α位雙取代氯甲基萘同分異構(gòu)體的分離和檢測(cè)

張 麗，劉發(fā)貴，王東旭，劉思光，李鐵健，張貴民

（1. 山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，山東 臨沂 273400；2. 魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東 臨沂 276002）

1-氯甲基萘是一種無色油狀液體，被廣泛用作表面活性劑、減水劑、分散劑、原料藥的有機(jī)合成原料，其結(jié)構(gòu)見圖1[1]。由于生產(chǎn)工藝的不同，1-氯甲基萘中可能存在α位的雙取代化合物。以1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘為例，4號(hào)位置與5號(hào)位置同屬α位，使兩者的物理化學(xué)性質(zhì)十分接近。通過檢索“ChemSpider”網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(kù)，1, 5-二氯甲基萘（CAS號(hào)：1733-76-2）與1, 4-二氯甲基萘（CAS號(hào)：6586-89-6）物理化學(xué)特性除沸點(diǎn)和閃點(diǎn)存在細(xì)微區(qū)別外，其余均一致。兩者化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 氯甲基萘系列化合物結(jié)構(gòu)

目前未檢索到關(guān)于這兩種化合物或類似位置雙取代異構(gòu)體分析檢測(cè)的文獻(xiàn)，僅有關(guān)于單取代或α位和β位雙取代化合物檢測(cè)的報(bào)道[2-7]。本研究建立了1-氯甲基萘中1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的檢測(cè)方法，可為其類似α位或β位雙取代異構(gòu)體的分離檢測(cè)提供參考。

1 儀器和材料

1.1 儀器

Waters HPLC e2695（美國(guó)沃特世公司），配備柱溫箱，PDA檢測(cè)器；XPR10型電子分析天平（Mettler Toledo公司）；MS205DU型電子分析天平（Mettler Toledo公司）；以硅膠表面涂敷纖維素-三（4-甲基苯甲酸酯）為填充劑的CHIRALCEL?OJ-RH色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）。

1.2 試藥

1, 4-二氯甲基萘對(duì)照品（美國(guó)STD，批號(hào)：2085609B-SL-01）；1, 5-二氯甲基萘對(duì)照品（美國(guó)STD，批號(hào)：19856010B-SL-01）；1-氯甲基萘（安耐吉化學(xué)，批號(hào)：RQR2RKE2，RDR6DDH2）；甲醇為色譜級(jí)，乙腈為色譜級(jí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

空白溶劑為乙腈-水（80:20）；分別稱取1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘各約2 mg，置10 ml量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為兩者的對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述兩種對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 ml，置同一10 ml量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。精密量取1-氯甲基萘10 μl，置10 ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2 色譜條件

考慮到1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的化學(xué)性質(zhì)，首先選用具有代表性的3種不同類型的常規(guī)反相色譜柱，包括C18色譜柱（Phenomenex Kinetex XB-C18，4.6 mm×100 mm，2.6 μm）、苯基色譜柱（Phenomenex Kinetex Biphenyl，4.6 mm×100 mm，2.6 μm）和五氟苯基色譜柱（YMC Triart PFP，4.6 mm×250 mm，5 μm），分離效果見圖2A～C。由圖2A～C可見，兩者完全重合，未見任何分離趨勢(shì)。再次選用3種手性色譜柱，包括CHIRALPAK?AS-RH、CHIRALPAK?AD-RH和CHIRALCEL?OJ-RH（規(guī)格均為4.6 mm×150 mm，5 μm），分離效果見圖2D～F。由圖2D～F可見，AD-RH色譜柱無法使1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘分離，AS-RH色譜柱分離效果明顯不如OJ-RH色譜柱。綜上，選用以下色譜條件。色譜柱：CHIRALCEL?OJ-RH（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-水（87:13）；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)器：PDA（電二極管陣列檢測(cè)器）；掃描范圍：200～400 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。

圖2 色譜柱的篩選結(jié)果

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

利用PDA檢測(cè)器的全波長(zhǎng)掃描功能，得到1-氯甲基萘、1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的紫外掃描圖，見圖3。由圖3可見，三者均為較好的末端吸收，且在285 nm附近存在最大吸收，故暫定檢測(cè)波長(zhǎng)為285 nm。

圖3 1-氯甲基萘、1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘紫外吸收光譜

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 專屬性 分別取空白溶劑，1, 4-二氯甲基萘、1, 5二氯甲基萘和供試品溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果空白溶劑對(duì)兩者檢測(cè)無干擾，1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘分離良好，見圖3。

2.4.2 檢測(cè)限和定量限 分別取2.1項(xiàng)下1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘對(duì)照品儲(chǔ)備液，用溶劑逐步稀釋，得到兩者信噪比約為3的檢測(cè)限溶液，信噪比約為10的定量限溶液。結(jié)果表明，1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的檢測(cè)限分別為0.922，1.506 μg/ml，定量限分別為2.765，4.518 μg/ml。

2.4.3 線性與范圍 分別取2.1項(xiàng)下1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘對(duì)照品儲(chǔ)備液各0.2，0.6，0.8，1.0，1.2，1.5，2.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，得兩者的濃度梯度線性溶液，進(jìn)樣分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制線性回歸方程。1, 4-二氯甲基萘在2.765～46.080 μg/ml范圍內(nèi)，回歸方程為A=18 865.88C-2137.88，r=1.0000；1, 5-二氯甲基萘在4.518～45.180 μg/ml濃度范圍內(nèi)，回歸方程為A=18 717.74C-3881.22，r=1.0000。

2.4.4 回收率 按2.1項(xiàng)下方法，分別配制1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘濃度均為20 μg/ml的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；配制1-氯甲基萘濃度為20 mg/ml的溶液，作為供試品溶液；配制含1-氯甲基萘20 mg/ml，1, 4-二氯甲萘和1, 5-二氯甲基萘濃度均為20 μg/ml的混合溶液，作為100 %加標(biāo)溶液。同法配制含1-氯甲基萘20 mg/ml，1, 4-二氯甲萘和1, 5-二氯甲基萘濃度均為16 μg/ml的混合溶液，作為80 %加標(biāo)溶液；含1-氯甲基萘20 mg/ml，1, 4-二氯甲萘和1, 5-二氯甲基萘濃度均為24 μg/ml的混合溶液，作為120 %加標(biāo)溶液。取以上溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘平均回收率分別為95.34 %，101.74 %，RSD分別為1.4 %，1.3 %，表明本法的準(zhǔn)確度良好，符合要求，具體結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5 耐用性 按2.1項(xiàng)下方法，分別配制1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘濃度均為20 μg/ml的混合對(duì)照品溶液，1-氯甲基萘濃度為20 mg/ml的供試品溶液， 1-氯甲基萘濃度為20 mg/ml、1, 4-二氯甲萘和1,5-二氯甲基萘濃度均為20 μg/ml的混合溶液（加標(biāo)溶液）。分別于標(biāo)準(zhǔn)條件及分別改變波長(zhǎng)（±5 nm）、流速（±0.1 ml/min）、柱溫（±5 ℃）及流動(dòng)相中甲醇-水的比例（±2 %）的條件下，取以上溶液進(jìn)樣分析，1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘兩者分離度良好，平均回收率分別為94.13 %，98.31 %，RSD分別為3.4 %，1.8 %，表明本法的耐用性良好，符合要求。

3 討論

1-氯甲基萘作為重要的工業(yè)原料，用途廣泛，在某些特定情況下，對(duì)其純度要求較高。分析1-氯甲基萘的生產(chǎn)工藝[8]，雜質(zhì)最大可能是不同取代位置或取代基不同的物質(zhì)，其中大部分均可通過普通的分離分析方法即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。但以1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘為代表的類似α位或β位雙取代的異構(gòu)體檢測(cè)，國(guó)內(nèi)外尚未有報(bào)道，本研究為此類化合物的檢測(cè)提供了良好的參考依據(jù)。

本法采用手性色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相采用甲醇和水，普通高效液相色譜儀進(jìn)行分析。方法準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單快捷，可應(yīng)用于1, 4-二氯甲基萘和1,5-二氯甲基萘及其類似物的分離分析。同時(shí)由3種物質(zhì)的全波長(zhǎng)自外紫外掃描圖可知，方法中檢測(cè)波長(zhǎng)采用285 nm，如果更改為靠近末端吸收的檢測(cè)波長(zhǎng)，可有效增加方法的檢測(cè)靈敏度，這有待進(jìn)一步研究。