霍山石斛化學成分研究

趙宏蘇，許鳳清，陳簫簫，胡江苗，曾凡俊，彭代銀，吳德玲*

1安徽中醫(yī)藥大學 中藥研究與開發(fā)安徽省重點實驗室；2中藥飲片制造新技術(shù)安徽省重點實驗室，合肥 230012；

霍山石斛Dendrobiumhuoshanense為蘭科石斛屬多年生草本植物，歷史悠久，始載于西漢《范子計然》，后《名醫(yī)別錄》載“石斛生六安山谷水傍石上……”，其“形短只寸許，形如累米”，俗稱“米斛”，為“中華仙草之最”[1]，具益胃生津，滋陰清熱之功效[2]。現(xiàn)代研究表明，霍山石斛在抗腫瘤、降血糖、抗炎、保肝方面等表現(xiàn)出較好的生物活性[3-6]?；羯绞蚱洫毩⒌膮^(qū)域分布和特有的內(nèi)在品質(zhì)，致使野生資源匱乏，一度列為珍稀瀕危物種。歷經(jīng)數(shù)十年幾代人的努力，從原種保護、技術(shù)突破到產(chǎn)業(yè)發(fā)展，現(xiàn)已建成一萬畝栽培基地和3 000畝霍山石斛產(chǎn)業(yè)園，成功保護了這一珍稀物種。隨著霍山石斛林下仿野生栽培成功，以霍山石斛為原料的各類產(chǎn)品相繼涌現(xiàn)?；羯绞泻新?lián)芐和黃酮類成分，近期HPLC-ESI-MSn、TLC等技術(shù)已成功識別霍山石斛特征性的黃酮類成分夏佛塔苷[3,7]。但由于霍山石斛價格昂貴，其化學成分研究很少。本文以仿野生林下栽培的霍山石斛為研究對象，綜合利用多種色譜分離技術(shù)對其乙醇提取部位化學成分進行分離，并利用波譜技術(shù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Bruker ARX-500、Bruker Avance-III 600、Bruker Ascend 800 型核磁共振波譜儀(Bruker公司，瑞士)；Agilent 1100型高效液相制備色譜儀(Agilent公司，美國)；YMC半制備色譜柱(S-5 μm，12 nm；250 mm× 10.0 mm)。Sephadex LH-20(50 μm，GE公司)；MCI gel(北京賽譜銳思科技有限公司)；反相材料Rp-18(40～75 μm，富士硅化學株式會社，日本)；硅膠(100～200目、200～300目，青島海洋化工廠)；薄層色譜用硅膠板(GF254，青島海洋化工廠)；甲醇、乙腈(色譜純，瑞典歐森巴克化學公司)；其他試劑均為分析純；水為超純水；顯色劑為碘蒸氣或10%硫酸-乙醇溶液(105 ℃加熱顯色)或在紫外燈254 nm或365 nm處觀察熒光。

1.2 材料

霍山石斛于2017年7月購自安徽霍山縣長沖中藥材開發(fā)有限公司，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學劉守金教授鑒定為蘭科植物霍山石斛DendrobiumhuoshanenseTang et Cheng的干燥地上莖。

1.3 提取與分離

霍山石斛粗粉9.8 kg，乙醇滲漉提取，合并滲漉液，減壓回收溶劑至無醇味的流浸膏，加適量蒸餾水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3 次，減壓回收得石油醚部位(425 g)、乙酸乙酯部位(160 g)，正丁醇部位(340 g)。水層減壓回收至稠浸膏，為水部位。

取石油醚部位(400 g)，經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 100∶0→ 80∶20)梯度洗脫，TLC檢識合并相同的流份，得到Fr.2(73 g)。將Fr.2經(jīng)MCI柱色譜(甲醇-水 = 60∶40→100∶0)梯度洗脫，TLC檢識合并得到流份Fr.2.1～Fr.2.7。Fr.2.1(12 g)經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚∶丙酮 = 5∶1→1∶1洗脫得到Fr.2.1.1～Fr.2.1.10；取Fr.2.1.4(0.1 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)，硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 19∶1)得化合物25(5 mg)；Fr.2.1.9(0.6 g)依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)、制備柱色譜得到化合物29(15 mg，tR= 19 min，甲醇-水 = 10∶90)。將Fr.2.2(5.4g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 19∶1→3∶1)得到Fr.2.2.4，Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)洗脫后經(jīng)YMC半制備色譜柱得到化合物5(5 mg，tR= 14 min，乙腈-水 = 10∶90)和11(12 mg，tR= 9 min，甲醇-水 = 10∶90)；取Fr.2.3(1.2 g)依次經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 8∶1)和Sephadex LH-20(甲醇)得到化合物14(4 mg)。取Fr.2.5(0.1 g)經(jīng)YMC半制備色譜柱得到化合物26(5 mg,tR=11 min,乙腈-水=24∶76)和27(8 mg，tR= 12 min，乙腈-水 = 24∶76)。取Fr.2.6(0.2 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(氯仿-甲醇 = 1∶1)和YMC半制備色譜柱得到化合物15(8 mg，tR= 28 min，乙腈-水 = 15∶85)和化合物16(3 mg，tR= 21 min，乙腈-水 = 15∶85)。取Fr.2.7(2.1 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 49∶1→ 5：1)洗脫，得到流份Fr.2.7.1～Fr.2.7.7。將Fr.2.7.2經(jīng)YMC半制備色譜柱得到化合物6(3 mg，tR= 11 min，乙腈-水 = 30∶70)。取Fr.2.7.5經(jīng)YMC半制備色譜柱得到化合物7(5 mg，tR= 29 min，乙腈-水 = 23∶77)。取Fr.2.9(12.6 g)經(jīng)硅膠柱色譜(氯仿-丙酮 = 5∶1)洗脫，TLC檢識合并得到流份Fr.2.9.1～Fr.2.9.4，取Fr.2.9.1經(jīng)硅膠柱色譜(氯仿-丙酮 = 12∶1)洗脫后得化合物13(17 mg)。取Fr.2.9.2經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(氯仿-甲醇 = 1∶1)洗脫后得化合物24(3 mg)。取Fr.2.9.3依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(氯仿-甲醇 = 1∶1)、YMC半制備色譜柱得到化合物3(3 mg，tR= 17 min，乙腈-水 = 43∶57)和化合物9(2 mg，tR= 6 min，乙腈-水 = 43∶57)。

取乙酸乙酯部位(150 g)，經(jīng)硅膠柱色譜(200～300目)，使用二氯甲烷-甲醇(95∶5→80∶20)梯度洗脫，得到流份Fr.1～Fr.7。取Fr.2經(jīng)MCI柱色譜，甲醇-水梯度洗脫得到流份Fr.2.1～Fr.2.4。取Fr.2.3經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)洗脫后得到流份Fr.2.3.1～Fr.2.3.3，將Fr.2.3.1經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 = 2∶1)梯度洗脫得化合物1(32 mg)。將Fr.2.3.2經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 = 2∶1)梯度洗脫得化合物2(11 mg)。將Fr.2.3.3經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 = 3∶1)梯度洗脫得化合物23(8 mg)。取Fr.2.4經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)洗脫后得到流份Fr.2.4.1～Fr.2.4.3，將Fr.2.4.1經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 = 3∶1)梯度洗脫得化合物4(26 mg)。將Fr.2.4.2經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 = 17∶1)梯度洗脫得化合物28(5 mg)。

取正丁醇部位(320 g)，經(jīng)硅膠柱色譜(100～200目，二氯甲烷-甲醇 = 100∶0→65∶35)梯度洗脫，TLC檢識合并得到流份Fr.1～Fr.5。取Fr.2經(jīng)Rp-18柱色譜，采用甲醇-水梯度洗脫，TLC檢識合并相同流份，得Fr.2.1～Fr.2.3，將Fr.2.2依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 7∶1)洗脫后得到化合物21(14 mg)。將Fr.3經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 19∶1→ 4∶1)梯度洗脫，TLC檢識合并得到流份Fr.3.1～Fr.3.4。取Fr.3.1依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、Rp-18反相柱色譜(30%甲醇水)、硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 24∶1)洗脫后得化合物8(5 mg)和化合物20(7 mg)。取Fr.4經(jīng)MCI反相柱色譜，采用甲醇-水梯度洗脫，TLC檢識合并相同流份，得Fr.4.1～Fr.4.5，取Fr.4.2依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、Rp-18反相柱色譜(30%甲醇-水)、Sephadex LH-20柱色譜洗脫后得到化合物18(18 mg)。

取水部位樣品，經(jīng)大孔樹脂柱色譜，采用乙醇-水(水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇)洗脫，TLC檢識合并得到流份Fr.1和Fr.2(95%乙醇洗脫段)。取Fr.2經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇 = 90∶10→2∶1)洗脫后得到流份Fr.2.1～Fr.2.5。取Fr.2.2經(jīng)反復Rp-18反相柱色譜(42%甲醇-水)得化合物10(17 mg)和19(12 mg)。取Fr.2.3依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、Rp-18反相柱色譜(30%甲醇-水)洗脫得化合物17(4 mg)和12(5 mg)。取Fr.2.4依次經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、Rp-18反相柱色譜(35%甲醇-水)洗脫得化合物22(26 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z275 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.01(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，-6′)，6.74(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，-5′)，6.34(2H，s，H-2，-6)，3.83(3H×2，s，OCH3-3，-5)，2.78(4H，m，H-α，-α′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：153.7(s，C-4′)，148.8(s×2，C-3，-5)，133.8(s，C-4)，132.9(s，C-1)，132.8(s，C-1′)，129.7(d×2，C-2′，-6′)，115.1(d×2，C-3′，-5′)，105.1(d×2，C-2，-6)，38.4(t，C-α)，37.3(t，C-α′)，56.3(q×2，OCH3-3，-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[8]一致，鑒定該化合物為4，4′-二羥基-3，5-二甲氧基聯(lián)芐。

化合物2白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z245 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.13(1H，t，J= 7.8 Hz，H-5′)，6.74(1H，d，J= 7.8 Hz，H-6′)，6.66(1H，d，J= 7.8 Hz，H-4′)，6.32(1H，s，H-2′)，6.31(1H，s，H-6)，6.26(1H，s，H-2)，6.24(1H，s，H-4)，2.76(4H，m，H-α，-α′)，3.75(3H，s，OCH3-3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：160.8(s，C-3)，156.6(s，C-5)，155.5(s，C-3′)，144.5(s，C-1′)，143.6(s，C-1)，129.6(d，C-5′)，121.0(d，C-6′)，115.3(d，C-2′)，112.9(d，C-4′)，108.0(d，C-6)，106.9(d，C-2)，99.1(d，C-4)，37.7(t，C-α)，37.4(t，C-α′)，55.3(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[8]一致，鑒定該化合物為batatasin III。

化合物3白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z245 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.02(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，-6′)，6.74(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，-5′)，6.31(1H，s，H-6)，6.26(1H，s，H-2)，6.24(1H，s，H-4)，2.78(4H，m，H-α，-α′)，3.75(3H，s，OCH3-3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：160.8(s，C-3)，156.5(s，C-5)，153.7(s，C-4′)，144.5(s，C-1)，133.9(s，C-1′)，129.6(d×2，C-2′，-6′)，116.3(d × 2，C-3′，-5′)，108.0(d，C-6)，106.8(d，C-2)，99.0(d，C-4)，37.7(t，C-α)，37.4(t，C-α′)，55.3(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[8]一致，鑒定該化合物為5，4′-二羥基-3-甲氧基聯(lián)芐。

化合物4白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z331 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CDC13)δ：7.05(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，-6′)，6.82(1H，d，J= 7.8 Hz，H-6)，6.74(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，-5′)，6.65(1H，s，H-2)，6.63(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5)，4.08(2H，t，J= 6.0 Hz，H-9)，2.87(2H，t，J= 6.0 Hz，H-7)，2.60(2H，t，J= 7.8 Hz，H-8′)，2.55(2H，t，J= 7.8 Hz，H-7′)，1.87(2H，m，H-8)，3.86(3H，s，OCH3-3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：173.6(s，C-9′)，154.3(s，C-4′)，146.5(s，C-3)，143.7(s，C-4)，133.2(s，C-1)，132.3(s，C-1′)，129.4(d×2，C-2′，-6′)，121.0(d，C-6)，115.4(d×2，C-3′，-5′)，114.5(d，C-5)，111.0(d，C-2)，64.0(t，C-9)，36.3(t，C-8′)，31.8(t，C-7)，30.4(t，C-8)，30.2(t，C-7′)，55.9(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[9]一致，鑒定該化合物為二氫松柏醇二氫對羥基桂皮酸酯。

化合物5白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z181 [M + H]+；1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ：7.00(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2，-6)，6.68(2H，d，J= 8.6 Hz，H-3，-5)，2.80(2H，t，J= 7.5 Hz，H-7)，2.26(2H，t，J= 7.5 Hz，H-8)，3.64(3H，s，OCH3-9)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：175.3(s，C-9)，156.8(s，C-4)，132.7(s，C-1)，130.2(d×2，C-2，-6)，116.2(d×2，C-3，-5)，37.1(t，C-7)，31.2(t，C-8)，52.0(q，OCH3-9)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[10]一致，鑒定該化合物為對羥基苯丙酸甲酯。

化合物6白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z183 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.76(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.68(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5)，6.62(1H，dd，J= 7.8，1.8 Hz，H-6)，3.54(2H，t，J= 6.5 Hz，H-9)，2.57(2H，t，J= 7.8 Hz，H-7)，1.77(2H，m，H-8)，3.83(3H，s，OCH3-3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：150.0(s，C-3)，145.7(s，C-4)，135.1(s，C-1)，121.9(d，C-6)，116.2(d，C-5)，113.3(d，C-2)，62.4(t，C-9)，35.9(t，C-7)，32.8(t，C-8)，56.5(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[11]一致，鑒定該化合物為二氫松柏醇。

化合物7白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z197 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.80(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.69(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5)，6.64(1H，dd，J= 7.8，1.8 Hz，H-6)，2.81(2H，t，J= 7.8 Hz，H-7)，2.54(1H，t，J= 7.8 Hz，H-8)，3.83(3H，s，OCH3-3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：177.4(s，C-9)，149.0(s，C-3)，145.9(s，C-4)，133.9(s，C-1)，121.8(d，C-6)，116.3(d，C-5)，113.2(d，C-2)，37.5(t，C-7)，31.9(t，C-8)，56.5(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[12]一致，鑒定該化合物為二氫阿魏酸。

化合物8白色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z339 [M - H]-；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：9.62(1H，d，J= 8.0 Hz，-CHO)，7.63(1H，d，J= 15.8 Hz，H-7)，7.32(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2)，7.26(1H，d，J= 8.3 Hz，H-5)，7.22(1H，dd，J= 1.9，8.3 Hz，H-6)，6.73(1H，dd，J= 15.8，8.0 Hz，H-8)，4.99(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1′)，3.30～3.90(6H，m，H-2′～6′)，3.90(3H，s，-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：196.2(d，-CHO)，155.3(s，C-3)，151.2(s，C-4)，130.5(s，C-1)，128.4(d，C-7)，124.6(d，C-8)，117.4(d，C-6)，112.9(d，C-5)，108.1(d，C-2)，102.2(d，C-1′)，78.5(d，C-5′)，78.0(d，C-3′)，74.9(d，C-2′)，71.4(d，C-4′)，62.6(t，C-6′)，56.9(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[13]一致，鑒定該化合物為松柏醛-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z355 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，CD3OD)δ：6.53(2H，s，H-2，-6)，5.93(1H，ddt，J= 16.8，10.4，7.2 Hz，H-8)，5.09(1H，dd，J= 16.8，1.6 Hz，H-9a)，5.03(1H，dd，J= 10.2，1.6 Hz，H-9b)，4.80(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′)，3.77(1H，dd，J= 12.0，2.4 Hz，H-6′a)，3.65(1H，dd，J= 12.0，5.6 Hz，H-6′b)，3.39(2H，d，J= 7.2 Hz，H-7)，3.46(1H，m，H-3′)，3.33(2H，m，H-2′，-4′)，3.19(1H，m，H-5′)，3.82(3H×2，s，OCH3-2，-6)；13C NMR(200 MHz，CD3OD)δ：154.3(s×2，C-3，-5)，138.8(d，C-8)，138.4(s，C-1)，134.2(s，C-4)，116.3(t，C-9)，107.6(d×2，C-2，-6)，105.7(d，C-1′)，78.5(d，C-3′)，78.0(d，C-5′)，75.9(d，C-2′)，71.5(d，C-4′)，62.7(t，C-6′)，41.5(t，C-7)，57.1(q×2，OCH3-2，-6)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[14]一致，鑒定該化合物為4-烯丙基-2，6-二甲氧-苯基葡萄糖苷。

化合物10白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z389 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，D2O)δ：6.65(2H，s，H-2，-6)，3.90(1H，m，H-8)，3.58(1H，dd，J= 12.0，4.0 Hz，H-9a)，3.46(1H，dd，J= 12.0，6.4 Hz，H-9b)，2.80(1H，dd，J= 13.6，4.8 Hz，H-7a)，2.60(1H，dd，J= 13.6，8.8 Hz，H-7b)，4.95(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′)，3.75(1H，dd，J= 12.0，1.6 Hz，H-6′a)，3.64(1H，dd，J= 12.0，4.8 Hz，H-6′b)，3.81(3H×2，s，OCH3-3，-5)；13C NMR(200 MHz，D2O)δ：152.4(s×2，C-3，-5)，136.4(s，C-4)，131.9(s，C-1)，107.2(d×2，C-2，-6)，72.8(d，C-8)，64.9(t，C-9)，39.0(t，C-7)，103.1(d，C-1′)，76.4(d，C-3′)，75.8(d，C-5′)，73.8(d，C-2′)，69.5(d，C-4′)，60.6(t，C-6′)，56.3(q×2，OCH3-3，-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[15]一致，鑒定該化合物為erythrosyringoylglycerol-4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物11白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z489 [M - H]-；1H NMR(600 MHz，CD3OD，)δ：6.81(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.60(1H，d，J= 1.8 Hz，H-6)，5.92(1H，ddt，J= 16.8，10.2，6.6 Hz，H-8)，5.08(1H，dd，J= 16.8，1.8 Hz，H-9a)，5.08(1H，dd，J= 10.2，1.8 Hz，H-9b)，4.90(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，4.82(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′′)，3.29(2H，d，J= 7.2 Hz，H-7)，3.88(1H，dd，J= 12.0，1.8 Hz，H-6′a)，3.76(1H，dd，J= 12.0，2.4 Hz，H-6′′a)，3.69(1H，dd，J= 12.0，5.4 Hz，H-6′b)，3.66(1H，dd，J= 12.0，5.4 Hz，H-6′′b)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：154.4(s，C-3)，152.4(s，C-5)，138.8(s，C-8)，138.7(s，C-1)，135.5(s，C-4)，116.3(t，C-9)，112.1(d，C-6)，109.2(d，C-2)，41.4(t，C-7)，103.7(d，C-1′)，78.5(d，C-5′)，77.4(d，C-3′)，75.2(d，C-2′)，71.4(d，C-4′)，62.5(d，C-6′)，105.5(d，C-1′′)，78.5(d，C-5′′)，78.1(d，C-3′′)，75.8(d，C-2′′)，71.5(d，C-4′′)，62.7(d，C-6′′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[16]基本一致，鑒定該化合物為3，4，5-trihydroxyallylbenzene-3-O-β-D-glucopyranosyl-4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物12白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z597 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，DMSO-d6)δ：6.74(2H，s，H-2，-6)，6.70(2H，s，H-2′，-6′)，6.44(1H，d，J= 16.8 Hz，H-7′)，6.31(1H，dt，J= 16.8，5.6 Hz，H-8′)，4.85(2H，d，J= 5.6 Hz，H-9′)，3.72(3H×2，OCH3-3，-5)，3.71(3H×2，OCH3-3′，-5′)，4.86(1H，d，J= 8.0 Hz，H-1′′)；13C NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ：152.7(s×2，C-3′，-5′)，151.9(s×2，C-3，-5)，138.1(s，C-4)，135.4(s，C-4′)，133.3(s，C-1)，132.5(s，C-1′)，130.2(d，C-8′)，128.5(d，C-7′)，105.0(d×2，C-2，-6)，103.6(d×2，C-2′，-6′)，86.4(d，C-8)，71.2(d，C-7)，60.1(t，C-9)，61.5(t，C-9′)，102.9(d，C-1′′)，77.2(d，C-5′′)，76.5(d，C-3′′)，74.2(d，C-2′′)，69.9(d，C-4′′)，60.9(t，C-6′′)，56.3(q×2，OCH3-3′，-5′)，55.9(q×2，OCH3-3，-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[17]一致，鑒定該化合物為(7S，8R)syringylglycerol-8-O-4′-sinapyl ether 4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物13白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z169 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：9.68(1H，s，H-7)，7.08(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，7.05(1H，d，J= 1.8 Hz，H-6)，3.91(3H，s，OCH3-5)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：193.3(d，C-7)，150.0(s，C-5)，147.2(s，C-3)，142.7(s，C-4)，129.5(s，C-1)，112.6(d，C-2)，106.0(d，C-6)，56.8(q，OCH3-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[18]一致，鑒定該化合物為3，4-二羥基-5-甲氧基苯甲醛。

化合物14白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z139 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.87(2H，d，J= 8.4，Hz，H-2，-6)，6.80(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，-5)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：170.6(s，C-7)，163.4(s，C-4)，133.5(s，C-1)，133.1(d×2，C-2，-6)，116.3(d×2，C-3，-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[14]一致，鑒定該化合物為對羥基苯甲酸。

化合物15白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z151 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.42(1H，d，J= 9.0 Hz，H-3)，7.18(1H，dd，J= 9.0，1.8 Hz，H-4)，7.18(1H，d，J= 1.8 Hz，H-6)，5.28(2H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：173.8(s，C-1)，160.0(s，C-5)，139.7(s，C-7)，127.9(s，C-2)，124.6(d，C-3)，124.1(d，C-6)，111.0(d，C-4)，71.5(t，C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[19]一致，鑒定該化合物為5-hydroxylated isobenzofuran-1(3H)-one。

化合物16白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z183 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：9.83(1H，s，-CHO)，7.16(2H，s，H-2，-6)，3.96(3H×2，s，OCH3-3，-5)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：190.8(d，C-7)，147.3(s×2，C-3，-5)，140.8(s，C-4)，128.4(s，C-1)，106.7(d×2，C-2，-6)，56.5(q×2，OCH3-3，-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[20]一致,鑒定該化合物為3，5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛。

化合物17白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z153 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：9.81(1H，s，C-7)，7.41(1H，d，J= 8.2 Hz，H-6)，7.40(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，6.85(1H，d，J= 1.7 Hz，H-2)，3.89(3H，s，OCH3-3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：192.7(d，C-7)，158.3(s，C-3)，150.7(s，C-4)，129.1(s，C-1)，124.4(d，C-6)，117.0(d，C-5)，110.9(d，C-2)，56.4(q，OCH3-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[20]一致，鑒定該化合物為3-羥基-4-甲氧基苯甲醛。

化合物18白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z345 [M - H]-；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：6.38(2H，s，H-2，-6)，4.78(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，3.71(2H，m，H-6′)，3.40(1H，m，H-5′)，3.26(1H，m，H-3′)，3.20(1H，m，H-2′)，3.08(1H，m，H-4′)，3.74(3H×2，s，OCH3-3，-5)，3.59(3H，s，OCH3-4)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：154.5(s，C-1)，153.6(s×2，C-3，-5)，132.8(s，C-4)，94.7(d×2，C-2，-6)，101.5(d，C-1′)，77.8(d，C-3′)，77.3(d，C-5′)，73.7(d，C-2′)，70.6(d，C-4′)，61.3(t，C-6′)，60.6(q，OCH3-4)，56.2(q×2，OCH3-3，-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[14]一致，鑒定該化合物為3，4，5-trimethoxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside。

化合物19白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z285 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，CD3OD)δ：7.27(2H，d，J= 8.8 Hz，H-2,-6)，7.07(2H，d，J= 8.8 Hz，H-3，-5)，4.54(2H，s，H-7)，4.89(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′)，3.89(1H，dd，J= 12.0，2.4 Hz，H-6′a)，3.70(1H，dd，J= 12.0，5.6 Hz，H-6′b)，3.46(2H，m，H-2′，-4′)，3.43(1H，m，H-5′)，3.40(1H，m，H-3′)；13C NMR(200 MHz，CD3OD)δ：158.6(s，C-4)，136.8(s，C-1)，129.6(d×2，C-2，-6)，117.8(d×2，C-3，-5)，64.9(t，C-7)，102.6(d，C-1′)，78.1(d，C-3′)，78.0(d，C-5′)，75.1(d，C-2′)，71.5(d，C-4′)，62.6(t，C-6′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[21]一致，鑒定該化合物為天麻苷。

化合物20白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z419 [M + H]+；1H NMR(800 MHz，CDCl3)δ：6.51(4H，s，H-2，-2′，-6，-6′)，4.67(2H，d，J= 3.2 Hz，H-7，7′)，4.21(4H，m，H-9，9′)，3.03(2H，m，H-8，8′)，3.82(3H×4，s，OCH3-3，-3′，-5，-5′)；13C NMR(200 MHz，CDCl3)δ：147.4(s×4，C-3，-3′，-5，-5′)，134.5(s×2，C-4，-4′)，132.3(s×2，C-1，-1′)，102.9(d×4，C-2，-2′，-6，-6′)，86.3(d×2，C-7，-7′)，72.0(t×2，C-9，-9′)，54.6(d×2，C-8，-8′)，56.6(q×4，OCH3-3，-3′，-5，-5′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[14]一致，鑒定該化合物為丁香脂素。

化合物21白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z579 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，DMSO-d6)δ：8.26(1H，s，OH-4′)，6.65(2H，s，H-2′，-6′)，6.60(2H，s，H-2，-6)，4.97(1H，d，J= 4.8 Hz，H-7)，4.96(1H，d，J= 3.2 Hz，H-7′)，4.18(1H，dd，J= 7.2，2.4 Hz，H-9a)，4.16(1H，dd，J= 5.6，3.2 Hz，H-9′a)，3.80(1H，t，J= 4.0 Hz，H-9b)，3.78(1H，t，J= 4.0 Hz，H-9b′)，3.05(1H，m，H-8)，3.01(1H，m，H-8′)，3.76(3H×2，s，OCH3-3′，-5′)，3.75(3H×2，s，OCH3-3，-5)，4.88(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′′)，4.30(1H，dd，J= 12.0，6.4 Hz，H-6′′a)，3.60(1H，dd，J= 12.0，4.8 Hz，H-6′′b)，3.39(1H，m，H-3′′)，3.17(2H，m，H-2′′，-4′′)，3.11(1H，m，H-5′′)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：152.6(s×2，C-3，-5)，147.9(s×2，C-3′，-5′)，137.2(s，C-1)，134.8(s，C-4′)，133.7(s，C-4)，131.4(s，C-1′)，104.2(d×2，C-2，-6)，102.7(d×2，C-2′，6′)，85.4(d，C-7)，85.1(d，C-7′)，71.3(t×2，C-9，-9′)，53.6(d×2，C-8，-8′)，103.7(d，C-1′′)，77.2(d，C-5′′)，76.5(d，C-3′′)，74.2(d，C-2′′)，69.9(d，C-4′′)，60.9(t，C-6′′)，56.4(q×2，OCH3-3，-5)，56.0(q×2，OCH3-3′，-5′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[14]一致，鑒定該化合物為丁香脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物22白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z741 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，DMSO-d6)δ：6.66(4H，s，H-2，-2′，-6，-6′)，4.76(2H，d，J= 4.0 Hz，H-7′，-7′)，4.20(2H，m，H-9a，-9′a)，3.94(2H，d，J= 4.0 Hz，H-9b，-9b′)，3.15(2H，m，H-8，8′)，4.97(2H，d，J= 8.0 Hz，H-1′′，-1′′′)，3.84(2H，m，H-3′′，-3′′′)，3.76(2H，dd，J= 12.0，1.6 Hz，H-6b′′，-6b′′′)，3.65(2H，dd，J= 12.0，5.6 Hz，H-6a′′，-6a′′′)，3.46(2H，m，H-5′′，-5′′′)，3.39(4H，m，H-2′′，-2′′′，H-4′′，-4′′′)，3.79(3H×4，s，-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：154.6(s×4，C-3，-3′，-5，-5′)，139.6(s×2，C-4，-4′)，135.7(s×2，C-1，-1′)，105.4(d×4，C-2，-2′，-6，-6′)，87.3(d×2，C-7，-7′)，73.2(t×2，C-9，9′)，55.8(d×2，C-8，-8′)，104.9(d×2，C-1′′，-1′′′)，78.5(d×2，C-3′′，-3′′′)，77.9(d×2，C-5′′，-5′′′)，75.8(d×2，C-2′′，-2′′′)，71.5(d×2，C-4′′，-4′′′)，62.7(t×2，C-6′′，-6′′′)，57.2(q×4，OCH3-3，-3′，-5，-5′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[22]一致，鑒定該化合物為丁香脂素-4，4′-O-β-D-二葡萄糖苷。

化合物23白色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z273 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：12.15(1H，s，OH-5)，10.82(1H，s，OH-7)，9.61(1H，s，OH-4′)，7.30(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2′，-6′)，6.78(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3′，5′)，5.87(2H，s，H-6，-8)，5.42(1H，dd，J= 12.6，3.0 Hz，H-2)，3.24(1H，dd，J= 16.8，12.6 Hz，H-3αx)，2.68(1H，dd，J= 16.8，3.0 Hz，H-3eq)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：196.8(s，C-4)，167.3(s，C-7)，164.0(s，C-5)，163.4(s，C-9)，158.5(s，C-4′)，129.3(s，C-1′)，128.8(d×2，C-2′，-6′)，115.6(d×2，C-3′，-5′)，102.2(s，C-10)，96.3(d，C-6)，95.5(d，C-8)，78.9(d，C-2)，42.4(t，C-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[23]一致，鑒定該化合物為柚皮素。

化合物24淺黃色固體(甲醇)；ESI-MS：m/z169 [M + H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：5.92(2H，s，H-3，-5)，3.81(3H×2，s，OCH3-2，-6)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：189.4(s，C-4)，177.9(s，C-1)，159.4(s×2，C-2，-6)，108.1(d×2，C-3，-5)，57.2(q×2，OCH3-2，-6)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[24]一致，鑒定該化合物為2,6-二甲氧基對苯醌。

化合物25白色無定型粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z127 [M + H]+；1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ：9.52(1H，s，-CHO)，7.38(1H，d，J= 3.5 Hz，H-3)，6.58(1H，d，J= 3.5 Hz，H-4)，4.60(2H，s，H-6)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：179.5(d，C-1)，163.2(s，C-5)，153.9(s，C-2)，124.9(d，C-3)，110.9(d，C-4)，57.6(t，C-6)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[25]一致，鑒定該化合物為5-羥甲基糠醛。

化合物26白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z145 [M + H]+；1H NMR(800 MHz，CD3OD)δ：4.30(1H，m，H-4)，2.48(1H，m，H-3α)，2.34(1H，m，H-3β)，2.30(1H，m，H-2α)，2.16(1H，m，H-2β)，3.75(3H，s，OCH3-5)；13C NMR(200 MHz，CD3OD)δ：181.1(s，C-1)，174.5(s，C-5)，52.9(d，C-4)，30.3(t，C-2)，25.8(t，C-3)，57.1(q，OCH3-5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[26]一致，鑒定該化合物為tetrahydro-5-oxo-2-furancarboxylic acid methyl ester。

化合物27白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z144 [M + H]+；1H NMR(800 MHz，DMSO-d6)δ：7.99(1H，s，NH)，4.19(1H，dd，J= 8.8，4.8 Hz，H-5)，2.32(1H，m，H-3a)，2.14(1H，m，H-4a)，2.11(1H，m，H-4b)，1.98(1H，m，H-3b)，3.67(3H，s，COOCH3)；13C NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ：177.0(s，C-2)，173.4(s，COOCH3)，52.1(d，C-5)，28.9(t，C-3)，24.5(t，C-2)，54.7(q，COOCH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[27]一致，鑒定該化合物為焦谷氨酸甲酯。

化合物28黃色針狀結(jié)晶(甲醇)；ESI-MS：m/z265 [M + H]+；1H NMR(DMSO-d6，800 MHz)δ：8.37(1H，d，J= 4.8 Hz，H-3)，8.26(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5)，8.08(1H，d，J= 4.8 Hz，H-4)，7.81(1H，d，J= 7.3 Hz，H-8)，7.59(1H，t，J= 7.3 Hz，H-7)，7.28(1H，t，J= 8.0 Hz，H-6)，7.21(1H，d，J= 3.2 Hz，H-3′)，6.59(1H，d，J= 3.2 Hz，H-4′)，4.67(2H，s，H-6′)；13C NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ：157.2(s，C-5′)，152.6(s，C-1′)，141.4(s，C-8a)，138.7(d，C-3)，133.6(s，C-1)，130.9(s，C-9a)，129.9(s，C-4a)，128.9(d，C-7)，122.1(d，C-5)，121.1(s，C-4b)，120.2(d，C-6)，114.1(d，C-4)，113.6(d，C-8)，112.9(d，C-3′)，110.1(d，C-4′)，56.4(t，C-6′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[28]一致，鑒定該化合物為川芎哚。

化合物29白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z243 [M - H]-；1H NMR(800 MHz，CD3OD)δ：8.01(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6)，5.89(1H，d，J= 4.8 Hz，H-1′)，5.69(1H，d，J= 8.0Hz，H-5)，3.34～4.20(5H，m，H-glc)；13C NMR(200 MHz，CD3OD)δ：164.9(s，C-4)，151.1(s，C-2)，141.3(d，C-6)，101.3(d，C-5)，89.3(d，C-1′)，84.9(d，C-4′)，74.3(d，C-2′)，69.9(d，C-3′)，60.9(t，C-5′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[12]一致，鑒定該化合物為尿嘧啶核苷。

3 結(jié)論

本實驗從蘭科石斛屬植物霍山石斛中分離得到29個化合物，化合物類型涉及聯(lián)芐、簡單苯丙素、木脂素及其苷、苯甲酸衍生物等，其中聯(lián)芐類化合物為多種石斛的主要成分，前期研究表明該類化合物具有中等強度的細胞毒活性[29]。文中8個化合物首次從該屬植物中分離得到，從一定程度上揭示了霍山石斛與其他種石斛藥效物質(zhì)基礎(chǔ)存在著一定的差異。本文研究為霍山石斛活性成分后續(xù)研究及質(zhì)量控制提供參考和指導。