羥基紅花黃色素A通過抑制程序性壞死減輕小鼠重癥中暑引起的急性肺損傷

柳曉峰，張 爽，余讓輝，林曉萍，樊文浩，王玉晶，梁志立，謝維當(dāng)，劉亞楠，陳 輝

1南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，廣東 廣州 510515；2江門市中心醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，廣東 江門 529000

由于人為氣候變化，全球范圍內(nèi)嚴(yán)重?zé)崂说念l率有所增加，重癥中暑作為一種重癥熱相關(guān)疾病引起了全球衛(wèi)生系統(tǒng)和社會層面的廣泛關(guān)注［1］。重癥中暑（sHS）常合并多器官功能衰竭綜合征（MODS），死亡率高［2,3］。重癥中暑并發(fā)MODS最常見的是急性肺損傷（ALI）造成的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），重癥中暑引起急性肺損傷其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚［4］。程序性壞死為新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞死亡類型，同細(xì)胞凋亡一樣受細(xì)胞內(nèi)信號途徑的調(diào)控，我們團(tuán)隊(duì)前期研究結(jié)果表明熱打擊可導(dǎo)致肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生程序性壞死，從而導(dǎo)致急性肺損傷發(fā)生及發(fā)展［5］。

羥基紅花黃色素A（HSYA），HSYA是紅花黃色素的主要成分，一系列的研究表明HSYA具有心肌、腦、內(nèi)皮保護(hù)作用、抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗肝纖維化活性及抗腫瘤特性［6,7］，最近研究表明，HSYA可通過阻斷凋亡和自噬在重癥中暑中起神經(jīng)保護(hù)作用［8］，然而HSYA在重癥中暑肺損傷癥中作用尚未有研究報(bào)道。本研究進(jìn)一步明確了程序性壞死在重癥中暑肺損傷發(fā)生發(fā)展中的作用和地位，探討使用HSYA藥物治療是否可阻斷程序性壞死的發(fā)生從而有效改善急性肺損傷，更有助于揭示HSYA治療重癥中暑急性肺損傷的作用和機(jī)制，為臨床開展HSYA治療重癥中暑奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑

SPF級雄性6～8周齡C57BL/6J小鼠160只，購自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，清潔動物房中飼養(yǎng)，所有動物實(shí)驗(yàn)過程符合中國及南方醫(yī)院關(guān)于實(shí)驗(yàn)動物及福利的制度（倫理編號：NFYY-2019-176）。HSYA（上海莫奇生物科技有限公司），Nec-1(Sigma)，RIP1、RIP3、MLKL-s358、MLKL 及GAPDH 抗體（Cell Signaling Technology），Elisa試劑盒（Roche）。

1.2 重癥中暑小鼠模型的建立、熱適應(yīng)及預(yù)后觀察

1.2.1 動物準(zhǔn)備及分組 成年雄性C57BL/6小鼠，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22±1 ℃，12 h明暗循環(huán)，自由飲食飲水。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)具體分組如下：（1）重癥中暑小鼠造模前，分別以不同劑量HSYA腹腔內(nèi)注射（1.125、2.25、4.5 mg/kg）分別處理5 d，分為低，中和高劑量HSYA中暑組，單純中暑（HS）及正常對照（control）組，給予生理鹽水腹腔注射分別處理5 d，12只/組；（2）確定HSYA中劑量組為最佳治療劑量后，與Nec-1預(yù)處理組進(jìn)行比較，具體分組為：HSYA 中劑量組（2.25 mg/kg），Nec-1 預(yù)處理組（1 mg/kg），腹腔注射分別處理5 d，然后進(jìn)行熱打擊，單純中暑組及正常對照組給予生理鹽水腹腔注射處理5 d，8只/組。

1.2.2 適應(yīng)性訓(xùn)練 為了減少環(huán)境改變對小鼠造成的應(yīng)激影響，實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，為期2周，實(shí)驗(yàn)前3 d停止適應(yīng)性訓(xùn)練。適應(yīng)性訓(xùn)練內(nèi)容：（1）直腸熱電偶，內(nèi)容：將連接生理記錄儀的直腸熱電偶置入直腸內(nèi)，插入深度3 cm，留置2 min，1次/d；（2）人工熱氣候模擬艙，內(nèi)容：將實(shí)驗(yàn)小鼠連同鼠籠置于人工熱氣候模擬艙中，設(shè)置艙內(nèi)溫度為23 ℃，濕度（55±5）%，8 h/d。

1.2.3 重癥中暑小鼠模型 實(shí)驗(yàn)前20 min稱重，開始禁食、禁水，人工熱氣候模擬艙預(yù)熱至30 ℃。熱打擊方法是將小鼠置于預(yù)熱至30 ℃的人工熱氣候模擬艙，在30 min內(nèi)將艙內(nèi)溫度逐漸增加至39±0.5 ℃，相對濕度（65±5）%。監(jiān)測直腸溫度，使用直腸熱電偶測量系統(tǒng)，頻率為10 min/次。重癥中暑診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］：核心體溫達(dá)到42.7 ℃，維持時(shí)間超過1 min。達(dá)到重癥中暑診斷標(biāo)準(zhǔn)后，將小鼠移出人工熱氣候模擬艙，接受20 min全身降溫治療（酒精擦浴和喂食20 ℃冷水20 mL），繼續(xù)按照10 min/次的頻率監(jiān)測直腸溫度，直至恢復(fù)期72 h。對照組小鼠與重癥中暑組小鼠接受同步處理，不同的是對照組小鼠全程置于23 ℃和55%相對濕度的環(huán)境中。

1.2.4 評估各組熱耐受情況并觀察小鼠預(yù)后 參照文獻(xiàn)［9］計(jì)算熱打擊過程中熱負(fù)荷、脫水量、到達(dá)最高核心體溫時(shí)間、熱打擊結(jié)束后到達(dá)低體溫時(shí)間及低體溫持續(xù)時(shí)間評估各組動物熱耐受情況。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，觀察預(yù)后的實(shí)驗(yàn)組小鼠設(shè)置的實(shí)驗(yàn)終止點(diǎn)是熱打擊后3 d。

1.3 標(biāo)本的采集

實(shí)驗(yàn)動物的準(zhǔn)備和模型的構(gòu)建同前述，分組為：正常對照組，熱打擊組，HSYA預(yù)處理組及Nec-1預(yù)處理組，正常對照組6只，其余18只/組。

（1）分組分別于HS恢復(fù)期0、2、6、12、24 h時(shí)間點(diǎn)取出小鼠，其中2 h時(shí)間點(diǎn)取出6只，其中3只用于后續(xù)肺泡灌洗液測定，其余時(shí)間點(diǎn)均取出3只小鼠，采用水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，然后左心室穿刺采集血液樣本，剖取肺組織樣本；（2）常規(guī)方法分離血清，置于-80 ℃凍存；（3）肺組織組織樣本分兩部分，一部分4%甲醛溶液（40%甲醛溶液，滅菌注射用水按1∶9稀釋）中固定，另一部分置液氮中凍存。

1.3.1 血清樣本指標(biāo)檢測 ELISA法檢測血清中TNF-α、IL-6、HMGB1的濃度。

1.3.2 肺組織病理學(xué)檢查 石蠟組織樣本切片，厚度3 μm，按常規(guī)方法進(jìn)行HE染色。采用雙盲法，由兩名病理醫(yī)生閱片，評分。

1.3.3 BALF中蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、肺濕/干重比值、肺含水量及HMGB1的測定 各組小鼠于造模后2 h經(jīng)腹腔注射水合氯醛麻醉后，采集支氣管肺泡灌洗液（BALF），方法參照文獻(xiàn)［10］。取上述肺泡灌洗液離心后的上清液，用BCA 法測定蛋白含量。在沉淀中加入200μL紅細(xì)胞裂解液，1 min后加入1 mL預(yù)冷的PBS，4 ℃，1200 r/min離心10 min；棄上清，用1 mL預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞沉淀，取10μL進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，余液再次4 ℃，1200 r/min離心10 min。根據(jù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果決定需要?dú)埩舳嗌偕锨逯貞壹?xì)胞沉淀（白細(xì)胞計(jì)數(shù)為106/mL可用100μL上清液重懸后涂片3～5張），棄余上清，細(xì)胞懸液用于涂片（根據(jù)細(xì)胞總數(shù)決定涂片張數(shù)）；涂片后待玻片自然晾干，然后置于4%多聚甲醛溶液中固定10 min，隨后進(jìn)行瑞氏染色；在玻片標(biāo)本區(qū)域滴加瑞氏染色液4～8滴，將標(biāo)本完全蓋??；1～2 min后，滴加適量緩沖液（染液與緩沖液比例約為1：1.5），以注射器抽氣向玻片上輕輕打氣使染液和緩沖液混合均勻；10～15 min后用自來水沖洗，切忌水力過大，以流水滴入使染液及緩沖液自玻片邊緣溢出；晾干，光鏡下分類計(jì)數(shù)，鏡下計(jì)數(shù)300個(gè)以上細(xì)胞，求出中性粒細(xì)胞百分比，白細(xì)胞總數(shù)與百分比相乘，得出中性粒細(xì)胞的絕對計(jì)數(shù)值。上述支氣管肺泡灌洗結(jié)束后，離斷右肺，取右上、中肺，小心剔除肺外組織，生理鹽水漂洗，濾紙吸干肺表面液體，立即置于電子天枰上稱濕重，后放入60 ℃烘箱內(nèi)烘干48 h至恒重，稱重記下數(shù)值為干重，并計(jì)算肺組織濕重/干重比值及肺含水量[（肺濕質(zhì)量－肺干質(zhì)量）/肺濕質(zhì)量]。ELISA 法檢測肺泡灌洗液中HMGB1的濃度。

1.3.4 Western blotting 檢測RIP1、RIP3 及MLKL 蛋白表達(dá)及磷酸化水平 取出液氮中肺組織進(jìn)行碾磨，蛋白定量及Western blotting具體步驟參照文獻(xiàn)［10］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，生存率估計(jì)用Kaplan-Meier法，生存曲線比較用Log-rank法，多組數(shù)據(jù)比較采用應(yīng)用單因素方差分析，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度HSYA預(yù)處理對重癥中暑小鼠熱耐受的影響

成功建立中暑動物模型，并初步觀察不同濃度HSYA預(yù)處理對重癥中暑小鼠熱耐受的影響，到達(dá)最高核心體溫、低體溫時(shí)間、低體溫深度、低體溫持續(xù)時(shí)間、熱負(fù)荷及嚴(yán)重?zé)嶝?fù)荷為評價(jià)小鼠熱耐受程度的指標(biāo)，給予中劑量及高劑量HSYA預(yù)處理可明顯改善小鼠熱耐受能力，中劑量與高劑量無顯著差異（表1），故后續(xù)藥物預(yù)處理以中劑量（2.25 mg/kg）作為標(biāo)準(zhǔn)劑量。

表1 不同濃度HSYA預(yù)處理重度中暑小鼠核心體溫調(diào)節(jié)特征Table 1 Characteristics of core thermoregulation in severe heatstroke mice pretreated with different concentrations of HSYA(n=60)

2.2 HSYA及Nec-1預(yù)處理HS小鼠熱應(yīng)激及恢復(fù)期Tc調(diào)節(jié)特征

HS組小鼠在熱暴露期間，核心體溫呈三相式上升，表現(xiàn)為初始階段核心體溫快速上升，隨后表現(xiàn)為類似于平臺的緩升期，緩升期持續(xù)較長時(shí)間，此后進(jìn)入快速上升期，直至達(dá)到重癥中暑（42.7 ℃）診斷標(biāo)準(zhǔn)，后將小鼠轉(zhuǎn)移至室溫（23 ℃）。熱打擊各個(gè)時(shí)段，HS 組、HSYA+HS組及Nec-1+HS組小鼠核心體溫與對照組有顯著差異（P＜0.05）?；謴?fù)期，HS組及HSYA+HS組小鼠從艙內(nèi)拿出后體溫降低，體溫低于36 ℃，定義為中暑后低體溫，如表2所示與HS組相比，HSYA+HS組和Nec-1+HS組小鼠到達(dá)低體溫的時(shí)間，其熱暴露時(shí)間、到達(dá)低體溫時(shí)間、低體溫的深度和低體溫持續(xù)時(shí)間均存在顯著差異，HSYA+HS組和Nec-1+HS組無明顯差異（圖1）。

表2 HSYA及Nec-1預(yù)處理重度中暑小鼠核心體溫調(diào)節(jié)特征Table 2 Characteristics of core thermoregulation in severe heatstroke mice pretreated with HSYAand Nec-1(n=32)

圖1 各組小鼠在熱打擊過程中及恢復(fù)期核心體溫特征Fig.1 Characteristics of core temperature of the mice in each group during heat shock and recovery period.

2.3 HSYA及nec-1預(yù)處理對中暑小鼠預(yù)后及炎癥水平影響

HSYA及Nec-1預(yù)處理小鼠可顯著增加中暑小鼠72 h生存率，中暑小鼠恢復(fù)期2 h血清中TNF-α、IL-6及HMGB1水平明顯升高，給予HSYA及Nec-1預(yù)處理可明顯降低中暑恢復(fù)期2 hIL-6及HMGB1水平，HSYA可明顯降低中暑恢復(fù)期2 h血清中TNF-α水平，Nec-1預(yù)處理組與對照組相比無顯著差異（圖2）。

圖2 HSYA藥物及nec-1干預(yù)對重癥中暑小鼠72 h生存率及血中TNF-α、IL-6及HMGB1水平的影響Fig.2 Effects of HSYA and Nec-1 intervention on 72-h survival rate and serum levels of TNF-α,IL-6 and HMGB1 of the mice with severe heat stroke.A:Effects of HSYA and Nec-1 on survival rate of severe heat stroke mice.B-D:Serum levels of TNF-α,IL-6 and HMGB1 detected at 0,2,6,12,and 24 h during the recovery period using ELISA,respectively.*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001 HSYA+HS，nec-1+HS group vs HS group，ns:no significant difference).

2.4 HSYA及Nec-1可改善重癥中暑導(dǎo)致的急性肺損傷

對照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)正常，肺泡壁薄，肺泡腔內(nèi)無炎性細(xì)胞浸潤；而重癥中暑組肺泡上皮細(xì)胞腫脹，肺泡壁明顯增厚，肺泡腔內(nèi)大量滲出液，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、出血，間質(zhì)水腫，組織內(nèi)灶狀、片狀炎性細(xì)胞浸潤，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，嚴(yán)重者見大片肺泡萎陷不張及肺泡斷裂；HSYA及Nec-1預(yù)處理重癥中暑組肺泡結(jié)構(gòu)有所改善，肺泡間隔略有增寬，肺泡壁增厚有一定程度減輕，肺泡腔清晰，炎性細(xì)胞浸潤程度較重癥中暑組明顯減輕（圖3A）；HSYA及nec-1預(yù)處理降低重癥中暑小鼠肺泡灌洗液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量、肺水、肺濕干重比及HMGB1水平（圖3B、C）。

圖3 HSYA藥物干預(yù)對重癥中暑肺損傷的影響Fig.3 Effect of HSYA intervention on severe heatstroke-induced lung injury in mice.A: HE staining of the lung tissues collected at 2 h during the recovery period(Original magnification:×200).B: Counts of white blood cells and neutrophils and total protein contents in bronchoalveolar lavage fluid and lung water content and lung wet/dry weight ratio at 2 h during recovery.C:HMGB1 levels in the bronchoalveolar lavage fluid at 2 h.*P＜0.05,**P＜0.01 HSYA-HS group,Nec-1-HS group vs HS group.

2.5 重癥中暑小鼠肺組織發(fā)生程序性壞死及HSYA對程序性壞死的作用

中暑小鼠恢復(fù)期2 h肺組織中RIP1及MLKL磷酸化水平升高，并持續(xù)至恢復(fù)期12 h，RIP3表達(dá)未見明顯改變，MLKL水平于中暑恢復(fù)期6～12 h降低，MLKL-s358磷酸化水平中暑后2 h升高并持續(xù)至12 h（圖4A）。與HS組相比，HSYA+HS組MLKL-s358磷酸化水平降低（P＜0.05，圖4B）。

圖4 HSYA藥物預(yù)對重癥中暑小鼠肺組織中程序性壞死的影響所有柱狀圖要求同上Fig.4 Effects of HSYA pretreatment on necroptosis in lung tissues of severe heatstroke mice.A: Western blotting of RIP1,RIP3,MLKL and MLKL-s358 in lung tissues of heatstroke mice at 2,6,and 12 h during recovery.B:Western blotting of MLKL-s358 in the lung tissues at 6 h during recovery in control,HS and HSYA+HS groups.*P＜0.05,**P＜0.01 vs control group.

3 討論

在急性肺損傷中存在不同類型的細(xì)胞損傷包括凋亡、自噬和壞死，共同促進(jìn)ARDS 發(fā)生發(fā)展［11］。在ARDS的研究中細(xì)胞凋亡已被廣泛研究，但炎癥反應(yīng)在ARDS進(jìn)程中起重要作用，細(xì)胞壞死使細(xì)胞裂解物釋放到細(xì)胞外環(huán)境，包括細(xì)胞損傷相關(guān)分子模式（DAMP）如HMGB1，其可以觸發(fā)或增敏模式識別受體（PRRs）激發(fā)炎癥反應(yīng)［12,13］。然而，壞死在ARDS中很大程度上沒有被研究，是基于先前的研究表明壞死是不可逆的，并且不能被調(diào)控［14］。而程序性壞死為新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞死亡類型，同細(xì)胞凋亡一樣受細(xì)胞內(nèi)信號途徑的調(diào)控［15］。程序性壞死由一類死亡受體誘導(dǎo)，包括腫瘤壞死因子受體（TNFR）1，TNFR2，TLRs和Fas［16］。受體相互作用蛋白激酶(RIP)1和3參與信號通路的調(diào)控，形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合體即壞死小體（Necrosome），壞死小體中RIP3使MLKL發(fā)生磷酸化，并且磷酸化的MLKL向細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)使質(zhì)膜完整性喪失，隨后導(dǎo)致細(xì)胞損傷相關(guān)分子模式（DAMP）快速，主動和動態(tài)釋放（如HMGB1），并促進(jìn)炎癥進(jìn)展及繼發(fā)性肺組織損傷［17,18］。既往研究表明熱打擊肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞可發(fā)生程序性壞死，肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞在肺損傷的病理生理中起著非常重要的作用［5］。然而，肺上皮細(xì)胞作為肺部的第一道防線在介導(dǎo)肺疾病中同樣起著重要作用［11］，我們推斷中暑小鼠肺組織中可能發(fā)生了廣泛的程序性壞死，而不僅限于肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞。在本研究中我們使用RIP1活化抑制劑Nec-1預(yù)處理小鼠［19］，可明顯增加小鼠熱耐受性，改善72 h生存率及循環(huán)炎癥因子水平，同時(shí)對肺損傷也有改善作用，證實(shí)程序性壞死參與了重癥中暑的發(fā)生發(fā)展，同時(shí)在介導(dǎo)肺損傷中可能起著重要作用，我們提取肺組織蛋白檢測程序性壞死相關(guān)通路，發(fā)現(xiàn)在重癥中暑早期RIP1水平升高，下游的MLKL磷酸化水平升高，表明重癥中暑早期肺組織中就出現(xiàn)程序性壞死。有研究顯示，在重癥中暑小腸組織中檢測到RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL表達(dá)水平升高，抑制ROS生成可減輕程序性壞死從而預(yù)防腸道損害［20］；最新研究表明，RIP3依賴的程序性壞死在介導(dǎo)重癥中暑MODS起重要作用［21］，單獨(dú)熱應(yīng)激即可引起RIP3依賴的MLKL磷酸化，從而引起程序性壞死，敲除RIP3可阻斷上述生化反應(yīng)與細(xì)胞死亡［22］。在本研究中小鼠肺組織中RIP3表達(dá)水平并未出現(xiàn)明顯升高，故并未對RIP3的作用進(jìn)行進(jìn)一步研究，雖RIP3在肺組織中表達(dá)未出現(xiàn)明顯變化，但RIP3可能發(fā)生磷酸化及其他形式的活化，介導(dǎo)了下游壞死小體生成，在本研究中僅使用RIP1活化抑制劑探討了RIP1引起的程序性壞死在重癥肺損傷中的作用，但與上述文獻(xiàn)一致的是，下游的MLKL發(fā)生均發(fā)生磷酸化，肺組織發(fā)生程序性壞死。既往臨床和實(shí)驗(yàn)室研究證實(shí)，細(xì)胞外HMGB1濃度在HS早期階段即顯著升高，發(fā)揮早期炎癥介質(zhì)作用，與HS預(yù)后密切相關(guān)［23,24］。在本研究中也再一次證實(shí)在重癥中暑小鼠早期血清HMGB1水平升高，肺泡灌洗液中HMGB1水平也出現(xiàn)明顯上升，使用Nec-1可明顯降低肺泡灌洗液中HMGB1水平，表明肺組織早期出現(xiàn)程序性壞死對HMGB1釋放可能起著重要作用。

既往研究結(jié)果表明血必凈可減輕重癥中暑小鼠體內(nèi)炎癥反應(yīng)及內(nèi)皮細(xì)胞損傷，從而改善小鼠器官損傷及生存率［25,26］，血必凈還可通過抑制氧化應(yīng)激及促炎因子生成保護(hù)肺損傷［27］。紅花為中成藥血必凈注射液中重要成分，而紅花中的主要成分HSYA對內(nèi)皮細(xì)胞起保護(hù)作用［28］，HSYA 還可減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性呼吸窘迫綜合征［29］，HSYA在重癥中暑肺損傷的研究中尚未有文獻(xiàn)報(bào)道，促使我們對HSYA在重癥中暑急性肺損傷領(lǐng)域展開深入研究。本研究結(jié)果表明HSYA可明顯增加小鼠熱耐受性，改善72 h生存率及循環(huán)炎癥因子水平，同時(shí)通過降低肺濕干重比、肺含水量、肺泡灌洗液中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、蛋白含量及HMGB1水平從而改善肺組織損傷程度。既往研究表明羥基紅花黃色素A可通過抑制腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡在腦卒中中起保護(hù)作用［30］，在重癥中暑神經(jīng)損傷中羥基紅花黃色素A還可通過抑制自噬調(diào)控凋亡［8］，然而羥基紅花黃色素A對程序性壞死的調(diào)控作用少有文獻(xiàn)報(bào)道，在本研究中證實(shí)HSYA預(yù)處理小鼠可抑制MLKL磷酸化，表明HSYA可能通過抑制程序性壞死從而改善肺組織損傷及全身炎癥反應(yīng)。

綜上所述，本研究表明程序性壞死在介導(dǎo)重癥中暑急性肺損傷中起重要作用，首次證實(shí)HSYA藥物治療可通過抑制MLKL磷酸化阻斷程序性壞死的發(fā)生從而有效改善重癥中暑引起的急性肺損傷。