，緩解由其導(dǎo)致的焦慮等情緒，是“太空藥箱”的常用藥品之一[2]。

為了考察酒石酸唑吡坦片在太空環(huán)境中的穩(wěn)定性，以60Co 輻射為輻射源模擬太空的射線環(huán)境。輻射技術(shù)是20 世紀(jì)興起的一種滅菌及保鮮技術(shù)，是以Χ 射線、γ 射線等電離輻射產(chǎn)生的高能射線抑制病原生物的生長(zhǎng)而達(dá)到殺蟲(chóng)、殺菌等目的[5-6]。根據(jù)原中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布的《60Co 輻射中藥滅菌劑量標(biāo)準(zhǔn)》[7]和《美國(guó)藥典》42[8](USP42)對(duì)輻射滅菌的規(guī)定，選定了8、25、80 kGy 這3 個(gè)劑量，建立UHPLC 法測(cè)定不同劑量輻射下的酒石酸唑吡坦片的含量變化。實(shí)驗(yàn)通過(guò)60Co 輻射因素對(duì)航天藥物穩(wěn)定性的影響，從而預(yù)測(cè)太空環(huán)境中藥品的有效期，為今后航天藥品的制劑工藝、包裝儲(chǔ)存等提供必要的研究資料。

1 儀器與試劑

LC-2030 PLUS 高效液相色譜儀（日本島津公司）包括LC-20ADXR 溶劑輸送泵，SPD-20A 紫外檢測(cè)器，SIL-20AXR 自動(dòng)進(jìn)樣器和CTO-20A 柱溫箱；60Co 輻照裝置（海軍軍醫(yī)大學(xué)輻照中心）。

酒石酸唑吡坦片 (思諾思，杭州賽諾菲制藥有限公司，批號(hào)ET098)，酒石酸唑吡坦對(duì)照品(純度99.8%，武漢賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)201921)；甲醇(Merck 公司)，磷酸(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)，三乙胺(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)，均為色譜純;水為自制純化水（上海和泰儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 輻射樣品制備

將酒石酸唑吡坦片（含包裝）置于輻照環(huán)境中，設(shè)定輻射劑量，按照接收劑量為0、8、25、80 kGy進(jìn)行60Co 輻射，每天受輻照一次，于1 個(gè)月后取樣。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)定酒石酸唑吡坦對(duì)照品約10 mg，置10 ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得酒石酸唑吡坦對(duì)照品儲(chǔ)備液；再精密量取1 ml，置100 ml 容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為10 μg/ml 的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取0、8、25、80 kGy 輻射后的酒石酸唑吡坦片各10 片，精密稱(chēng)定并研細(xì)成藥粉。精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于酒石酸唑吡坦10 mg）置于10 ml 量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1 ml，置100 ml 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱 為Inertsil C18柱(3.0 mm×150 mm，3.0 μm)，流動(dòng)相為乙腈-甲醇-0.05 mol/L 磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH 值至5.5) (18∶26∶56)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，流速為0.7 ml/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10 μl，色譜圖中酒石酸唑吡坦的保留時(shí)間為3.92 min，理論塔板數(shù)按酒石酸唑吡坦峰計(jì)算大于5 000。精密稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度約為10 μg/ml 的對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積，計(jì)算峰面積RSD 為0.06%，表明儀器精密度良好。每個(gè)輻射強(qiáng)度取1 批供試品，按照“2.3”項(xiàng)下配制供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，對(duì)照品溶液及供試品溶液的色譜結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 酒石酸唑吡坦超高效液相色譜圖（254 nm）

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)酒石酸唑吡坦對(duì)照品儲(chǔ)備液適量置100 ml 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為5、10、20、40、80 μg/ml 的工作曲線溶液。按“2.4”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10 μl 進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。以酒石酸唑吡坦對(duì)照品濃度 (X，μg/ml)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為0.999 6，結(jié)果表明酒石酸唑吡坦在5～80 μg/ml 濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批未受輻射的酒石酸唑吡坦片樣品粉末（約相當(dāng)于酒石酸唑吡坦10 mg）6 份，照“2.3”項(xiàng)下制成供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10 μl 測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量，其平均含量104.2%，RSD 為0.87%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取輻射強(qiáng)度為8 kGy 的供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按含量測(cè)定方法測(cè)定，在0、1、2、5、8、12 h 分別進(jìn)樣10 μ1，記錄峰面積，峰面積RSD 為0.06%，表明溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批未輻射酒石酸唑吡坦片樣品粉末（約相當(dāng)于酒石酸唑吡坦10 mg）3 份，分別置于10 ml 量瓶中，再精密稱(chēng)取酒石酸唑吡坦對(duì)照品約8、10、12 mg 各3 份，分別置于上述3 個(gè)10 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1 ml，置 100 ml 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，每個(gè)濃度制備3 份。按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 酒石酸唑吡坦片加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 含量測(cè)定

每個(gè)輻射強(qiáng)度取1 批供試品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行3 份，在“2.4”項(xiàng)的色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積，按照外標(biāo)法計(jì)算酒石酸唑吡坦含量，其 0、8、25 和80 kGy 輻射量下酒石酸唑吡坦平均含量分別為105.1%、106.4%、102.7%和105.4%（表2）。

表2 酒石酸唑吡坦片含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 含量測(cè)定方法及流動(dòng)相確定

研究表明測(cè)定酒石酸唑吡坦原料藥和片劑含量的方法主要有分光光度法[9]、高效液相色譜法[10]和毛細(xì)管區(qū)帶電泳法[11]等。本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜法，相比于傳統(tǒng)的高效液相色譜法，其色譜柱粒徑更小，柱效更高，出峰較快，大大提高了靈敏度和檢測(cè)效率。

在建立超高效液相色譜法方法過(guò)程中，曾選用乙腈-0.05 mol/L 磷酸溶液和甲醇-0.05 mol/L 磷酸溶液，但是色譜峰不能完全分離，干擾性大。最終選用乙腈-甲醇-0.05mol/L 磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH 值至 5.5) (18∶26∶56)，試驗(yàn)結(jié)果表明，流動(dòng)相中加入適量三乙胺調(diào)節(jié)其pH 值，在pH4.0～6.5 的范圍內(nèi)，分離度隨pH 值增大而增大[12]，pH值<4.5 時(shí)，酒石酸唑吡坦峰形較差，pH 值>6.0 時(shí)，酒石酸唑吡坦峰拖尾嚴(yán)重。經(jīng)優(yōu)化，選擇pH5.5，其唑吡坦峰的對(duì)稱(chēng)性好，理論塔板數(shù)高，柱效更高。

3.2 輻射對(duì)藥物穩(wěn)定性影響

實(shí)驗(yàn)選定了8、25、80 kGy 不同輻射劑量下對(duì)酒石酸唑吡坦片穩(wěn)定性影響進(jìn)行考察，結(jié)果顯示隨著輻射劑量逐步增大，在其他條件相同的情況下，酒石酸唑吡坦片的主藥含量并沒(méi)有明顯變化，酒石酸唑吡坦片能保持相對(duì)穩(wěn)定。藥物含量指在制劑中藥物量是否符合要求，在藥物含量不變的情況下，藥物的有效性還與劑型的相關(guān)特性有關(guān)，如溶出度等。有研究表明，藥物受到一定劑量的輻射后，藥物的溶出度會(huì)發(fā)生改變[13]。后續(xù)將從不同輻射劑量的酒石酸唑吡坦片的溶出度、水分等做進(jìn)一步研究。